초록 ▼

개발목표
계 획
-최초 유해세균에 대해 특이적으로 항균력을 보이는 Bacteriophage(Phage)를 자연 생태계에서 분리 · 동정 및 선별
-동정된 유용미생물의 효소분비능력, 항균력, 내담즙성, 내산성, one-step growth curve 등을 평가하여 선별과정을 거쳐 in vitro 상의 선별된 유용 미생물과 Bacteriophage의 복합제제의 항균력을 평가
-Salmonella spp., E. coli 등 장염유발 세균을 특이적으로 사멸시키는 Bacteriophage-유용미생물 복합제제의 배양액과

개발목표
계 획
-최초 유해세균에 대해 특이적으로 항균력을 보이는 Bacteriophage(Phage)를 자연 생태계에서 분리 · 동정 및 선별
-동정된 유용미생물의 효소분비능력, 항균력, 내담즙성, 내산성, one-step growth curve 등을 평가하여 선별과정을 거쳐 in vitro 상의 선별된 유용 미생물과 Bacteriophage의 복합제제의 항균력을 평가
-Salmonella spp., E. coli 등 장염유발 세균을 특이적으로 사멸시키는 Bacteriophage-유용미생물 복합제제의 배양액과 지방 및 단백질의 Spec이 월등한 발효 된 제과·제면 부산물에 흡착, 건조하여 양계를 대상으로 한 in vivo 상에서의 연구결과를 토대로 강력한 항균력, 면역 증강제, 비육촉진제를 목표로 하는 신개념 다기능성 사료첨가제를 개발
실적
- Salmonella spp. 3 종 E. coli 4 종 Proteus spp. 3 종
- Bacillus spp. 5 종 Yeast sp. 2 종 Lactobacillus 3 종 API, sequencing을 통하여 분리·동정 확보
- 유해 균주에 대한 11개의 Bacteriophage 분리
- Bacillus spp. group이 가장 효소 분비능력 및 내열성이 우수함을 확인
- 내산성 및 내열성이 우수한 Yeast 1종 확인
- Lactobacillus spp. 2종의 내열성, 내산성 효소 분비능이 탁월한 종 확보
- Bactriophage
– 복합 생균제제의 항균 효과 확인 24시간 유해세균 불검출 (10⁸ CFU/ml 감소)
- Bactriophage – 복합 생균제제의 경제성 고려하여 최고 효율 농도 확보
- Bactriophage – 복합 생균제제의 가금류 사양실험을 통한 성장률 증가 확인
- 가금류의 선천적 면역성(ROI, Phagocytosis, Lysozyme, SOD)증가 확인
- 대조군에 비하여 2배 이상의 면역력 상승효과 확인
- 가금류에 장내의 유해세균을 99% 이상 감소
정량적 목표항목 및 달성도
1. Bacteriophage 역가 Salmomnella gallinarum Salmonella typhimurium, Salmonella enteritidis 모두 10⁷ pfu/g 이상 검출 확인
2. 유익균 역가 Bacillus spp., Yeast spp., Lactobacillus spp. 모두 10⁷ pfu/g 이상 검출 확인
3. 유해균 역가 무 검출
4. 라이소자임 역가 대조군 4 U/ml, 실험군 15 U/ml
5. ROI의 생성 대조군 0.19 OD, 실험군 0.39 OD
6. 대식세포활성 대조군 23%, 실험군 45%
7 . Superoxide dismutase 활성 대조군 64%, 실험군 80%
정량적 목표 항목 및 달성도 수정사항
◦기 타 : 음수첨가제 개발 중(Bacteriophage, 유용미생물 첨가)
정량적 목표 항목 및 달성도 수정사항
목표 설정치는 대부분의 어류를 대상으로 본 연구기관에서 기도 출된 결과들을 참고로 설정
생물학적 결과 차이 :
1) 실험을 주관하는 실험자의 차이, 동일한 시약의 제조회사의 차이 및 실험을 수행하는 장소와 시간 동일한 실험이라 하더라도 큰 편차가 발생
2) 실험동물의 개체 차이 및 면역 반응의 차이
음성대조군에 비하여 상대적으로 높은 수치 보였으며, 통계학적으로도 유의성이 있는(P < 0.05)결과를 도출 하였고, 이는 모든 생물학적 연구논문에서 인정하는 100%의 연구 목표달성을 이루었다고 볼 수 있으며, 면역 증강에 있어서도 효과가 상당히 높음.
라이소자임 역가의 경우 대조군이 약 4 U/ml로 아주 낮은 수치를 보이고 있으며 실험군에서는 상대적으로 400% 이상 높은 15 U/ml의 결과수치를 보임으로써 P < 0.05의 유의성 있는 성공적 차이를 보임. (부록 참조.)
ROI의 생성의 경우 대조군(0.19) 대비 실험군(0.39)의 결과치는 200% 이상 높은 수치를 보였으며, 통계적 유의성 검정에서도 P < 0.01의 유의적인 차이를 확인. (부록 참조.)
대식세포의 활성의 경우 대조군(23%) 대비 실험군(45%)의 결과치는 200% 이상 높은 수치를 보이고 있으며, 통계적 유의성을 조사 결과에서도 P < 0.01의 차이(a와 c로 표현) 및 P < 0.05의 차이(a와 b 로 표현)로 모두 통계적 유의성 차이가 있음을 관찰. (부록 참조.)
기대효과
● Bacteriophage - 생균 복합제로 인한 항균력으로 질병 예방
● 가축의 소화율 상승, 및 면역력 증가로 생산성 향상
● 동물 약품 사용을 저감화함으로 생산비를 절감하여 축산농가의 소득을 증대
● 무 항생제 사육을 통한 친환경적 축산업으로 도모하고 안전한 먹거리를 소비자에게 공급함으로 소비자의 욕구 충족
적용분야
◦ 질병 개선제
- Bacteriophage- 생균 복합제로 인한 항균력
- 유산균은 우수한 정장작용 및 면역력 증강효과
- 장내 미생물 균총 강화
- 항생제 사용 감소(생산비 절감)
◦ 환경개선제
- 분뇨에 대한 악취 감소 (유해세균의 사멸로 인한 악취감소)
- 악취 저감화 장비(부대비용)의 비용 감소
- 작업환경 개선 효과
◦ 사육일령개선제
- 유용미생물의 소화효소 분비로 인한 가축의 소화율 상승
- 가축의 생산성을 향상
- 무 항생제 급여로 인한 안전한 축산물을 생산하는데 기여
- 발효된 제과분 이용으로 비육촉진 효과

Abstract ▼

Effective microorganism was separated to Jeonbuk area for Eco- feed additives development. We carry out primary separation in accordance with colony shape.
After primary separation, we carry out API kit and 16S-rRNA sequencing & 18S rRNA ITS region sequencing. The result Effective Microorganism w

Effective microorganism was separated to Jeonbuk area for Eco- feed additives development. We carry out primary separation in accordance with colony shape.
After primary separation, we carry out API kit and 16S-rRNA sequencing & 18S rRNA ITS region sequencing. The result Effective Microorganism was assured with Bacillus spp of 2 species, Yeast of 2 species, Lactobacillus spp of 3 species lastly.
Separation of pathogenic microorganism was carried out as above. The result was assured with salmonella spp of 3 species, E. coli of 4 species, proteus of 3 species lastly.
We have tested acid-resistants, resistants-biliary, heat-resistant, extracellular enzyme ability on effective microorganism which be made available as probiotics.
We make a choice B-3 of Bacillus spp., Y-2 of Yeast spp., L-2 and L-3 of Lactobacillus spp. that appear higly resistant and enzyme secrete ability. But the rest microorganism also was suitable for probiotics as a results of various tests.
Bacteriophage of 11 species which could kill Salmonella spp., E. coli., Proteus spp.
was separated from waste water and feces, normal water of 130 areas. Lytic Bacteriophage separated as podoviridae and siphoviridae has long round head and short tail and Another has round head and non-contractility tail morphologically.
All Gssp1, Gssp2, Gssp3 that could kill salmonella spp. was stable to pH 3 ~ 7 result of acid-resistant test. Also Gssp1 was stable to 50℃ more than 4 hour and Gssp2, Gssp3 was stable to 60℃ more than 6hour respectively result of heat-resistant test. These bacteriophge was lytic completely salmonella gallinarum, salmonella enteritidis, salmonella typhimurium that we receive from Korea Veterinary Culture Collection (KVCC) and E. coli which was isolated to natural was killed partially.
Bacteriophag-probiotics combination made lytic completely salmonella spp to in-vitro within 24 hour. Rate of growth and innate immunity(ROI, Phagocytosis, Lysozyme, SOD) test result on Bacteriophage-probiotics combination(BYL-ph) feed appeared highly result of administration with volume difference compared with control group. After careful consideration on economics and effectiveness, We established recruitment stock with 0.2% BLY-ph. We tested innate immunity and rate of growth for chick depending on addition agent(Bacteriophage, probiotics, Bacteriophage-probiotics combination) as set-up concentration and the result appeared high innate immunity values significantly compared with control group.
Also Salmonella spp was decreased significantly to 101 ~ 104 CFU/ml in attack experiment of chick compared with control group.
Bacteriophage-probiotics combination have an effect positively in broiler production and bring on innate immunity. The result, Stockbreeding farmhouse could reduce feed cost and could prevent a bacterial disease. Also bacteriophge-probiotics combination could replace antibiotic of means tested anti-bacterial test.