초록 ▼

○ 연구결과
지금까지 본 연구를 통하여 우리는 17개의 p58 KIR의 cDNA를 클로닝하였고 SSCP와 DNA 염기서열 분석으로 p58 repertoire가 개인 및 개인간에 매우 다양하다는 사실을 관찰하였으며 이 다양성의 기원을 DNA sequence 분석을 통하여 밝혀 내었다. 그리고 p58 KIR의 유전자구조와 p58 KIR 유전자가 여러개 존재한다는 사실을 genomic DNA cloning을 통하여 밝혀내었으며 또한 이들 유전자의 promoter 주위의 DNA sequence 분석을 통하여 어떻게 이들 유전자의 발현

○ 연구결과
지금까지 본 연구를 통하여 우리는 17개의 p58 KIR의 cDNA를 클로닝하였고 SSCP와 DNA 염기서열 분석으로 p58 repertoire가 개인 및 개인간에 매우 다양하다는 사실을 관찰하였으며 이 다양성의 기원을 DNA sequence 분석을 통하여 밝혀 내었다. 그리고 p58 KIR의 유전자구조와 p58 KIR 유전자가 여러개 존재한다는 사실을 genomic DNA cloning을 통하여 밝혀내었으며 또한 이들 유전자의 promoter 주위의 DNA sequence 분석을 통하여 어떻게 이들 유전자의 발현이 조절될지에 대한 실마리도 얻었다. 그리고 p58 KIR과 class I MHC 단백질 사이의 상호작용을 순수하게 정제된 단백질 레벨에서 밝혀내어 NK 세포가 어떻게 표적세포를 인식하는 지에 대한 기초 데이터를 확보하였다. 또한 p58 KIR의 단세포군 항체를 이용하여 NK 세포 및 T 세포에서의 p58의 발현양상을 분석하였고 여러 가지 costimulatory molecule들의 cDNA를 RT PCR 기법으로 클로닝하였으며 이들 costimulatory molecule들을 발현하는 세포주를 확립하여 이들 costimulatory molecule들이 NK 세포의 면역학적 기능에 어떠한 영향을 미치는지를 규명하였다.

Abstract ▼

p58 killer cell inhibitory receptors (KIRs) recognize HLA-C molecules on target cell surface and transmit an inhibitory signal to prevent cell-mediated cytotoxicity. p58 KIR family is composed of multiple receptors whose amino acid sequences are similar but their ligand specificity is different. How

p58 killer cell inhibitory receptors (KIRs) recognize HLA-C molecules on target cell surface and transmit an inhibitory signal to prevent cell-mediated cytotoxicity. p58 KIR family is composed of multiple receptors whose amino acid sequences are similar but their ligand specificity is different. However, it is not clear how diverse the repertoire of p58 KIR is, particularly in a single individual. To address this Question, we cloned cDNAs encoding the extracellular domain of p58 KlR from a single individual. We identified 12 different p58 KIRs suggesting that the repertoire in a single individual is highly diverse. Interestingly, seven of them have hybrid sequences of three previously reported p58 KIRs. Using an RNase protection assay, we demonstrated that the mRNA transcripts of the hybrid KIRs are present in PBMCs. We also identified four differently spliced forms of p58 KIR indicating that the repertoire is diverse in size as well as in sequence. We also isolated three independent clones from a human placenta genomic library and analyzed their genomic stru organization. We identified five partial KIR genes. in which each individual arranged in tandem within the genome as is often observed in the immun superfamily (IgSF). This data confirmed that the genetic basis of KIR diversity originates from multigenes arranged in tandem in the chromosome. Our st demonstrated the existence of diverse novel KIR genes. such as a putative p (2-2-2). a pseudoexon-containing gene (4-1-2/2-3). and a gene containing one I due to the in-frame stop codon by a one bp addition in exon 9 (4-1-1).
We also reported cDNA cloning and expression of p58 KIRs from a Korean blood donor, and demonstrate direct binding between recombinant soluble p58 KIRs and recombinant soluble HLA-C molecules. Native gel shift assay revealed that the p58 KIR-K6 and KIR-K7 binds both HLA-Cw3 and HLA-Cw6 molecules, but the p50 KAR-K1 binds neither of the HLA-C molecules. Interestingly, however, binding of HLA-C molecule by p58 KIR is affected by the antigenic peptide bound on the MHC molecule, suggesting that the p58 KIR binding to HLA-C molecule may be dependent on the peptide. In addition, the binding interaction requires the presence of both p58 Ig domains, suggesting that the binding mode of HLA-C and p58 KIR may have some similarity with that of neonatal Fc receptor and Fc fragment of antibody, and may be distinct from that of TCR and MHC.
We also cloned human cDNAs CTLA-4, CD27, CD80, CD95, LAG-3 and CD40 genes by using RT-PCR technique and then Ig fusion proteins of these (CTLA4Ig, CD27Ig, CD80Ig, CD95Ig, LAG3Ig and CD40Ig) were produced in CHO-kl cell. In NK proliferation assay using these fusion proteins, we found that maximum inhibition was achieved' by blocking CD27-CD70 interaction and CD95-CD160 interaction did no effect on NK proliferation. And NK inhibitory activity of LAG3Ig was much more potent than that of CTLA4Ig, It seemed that LAG3 and its interaction with cauter-receptor haye significant role in NK proliferation although the mechanism is unknown. In NK target cell killing assay both of CTLA4Ig and CD27Ig inhibited killing activity of NK cell and the level of inhibition of the later was higher than that of the former.

목차 Contents

• 표 지 ... 1
• 연구개발 최종보고서 ... 3
• 제 출 문 ... 4
• 요 약 문 ... 5
• 영 문 요 약 문 ... 9
• 목 차 ... 10
• 제 1 장 서론 ... 11
• 제 2 장 국내·외 기술개발 현황 ... 13
• 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 20
• 제 1 절. 제 1 세부과제 ... 20
• 제 2 절. 제 2 세부과제 ... 26
• 제 3 절. 제 3 세부과제 ... 28
• 제 4 절. 제 4 세부과제 ... 32
• 제 5 절. 제 5 세부과제 ... 39
• 제 4 장 연구개발목표 달성도 및 대외기여도 ... 65
• 제 5 장 연구개발결과의 활용성과 및 계획 ... 66
• 제 6 장 기타 중요변경사항 ... 69
• 제 7 장 참고문헌 ... 70
• 최종보고서 요약(초록) ... 74
• 끝페이지 ... 74