보고서 정보
주관연구기관 |
건국대학교 KonKuk University |
보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
|
발행년월 | 2013-08 |
과제시작연도 |
2012 |
주관부처 |
농림축산식품부 Ministry of Agriculture, Food and Rural Affairs(MAFRA) |
등록번호 |
TRKO201400000140 |
과제고유번호 |
1545003962 |
사업명 |
생명산업기술개발 |
DB 구축일자 |
2014-05-07
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초록
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다. 연구결과
연구 1: 우유내로 배출되는 유선상피세포의 효과적인 추출 방법 확립
- 우유 내 유선상피세포(MECs)에서 추출된 Total RNA는 높은 RNA Integrity Number를 보였음 (RIN; 7.8±1.0).
- Cytokeratin 8, β-casein, SCD1의 mRNA 발현수준은 RT-PCR로 측정되었으며, 이것들은 분리된 MECs에서 상당히 높은 발현수준을 보여주었음.
- 순도측정을 위한 marker로서 선택된 3개의 유전자 [lymphocyte-specific protein (LS
다. 연구결과
연구 1: 우유내로 배출되는 유선상피세포의 효과적인 추출 방법 확립
- 우유 내 유선상피세포(MECs)에서 추출된 Total RNA는 높은 RNA Integrity Number를 보였음 (RIN; 7.8±1.0).
- Cytokeratin 8, β-casein, SCD1의 mRNA 발현수준은 RT-PCR로 측정되었으며, 이것들은 분리된 MECs에서 상당히 높은 발현수준을 보여주었음.
- 순도측정을 위한 marker로서 선택된 3개의 유전자 [lymphocyte-specific protein (LSP1), hemoglobin subunit alpha (HBA) and hemoglobin subunit beta (HBB)]에 대한 MECs에서의 real time PCR 분석결과, mRNA 발현수준은 모든 유전자에서 우유 내 체세포 (MSC)보다 상당히 낮고, 비유 연구에서 흔히 사용되는 MAC-T cell (bovine mammary alveolar cell line)과 차이가 없었음.
- 분리된 MECs의 단백질발현 양상이 MAC-T cell과 매우 유사하였으며, 2-DE gel의 image에 albumin을 발견할 수 없었음.
- MECs추출 방법 중 immunomagnetic method에 의하여 분리된 MECs는 유선상피세포의 활성이 있었고, 완전히 분화된 유선포세포의 특성을 보였음. 이로써 비유생리연구에서 MECs의 사용은 유선의 biopsy없이 반복적인 sampling을 가능하게 하였음.
연구 2: 우유 유래 유선상피세포를 이용하여 cis9, trans11-CLA 합성 관련 단백질 발현량 검증 연구
- Soybean oil 처리구 (0.72±0.00%) 우유 내 cis-9, trans-11 CLA 함량은 대조구 (0.45±0.00%)보다 훨씬 높았고 (p<0.05), EPA함량은 soybean oil 처리구가 더 높았음 (p<0.05). 반면에 C18:1n9c (Oleic acid), C18:2n6c (Linoleic acid)의 함량은 대조구에 비하여 낮았음 (p<0.05).
- 선행 연구에서 발굴된 cis-9, trans-11 CLA synthesis에 관련 7개의 candidate proteins에 대한 MECs에서의 mRNA 발현양상을 조사한 결과 이들 7개의 protein들 중 GNPDA1, PGAM1의 RNA 발현수준이 선행연구결과와 동일하게 soybean oil 처리구보다 대조구에서 상당히 높은 수준임을 보이고 있음을 알 수 있었음 (Independent-samples T-test, p<0.05). 이 결과를 통해 SCD1과 GNPDA1, PGAM1이 2-DE 결과와 동일한 결과를 보이는 것을 다시 한 번 확인할 수 있었다. 아울러 SCD를 증가시켰을 때 SCD1의 발현이 TVA를 처리하였을 때와는 동일하게 감소함을 확인할 수 있었다.
- 이러한 결과는 본 연구를 통하여 확립된 분리 방법을 통하여 얻어진 MECs는 젖소의 유선조직과 같은 유전자 발현양상을 보이고 있음을 시사하고 있음.
연구 3: 우유 유래 유선상피세포를 이용하여 cis9, trans11-CLA 합성 관련 영양생리지표 발굴 연구
- 우유 내 cis9, trans-11CLA의 함량이 높은 시험구 (High, 1.02±0.038%)는 낮은 시험구 (Low, 0.59±0.042%)의 함량의 2배였고, Medium, High 시험구의 cis-9 C14:1/(cis-9C14:1 + C14:0)의 desaturation index는 Low 시험구보다 상당히 높았음 (p<0.010, p=0.016). 하지만, cis-9C16:1/(cis-9C16:1 + C16:0), cis-9C18:1/(cis-9C18:1 + C18:0)의 desaturation index 실험군 간 차이가 없었음. 유지방에서 Medium, High 실험군의 total PUFA는 Low 실험군보다 더 높은 반면 (p=0.000, p=0.007), SFA, MUFA, U/S. 에서는 뚜렷한 차이를 볼 수 없었다.
- 2-DE 분석결과 3종류의 시험구로부터 MECs에서 많은 수의 spot을 관찰할 수 있었고, 그 중 4개의 spot을 cathelicidin 5 (up-regulated), ZW10 interactor (down-regulated), annexin Ⅰ (down-regulated), kappa casein (down-regulated)으로 확인되었음.
Abstract
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Results:
In study 1, the results showed that the immunomagnetic method used in this study was effective. The isolated MECs were viable and exhibited the characteristics of fully differentiated alveolar cells. The total RNA extracted from the isolated MECs owned high RNA Integrity Number (RIN;7.8±
Results:
In study 1, the results showed that the immunomagnetic method used in this study was effective. The isolated MECs were viable and exhibited the characteristics of fully differentiated alveolar cells. The total RNA extracted from the isolated MECs owned high RNA Integrity Number (RIN;7.8±1.0). The mRNA expression levels of cytokeratin 8, β-casein and SCD1 were measured by RT-PCR and all of them had considerably high expression in the isolated MECs. In addition, another three selected genes lymphocyte-specific protein (LSP1), hemoglobin subunit alpha (HBA) and hemoglobin subunit beta (HBB) chosen as markers for purity testing were detected by real time PCR. Their mRNA abundance in our isolated MECs were all significantly lower than that in MSCs (P<0.05) and has no difference with that of MAC-T cells, a bovine mammary alveolar cell line commonly used in lactation research. Moreover, the protein expression profile of isolated MECs was highly similar to that of MAC-T cells and no albumin was found in the 2-DE gel image.
In study 2, the milk cis-9, trans-11 CLA content of control group (0.45±0.00%) was much lower than that of the soybean oil group (0.72±0.00%; P<0.05). The contents of C18:1n9c (Oleic acid) and C18:2n6c (Linoleic acid) in the soybean oil group were all lower than those of the control group (P<0.05) whereas the content of EPA was higher in the soybean oil group. Then seven previously found candidate proteins in our lab that may related to the cis-9, trans-11 CLA synthesis were validated in the isolated MECs. Results showed that among these seven proteins, the mRNA levels of GNPDA1 and PGAM1 (Independent-samples T-test, P<0.05) in the control were all significantly higher than those of the soybean oil group.
In study 3, the effects of the individual variation among dairy cows on the cis-9, trans-11 CLA synthesis and the related proteins were investigated. The milk cis-9, trans-11 CLA content of group High (1.02±0.038%) was about twice as high (P<0.05) as that of group Low (0.59±0.042%). The desaturation index cis-9 C14:1/(cis-9C14:1+C14:0) in groups Medium and High were all significantly higher than that in group Low (P=0.010 and P=0.016, respectively). However, neither the desaturation indexes cis-9C16:1/(cis-9C16:1+C16:0) nor cis-9C18:1/(cis-9C18:1+C18:0) were different among groups. In milk fat, the total PUFA of groups Medium and High was higher than that of group Low (P=0.000 and P=0.007, respectively) whereas no significant difference was observed for SFA, MUFA or U/S.Moreover, a number of differently expressed spots were observed in MECs from these three defined groups and four of them were identified as cathelicidin 5 (up-regulated), ZW10 interactor (down-regulated), annexin I (down-regulated) and kappa casein (down-regulated).
목차 Contents
- 표지 ... 1
- 제출문 ... 2
- 요약문 ... 3
- SUMMARY ... 6
- CONTENTS ... 8
- 목 차 ... 9
- 제 1 장 연구개발과제의 개요 ... 10
- 제1절 연구개발의 목적 ... 10
- 제2절 연구개발의 필요성 ... 10
- 제3절 연구개발의 범위 ... 12
- 제 2 장 국내외 기술개발 현황 ... 13
- 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 14
- 제1절 우유내로 배출되는 유선상피세포의 효과적인 추출 방법 확립 ... 14
- 제2절 우유 유래 유선상피세포를 이용하여 cis9, trans11-CLA 합성 관련 단백질 검증연구 ... 20
- 제3절 우유 유래 유선상피세포를 이용하여 cis9, trans11-CLA 합성관련 영양생리지표 발굴연구 ... 25
- 제 4 장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 29
- 제 5 장 연구개발 성과 및 성과활용 계획 ... 30
- 제1절 실용화·산업화 계획 ... 30
- 제2절 교육·지도·홍보 등 기술확산 계획 등 ... 31
- 제3절 특허, 품종, 논문 등 지식재산권 확보계획 등 ... 31
- 제4절 추가연구, 타연구에 활용 계획 등 ... 32
- 제 6 장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 33
- 제 7 장 연구시설‧장비 현황 ... 34
- 제 8 장 참고문헌 ... 35
- 연구개발보고서 초록 ... 37
- 끝페이지 ... 41
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