초록 ▼

중간엽줄기세포가 종양세포의 증식에 영향을 미친다는 최근의 연구결과에 따라, 세포치료제의 특성평가시 암세포와의 상호 작용에 관한 평가법 마련이 절실하다. 이에 따라 본 과제는 MSC와 암세포 상호작용을 확인하기 위하여 공배양법 및 세포 특성변화를 확인하기 위한 다양한 시험법을 수행하였다.
실험에 사용한 중간엽줄기세포와 암세포는 가장 많이 연구되고 있는 중간엽줄기세포 3종류(지방유래 중간엽줄기세포, 제대혈유래 중간엽줄기세포, 양막유래 중간엽줄기세포)와 유방암세포 2종류(MCF-7, MDA-MB-2231)를 선정하였다. 상호 작용을

중간엽줄기세포가 종양세포의 증식에 영향을 미친다는 최근의 연구결과에 따라, 세포치료제의 특성평가시 암세포와의 상호 작용에 관한 평가법 마련이 절실하다. 이에 따라 본 과제는 MSC와 암세포 상호작용을 확인하기 위하여 공배양법 및 세포 특성변화를 확인하기 위한 다양한 시험법을 수행하였다.
실험에 사용한 중간엽줄기세포와 암세포는 가장 많이 연구되고 있는 중간엽줄기세포 3종류(지방유래 중간엽줄기세포, 제대혈유래 중간엽줄기세포, 양막유래 중간엽줄기세포)와 유방암세포 2종류(MCF-7, MDA-MB-2231)를 선정하였다. 상호 작용을 평가하기 위한 방법으로는 증식능, 이동성, 침윤성, 콜로니형성능, 세포자연사, 액틴 변화, 세포 분비물질 분석을 사용하였다.
중간엽줄세포의기 특성을 분석한 결과, ISCT 기준에 따라 부착성, 표면항원, 분화능에서 전형적인 중간엽줄기세포의 특성을 나타내었다.
본 연구를 통해 두 세포 간 상호작용을 평가할 수 있는, CM(Conditioned Medium)을 이용한 공배양법인 indirect co-culture를 확립하였다.
CM을 이용한 증식능, 이동성, 침윤성 시험에서 중간엽줄기세포에 의한 암세포의 특성 변화를 확인할 수 있었다. 즉 중간엽줄기세포와 암세포의 상호작용을 평가할 수 있는 증식능, 이동성, 침윤성, 콜로니형성능의 in vitro 시험법을 확립하였다. 또한 antibody array를 이용한 cytokine 분석법을 통해 cytokine 평가지표를 마련하였다.
결론적으로, 이번 연구과제를 통해 우리는 줄기세포치료제 허가심사시, 특성평가지표 근거를 마련하였으며 이는 줄기세포치료제의 안전성 확보에 기여할 것이다.

Abstract ▼

Many studied are elucidating that specific paracrine factors secreted by Mesenchymal stem cells(MSCs) affect the characteristics of the cancer cells. So It is necessary to prepare the accessing strategy of the safety issues induced by MSCs and cancer cell interactions. To verify MSCs and cancer cell

Many studied are elucidating that specific paracrine factors secreted by Mesenchymal stem cells(MSCs) affect the characteristics of the cancer cells. So It is necessary to prepare the accessing strategy of the safety issues induced by MSCs and cancer cell interactions. To verify MSCs and cancer cell interactions, we performed cell co-culture method and a variety of in vitro assays.
In this study, we choosed three kids of MSCs(abdomen adiposed-drived MSC, amniotic membrane-drived MSC, and umbilical cord matrix-drived MSC) and two kids of breast cancer cells(MCF-7 and MDA-MB-231). To verify the interactions, we performedel proliferation assay, wound healing assay, migration assay, invasion assay, colony formation assay, apoptosis assay, cytoskeleton, and human antibody cytokine assay.
When MSC characteristics was done according the ISCT(International Society for Cell Therapy) guidelines, adherence, surface marker expression pattern and differentiation potential were meets all acceptance criteria.
To verify MSCs and cancer cell interactions, we established indirect co-culture method by conditioned medium(CM).
We confirmed that proliferation assay, wound healing assay, migration assay, and invasion assay can reflect changes of the characteristics in cancer cells. As results we established in vitro assays to verify MSCs and cancer cell interactions. As additional the antibody array assay, we eatablished a valuation basis of cytokine
In conclusion, we established valuation basis of characteristics, requiring drug approval and review of stem cell therapy products. These our studies lead to contributed the safety assurance of stem cell therapy products.