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Kafe 바로가기주관연구기관 | 인하대학교 InHa University |
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보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 | 한국어 |
발행년월 | 2013-12 |
과제시작연도 | 2013 |
주관부처 | 보건복지부 [Ministry of Health & Welfare(MW)(MW) |
등록번호 | TRKO201400011518 |
과제고유번호 | 1465014511 |
사업명 | 한국인유전체분석기반연구(구.유전체실용화) |
DB 구축일자 | 2014-07-05 |
키워드 | Korean genome.Functional study.LC-MS/MS.Metabotype. |
DOI | https://doi.org/10.23000/TRKO201400011518 |
대사체는 생화학적 활성의 표현형을 가장 잘 나타내는 정량 가능한 소분자이고 또한 대사체의 프로파일은 유전인자의 발현정보와 조합하여 표현형 발현에 관한 생리학적인 많은 정보를 제공한다. 따라서 본 연구에서는 당뇨시료를 포함한 복합 질환관련 유전변이의 기능검증연구를 위하여 표적화된 대사체 분석법을 이용하여 특정 대사체들을 분석하였다. 이를 위해 본 연구팀은 총 3545개의 시료에 대해서 총 50개의 상용화된 키트를 이용하였다. 분석 방법은 혈청 10ul를 96 well plate 키트(AbsoluteIDQTMKit,
대사체는 생화학적 활성의 표현형을 가장 잘 나타내는 정량 가능한 소분자이고 또한 대사체의 프로파일은 유전인자의 발현정보와 조합하여 표현형 발현에 관한 생리학적인 많은 정보를 제공한다. 따라서 본 연구에서는 당뇨시료를 포함한 복합 질환관련 유전변이의 기능검증연구를 위하여 표적화된 대사체 분석법을 이용하여 특정 대사체들을 분석하였다. 이를 위해 본 연구팀은 총 3545개의 시료에 대해서 총 50개의 상용화된 키트를 이용하였다. 분석 방법은 혈청 10ul를 96 well plate 키트(AbsoluteIDQTMKit, Biocrates)를 이용하여 대사체들을 추출한 후 LC-MS/MS및 FIA-MS/MS 방법으로 아미노산등의 대사체들을 정량하였다. 키트 한 배치의 적합성 (Qaulity Assurance)평가는 MetValTM (Biocrates사 제공) 프로그램을 이용하여 검량선 및 Quality Control (QC)시료의 정확성 등으로 평가하였으며, plate to plate (batch to batch) 간의 적합성 평가는 전체 키트의 검량선 시료를 사용하여 40개 대사체 (amino acids & biogenic amine)를 대상으로 정밀성 및 정확성을 평가하였다. 그리고 18개 키트를 대상으로 Quality Control 시료 (혈청)로써 한 키트당 QC 시료 2개씩 총 36개의 QC시료를 기준으로 186개 대사체들의 농도 분포 및 Coefficient Variation (CV,%)값을 평가하였다. 그 결과 키트 각각의 적합성 평가는 평가기준을 모두 만족하였으며, 또한 키트간의 적합성도 정확성 및 정밀도가 모두 15% 이내로 매우 우수한 결과를 보였다. 최종적으로 36개의 QC시료를 기준으로 재현성 있는 농도값을 나타낸 139개의 대사체를 검증하였다. 향후 당뇨병 관련 질환과 관련된 대사체 (바이오마커)연구 및, 한국인 유전변이 기능연구를 위한 GWAS 분석결과에 이들 대사체들을 사용할 것을 제안 한다.
이와 같은 본 연구의 결과로, 재현성이 비교적 우수한 표적화된 대사체 분석 방법을 이용하여 유전변이 기능 연구 방법으로서 유용하게 활용될 것으로 예상되며 이들 연구 및 사업의 재현성 및 신뢰도를 높이는데 기여할 것으로 여겨진다.
The metabolites are small molecules that can be quantified and its profiling data provides information on gene function in combination with physiological traits.
In this study, we analyzed the specific metabolites using targeted metabolomics approach to functional verification of genetic variatio
The metabolites are small molecules that can be quantified and its profiling data provides information on gene function in combination with physiological traits.
In this study, we analyzed the specific metabolites using targeted metabolomics approach to functional verification of genetic variation related to complex diseases, including diabetes. The serum concentration of 3545 samples was measured using the AbsoluteIDQTM p180 Kit (BIOCRATES Life Sciences AG, Innsbruck, Austria). In brief, after centrifugation, 10 uL serum were inserted into a filter on a 96-well sandwich plate, which already contained stable isotope-labeled internal standards and then final extracts were analyzed by FIA-MS/MS and LC-MS/MS method. Metabolite concentrations were measured on 50 different plates. We established the precision and accuracy of each kit as well as the variation of plate to plate by performing analyses using calibrator and QC samples included on each plate. From this experiment, we found that the precision and accuracy of plate to plate is below 15%. We also verified 139 metabolites by analysing 36 QC serum samples. The average coefficient of
variation for the 139 metabolites was 11.4%. We suggest using the 139 metabolites for genetic variation functions of complex diseases.
As a result of this study, a targeted metabolomics method is expected to be useful for GWAS study.
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