초록 ▼

B형 감염은 무증상 보균자에서부터 급성 또는 만성 간염, 치명적인 전격성 간염까지 다양한 간질환을 유발하는 B형 바이러스에 의한 만성적 간염의 병인으로서 숙주의 유전적 HLA의 표현형에 의한 면역체계의 문제점과 면역체계를 피하기 위한 바이러스의 변이를 들 수 있고, 본 과제에서는 이 두가지 문제점을 집중적으로 연구하고자 하였다.
본 연구에서 DQ와 DR의 HLA class II 유전자형을 PCR-SSOP 방법과 많은 수의 모집단을 가지고 정상 대조군과 비교함으로써 HLA 유전형과 B형 간염과의 관계를 연구분석하였다.

B형 감염은 무증상 보균자에서부터 급성 또는 만성 간염, 치명적인 전격성 간염까지 다양한 간질환을 유발하는 B형 바이러스에 의한 만성적 간염의 병인으로서 숙주의 유전적 HLA의 표현형에 의한 면역체계의 문제점과 면역체계를 피하기 위한 바이러스의 변이를 들 수 있고, 본 과제에서는 이 두가지 문제점을 집중적으로 연구하고자 하였다.
본 연구에서 DQ와 DR의 HLA class II 유전자형을 PCR-SSOP 방법과 많은 수의 모집단을 가지고 정상 대조군과 비교함으로써 HLA 유전형과 B형 간염과의 관계를 연구분석하였다.
그 결과 HLA-DQA1 에서는 HLA-DQA1*05가 환자군에서 21.2%로 대조군의 13.6%에 비해 유의하게 높았으며 (p=0.045), HLA-DRB1 에서는 HLA-DRB1*10이 환자군에서 3.0%로 대조군의 0.3%보다 높았고 (p=0.013), HLA-DRB1*12도 환자군에서 15.0%로 대조군의 8.0%보다 높았다(p=0.025).
따라서 한국인에서는 HLA-DQA1*05, HLA-DRB1*10, HLA-DRB1*12 등이 만성 B형 간염의 발병에 기여하는 유전적인 요인이 되는 것으로 생각할 수 있다.
본 연구의 정상비교군으로서 HLA의 분포를 살펴보면, HLA-DQA1 대립유전자의 경우에는 HLA-DQA1*01, *03, *05의 순이었고, HLA-DQB1의 경우에는 HLA-DQB1*03, *06, *05의 순이었다. 반면, HLA-DRB1의 경우에는 HLA-DRB1*O4, *08, *O2, 1*09의 순으로 기존의 연구결과와 많은 차이를 보였다.
만성간염환자와 보균자를 대상으로 혈청내 존재하는 바이러스 변이의 양태와 정도를 PCR증폭, 클론, 염기배열 순서결정으로 비교 분석한 결과 프로모터 부위에 매우 다양한 변이가 존재함을 밝혀내었다. 또한 다양성의 정도가 매우 높아서 50% 이상의 바이러스가 변이체이며, 돌연변이 정도는 각 프로모터 마다 상이하였다. X 프로모터인 경우 각 환자내 점돌연변이 정도가 가장 적었으며 결손변이 또한 발견되지 않았다. C 프로모터의 경우 HNF4 결합부위의 결손변이와 1762, 1764 점돌연변이였다. Sl 프로모터의 경우, 전사연자 결합부위인 HNF1 부위의 결손변이가 발견되었고, S와 S2 프로모터의 경우 여러 전사인자가 결합하는 부위인 nt 2984 to nt 3160에서 가장 다양한 결손 돌연변이가 발견되었다. 반면, 보균자의 경우에는 결손변이가 3명의 대상자중 하나의 프로모터에서 단 한개만 발견되었고, 점돌연변이도 매우 낮았으며 전사인자 결합부위에는 점돌연변이가 검출되지 않았다. 간염환자애서 보이는 프로모터 부위의 높은 변이는 바이러스의 발현 정도가 질병에 연관이 있음을 보여준다 하겠다.
본 연구결과는, B형 바이러스에 의한 만성적 간염의 병인으로서 숙주의 HLA-DQA1*05, DRB1*10, DRB1*12 유전형이 유전적 인자로서 작용하고 바이러스의 발현에 관여하는 프로모터의 변이의 빈도와 종류가 질병과 연관이 있음을 보여주었다. 즉, 만성간염은 숙주의 HLA와 바이러스의 변이형의 다양성의 상호작용임을 암시하고, 본 결과는 앞으로 만성간염의 진단과 치료 그리고 신약개발에 기여할 것으로 믿는다.

Abstract ▼

Hepatitis B virus can cause various liver diseases from asymptomatic carriers to acute, chronic hepatitis or fatal fulminant hepatitis. One of the factors that affect the disease can be the host HLA types. On the other hand, high mutation rates of the hepatitis B virus genome has been shown to be th

Hepatitis B virus can cause various liver diseases from asymptomatic carriers to acute, chronic hepatitis or fatal fulminant hepatitis. One of the factors that affect the disease can be the host HLA types. On the other hand, high mutation rates of the hepatitis B virus genome has been shown to be the cause of the persistent infection due to the escape from immune surveilance.
HLIn HBsAg-positive patients HLA-DQA1 HLA-DQA1*05 alleles were significantly higher in patients (13.6%; p=0.045), compare to normal controls (21.2%), Among HLA -DRB1 alleles, HLA-DRB1*10 allele is more frequent in patients, 3.0%, than that in normal controls, 0.3% (p=0.013). HLA-DRB1*12 allele frequency is also higher in patients, 15.0%, compared with that in normal controls, 8.0% (p=0.025). HLA -DQB1 alleles show no significant difference between patients and control, indicating that, in Korea, HLA-DQA1*05, HLA-DRB1*10, and HLA-DRB1*12 have a positive correlation with the HBsAg-positive patients, and may serve as a genetic factor in the pathogenesis of chronic hepatitis B. A haplotype HLA-DQA1 allele distributions are HLA-DQA1*0l, -DQA1*03, -DQA1*05 in order, and HLA-DQBl allele distributions are HLA-DQBl*03, -DQBl*06, -DQB1*05 in order, consistent to previous study.
However, HLA-DRB1 allele distributions, which were HLA-DRB1*04, -DRB1*08, -DRB1*02, -DRB1*09 in order, were considerably different from the previous.
The HBV in the sera of the two chronic active hepatitis patients were analyzed for the promoter sequence heterogeneity. The three promoters, C, pre-Sl and S, of HBV in each chronic patient revealed a high level of sequence heterogeneity. In most cases, the proportion of any particular clone in the total viral populations was less than 50%, showing high mutation rates.
HBV in each patient harbored variants with multiple mutations throughout promoters including 1762(A-to-T), 1764(G-to-A) double mutation in C promoter and deletions near CCAAT site in S promoter. Unlike other promoter regions, the X promoter region (from nt 985 to 1430) showed little sequence heterogeneity within a patient. However, the predominant viral clones in two patients were quite different from each other. In addition to mutations in promoter regions, a deletion mutation in the translation start codon was also found in pre-S1 gene. The mutations in viral promoters appear to be important maintaining persistent infection.
These results in this report have shown that the host HLA types, HLA-DQA1*05, HLA-DRB1*10, and HLA-DRB1*12, are highly related to the pathogenicity of chronic viral hepatitis and the mutations in viral sequences affect the persistent infection through mutations in viral promoters which then impair the balance of viral gene expressions.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 4
• 목차 ... 5
• 연구개발사업 최종보고서 요약문 ... 6
• Project Summery ... 7
• 총괄연구개발과제 연구결과 ... 8
• 1. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ... 8
• 2. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 결과 ... 15
• 3. 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 21
• 4. 총괄연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도 ... 24
• 5. 총괄연구개발과제의 활용계획 ... 27
• 6. 첨부서류 ... 28
• 제1세부연구개발과제 연구결과 ... 29
• 1. 제1세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ... 30
• 2. 제1세부연구개발과제의 연구대상 및 방법 ... 31
• 3. 제1세부연구개발과제의 최종 연구개발결과 ... 32
• 4. 제1세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 34
• 5. 제1세부연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도 ... 36
• 6. 제1세부연구개발과제의 활용계획 ... 37
• 7. 참고문헌 ... 38
• 제2세부연구개발과제 연구결과 ... 40
• 1. 제2세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ... 41
• 2. 제2세부연구개발과제의 연구대상 및 방법 ... 42
• 3. 제2세부연구개발과제의 최종 연구개발결과 ... 43
• 4. 제2세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 47
• 5. 제2세부연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도 ... 49
• 6. 제2세부연구개발과제의 활용계획 ... 50
• 7. 참고문헌 ... 51
• 끝페이지 ... 52