초록 ▼

(3) 연구결과
3-1. DNA 손상 신호에 의하여 Parkin의 핵 안으로의 이동
ㆍ Parkin 단백질은 SUNO interaction motif (SIM)를 통하여 SUMO와 결합할 수 있으며와 ATM과 Chk1/2에 의한 인산화 부위를 지님
3-2. Parkin과 상호결합하는 단백질 동정 및 확인
ㆍ 동정된 eEF1A1, eEF1A2, eEF1B2, Rev1, CLK2, PIAS, SUMO, UBC9, proteasome 구성 단백질 중 eEF1A1과 SUMO등이 Parkin과 상호결합하는 것으로 확인함

(3) 연구결과
3-1. DNA 손상 신호에 의하여 Parkin의 핵 안으로의 이동
ㆍ Parkin 단백질은 SUNO interaction motif (SIM)를 통하여 SUMO와 결합할 수 있으며와 ATM과 Chk1/2에 의한 인산화 부위를 지님
3-2. Parkin과 상호결합하는 단백질 동정 및 확인
ㆍ 동정된 eEF1A1, eEF1A2, eEF1B2, Rev1, CLK2, PIAS, SUMO, UBC9, proteasome 구성 단백질 중 eEF1A1과 SUMO등이 Parkin과 상호결합하는 것으로 확인함
3-3. Parkin-eEF1A1 상호결합
ㆍ 상호결합에 참여하는 domain 결정; eEF1A1의 GTP binding domain과 C 말단의 domain 3이 Parkin의 IBR (in between RING) domain과 결합
ㆍ eEF1A1의 N-말단 부위인 GTP binding domain이 결손된 발암성의 PTI(prostate-tumor inducing gene)와는 Parkin이 결합하지 못하여, GTP binding domain과 domain 3 모두가 있어야 Parkin과 결합할 수 있음
ㆍ Parkin에 의한 eEF1A1의 ubiquitination 확인
3-4. Mitophagy 유도 스트레스에 의한 Parkin-eEF1A1의 미토콘드리아로의 이동 및 공존
3-5. DNA 손상 신호에 의한 Parkin-eEF1A1의 핵 안으로의 이동
ㆍ Parkin은 UV에만 반응
ㆍ eEF1A1은 UV, etoposide 및 ionizing irradiation에 의하여 dose에 비례하여 핵으로 이동함
3-6. eEF1A1의 유전체 안정성 유지 기능 발굴
ㆍ eEF1A1가 knockdown된 경우, 이를 DNA 손상으로 세포가 인식함
ㆍ 이때, 특정 tRNA들과 exportin5가 핵에 축적됨
ㆍ eEF1A2 및 eEF1B2의 knockdown도 eEF1A1 knockdown과 유사한 결과를 야기함

Abstract ▼

(3) Results
3-1. Nuclear translocation of Parkin upon DNA damaging
ㆍ Parkin-SUMO interaction via SUNO interaction motifs (SIM) in Parkin
ㆍ Phosphorylation of Parkin by ATM and Chk1/2
3-2. Identification of novel proteins interacting with Parkin
ㆍ Parkin interacts with eEF1A1, eEF1A2,

(3) Results
3-1. Nuclear translocation of Parkin upon DNA damaging
ㆍ Parkin-SUMO interaction via SUNO interaction motifs (SIM) in Parkin
ㆍ Phosphorylation of Parkin by ATM and Chk1/2
3-2. Identification of novel proteins interacting with Parkin
ㆍ Parkin interacts with eEF1A1, eEF1A2, eEF1B2, and SUMO.
3-3. Parkin-eEF1A1 interaction
ㆍ determination of interaction domains in Parkin and eEF1A1; GTP binding domain and C-terminal domain 3 in eEF1A1 and IBR (in between RING) domain in Parkin
ㆍ GTP binding domain-deleted PTI (prostate-tumor inducing gene) type of eEF1A1 was not able to interact with Parkin, indicating that both GTP binding domain and domain 3 in eEf1A1 are required for its interaction with Parkin
ㆍ eEF1A1 is ubiquitinated by Parkin
3-4. Mitochondrial transloation and colocalization of Parkin-eEF1A1 in response to mitophagy stress
3-5. Nuclear translocation of Parkin-eEF1A1 in response to DNA damaging signal
ㆍ Parkin is only responsive to UV
ㆍ eEF1A1 is responsive to UV, etoposide and ionizing irradiation, in a dose-dependent manner.
3-6. A novel function of eEF1A1 in maintaining genomic integrity
ㆍ Depletion of eEF1A1 by silencing led to formation of γH2AX foci and nuclear accumulation of specific tRNAs and exportin5 proteins
ㆍ Depletion of either eEF1A2 or eEF1B2 caused formation of γH2AX foci and nuclear accumulation of specific tRNAs and exportin5 proteins, in the similar manner

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 2
• 목차 ... 3
• 연구개발사업 최종연구개발결과보고서 요약문 ... 4
• Project Summery ... 5
• 1. 연구과제의 최종 연구개발 목표 ... 6
• (1) 연구개발의 최종목표 ... 6
• (2) 연구배경 및 필요성 ... 6
• 2. 연구과제의 연구대상 및 방법 ... 10
• (1) 세포배양 ... 10
• (2) Plasmid transfection ... 10
• (3) 재조합 단백질 제조 및 순수분리 ... 10
• (4) Reporter assay ... 10
• (5) Chromatin immunoprecipitaion (ChIP) assay ... 10
• (6) Kinase assay ... 10
• (7) Ubiquitnation/Sumoylation assay ... 10
• (8) Immunostaining ... 10
• (9) nuclear tRNA measurement ... 10
• 3. 연구과제의 연구개발결과 ... 12
• (1) DNA 손상 신호에 의해 세포질에 대부분 존재하던 Parkin 단백질이 핵 안으로 이동한다 ... 12
• (2) Rev1과 Parkin은 효모에서는 결합하나, mammalian cell내에서는 결합하지 않는다 ... 13
• (3) Parkin은 eEF1A1과 결합하고 eEF1A1의 Ubiquitination을 매개한다 ... 14
• (4) 단백질 번역 후 변형의 일종인 Ubiquitination이 전사에 미치는 영향에 관한 연구 ... 15
• (5) Parkin과 결합하는 eEF1A1를 절편화한 후 면역침강법을 통한 상호작용에 관련된 수식화 부위 결정 ... 16
• (6) Parkin E3 ligase 활성 및 eEF1A1의 macroautophagy (mitophagy)와의 상호 작용 분석 ... 19
• (8) FIP200에 의한 암유발 단백질 β-catenin의 안정성 조절에 관한 연구 ... 21
• (9) eEF1A1의 knockdown은 DNA 손상 신호로 작용한다 → eEF1A1은 유전체 안정성 유지에 필요→ eEF1A family의 새로운 기능 발견 ... 23
• 4. 연구과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 30
• (1) DNA 손상 반응에서의 Parkin의 역할 ... 30
• (2) Parkin의 ubiquitnation 역할 ... 30
• (3) Parkin과 결합하는 eEF1A1의 유전체 안정성 유지 기능을 최초로 밝힘 ... 30
• (4) 그 밖의 연구 결과 ... 31
• 5. 연구과제의 연구성과 및 목표달성도 ... 32
• (1) 연구성과 총괄 ... 32
• (2) 연구성과 상세내역 ... 33
• (3) 연구개발과제의 목표달성도 ... 39
• 6. 연구과제의 활용계획 ... 40
• (1) 연구종료 3년까지 예상 연구성과 ... 40
• (2) 연구성과의 활용계획 ... 40
• 7. 참고문헌 ... 41
• 8. 첨부서류 ... 42
• 끝페이지 ... 43