초록

○ 연구결과
- PG, E1S 및 E1G 측정을 위한 면역분석법(TR-FIA) 개발 완료
- 임신/비임신 진단키트 제조

Abstract ▼

Early diagnoses of pregnancy for animal, which are swine and bovine, have an effect on an increase income of a farmhouse by stock of productivity. In addition, the technology relative to this diagnosis can apply to other diagnosis of disease or study of life science. We can analysis various hormones

Early diagnoses of pregnancy for animal, which are swine and bovine, have an effect on an increase income of a farmhouse by stock of productivity. In addition, the technology relative to this diagnosis can apply to other diagnosis of disease or study of life science. We can analysis various hormones and trace elements by development and application of a new immunoassay, DELFIA. Measurement of urinary E1S concentration by the immune assay helps to make early diagnosis of pregnancy test kit and industrialization of them. Moreover we also can exam changes on metabolism of urine between pregnant and non-pregnant bovine then expect the technical development for an early diagnosis of bovine pregnancy. In particular a development of early diagnosis of pregnancy test kit for swine is the first time. By using kit, everyone can decide a probability of pregnancy is one of the main purposes of this investigation and have a plan to industrialization of kit in one to two years. We expect that by this result can make million dollars of income in a year.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 2
• 요약문 ... 3
• SUMMARY ... 16
• CONTENTS ... 17
• 목차 ... 22
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 28
• 제1절 연구목적 ... 28
• 1. 연차별 연구개발 목표와 내용 ... 28
• 2. 연구개발의 필요성 ... 29
• 가. 경제적인 중요성 ... 29
• 나. 산업적인 중요성 ... 29
• 다. 학문적인 중요성 ... 29
• 라. 기술적인 중요성 ... 29
• 마. 연구개발의 필요성 ... 30
• 제2장 국내외 기술개발 현황 ... 33
• 제1절 국내.외 관련기술의 현황과 문제점 ... 33
• 1. 국내의 기술동양 및 수준 ... 33
• 가. 세계적 수준 ... 33
• 나. 국내수준 ... 33
• 2. 국내의 연구현황 ... 33
• 가. 동물 임신진단 분야 ... 33
• 나. 면역분석법(immunoassay) 분야 ... 34
• 다. Steroids 호르몬 대사산물(metabolites)에 관한 연구 ... 34
• 3. 국외의 연구현황 ... 34
• 가. 임신진단 분야 ... 34
• 나. 면역분석법 분야 ... 34
• 다. Steroids 호르몬 대사산물에 관한 연구 ... 35
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 36
• 제1절 제 1 세부과제 ... 36
• 1. 세부과제 목표 및 내용 (책임자: 김종배) ... 36
• 2. 연구개발 방법 ... 39
• o 1차년도 (2006) ... 39
• 가. 목표 ... 39
• 나. 항체의 특성 조사 ... 39
• 다. PG, E1G, E1S 측정을 위한 면역 분석법(TR-FIA) 개발 ... 40
• 라. 한우 및 돼지뇨 확보 ... 41
• 마. 수정 후 한달간 매일의 오줌 내 PG 및 E1G, E1S 측정 분석 ... 41
• o 2차년도 (2007) ... 42
• 가. 목표 ... 42
• 나. Kit(키트) 개발을 위한 ELISA 법 개발 ... 42
• 다. 한우 및 돼지 임신/비임신 기준치 설정 ... 43
• 라. 키트 개발을 위한 실제뇨에서의 정량법 확립 ... 44
• 마. 수정 후 한 달 간 매일의 오줌 내 E1S 측정 ... 44
• 바. 2D를 이용한 한우뇨 임신진단법 개발 ... 44
• o 3차년도 (2008) ... 45
• 가. 목표 ... 45
• 나. 개발된 TR-FIA 법에 대한 평가 ... 45
• 다. E1S-BSA 합성과 피복조건 확립 ... 47
• 라. E1S에 대한 항체에 금입자(gold particle)를 표지시킨 conjugate 합성과 이들의 특성조사를 통한 첨가량 결정 ... 48
• 마. 키트 제조를 위한 조건 확립 ... 48
• 바. 한우뇨 임신진단 방법 개발 ... 49
• 3. 연구개발 내용 및 결과 ... 50
• o 1차년도 (2006) ... 50
• 가. 항체의 특성 조사 ... 50
• 나. E1G 측정을 위한 면역분석법 (TR-FIA)개발 및 평가 ... 60
• 다. E1S 측정을 위한 면역분석법 (TR-FIA)개발 및 평가 ... 64
• 라. PG 측정을 위한 면역분석법 (TR-FIA)개발 및 평가 ... 66
• 마. 실제뇨에서의 TR-FIA법 적용 ... 68
• 바. 한우 및 돼지뇨 시료 확보 ... 77
• 사. 표준적정곡선을 이용한 임신/비임신 판별 여부 1차 ... 93
• o 2차년도 (2007) ... 96
• 가. 새로운 항체, 컨쥬게이트 조건 설정 및 Recovery Test ... 96
• 나. 키트 개발을 위한 실제뇨에서의 정량법 확립 ... 109
• 다. 수정 후 매일의 돼지 오줌 시료 내의 E1S 측정 ... 113
• 라. 돼지 임신/비임신 진단 기준치 설정 ... 114
• 마. 발정 중 돼지뇨 샘플의 E1S 농도 분석 ... 115
• 바. 한우 수정 후 매일의 PG 농도 측정 ... 116
• 사. 2D를 이용한 한우뇨 임신진단법 개발 ... 117
• o 3차년도 (2008) ... 122
• 가. 확보된 시료의 그룹별 블라인드 테스트 ... 122
• 나. Dilution rate 차이에 따른임신 판별 정확도 테스트 ... 133
• 다. ELISA법 개발 방법 개선 ... 136
• 라. 0.45um 필터 전, 후 샘플 정량값 차이점 조사 ... 139
• 마. 임신 돼지뇨에서 E1G 함량 조사 ... 141
• 바. 임신진단 키트를 위한 E1G-BSA Conjugation ... 144
• 사. 임신진단 키트를 위한 E1G-CASEIN Conjugation ... 147
• 아. 임신진단 키트 개발 ... 150
• 자. 임신/비임신 진단 정확도와 안정성 평가 조사 ... 161
• 차. Polyclonal anti-E1G Antibody 생성 및 면역분석법 확립 ... 174
• 카. Commercial Monoclonal Anti-E1G Antibody를 이용한 면역분석법 확립 ... 179
• 타. 한우뇨 2D 실험 재실시 및 단백질 확인 ... 185
• 파. 한우뇨의 다른 호르몬 대사산물(E1S) 조사 ... 188
• 제2절 제 2 세부과제 ... 207
• 1. 세부과제 목표 및 내용 ( 책임자: 윤택준 ) ... 207
• 2. 연구개발 방법 ... 207
• 가. 목표: 키트 개발을 위한 ELISA법 개발 및 평가 ... 207
• 나. 시료내의 E1S 측정을 위한 ELISA법 개발 ... 207
• 다. E1S 측정 가능한 두 정량 시스템 DELFIA와 ELISA법 비교 ... 208
• 라. ELISA법의 실제뇨를 이용한 표준적정곡선 작성 ... 209
• 마. ELISA법으로 실제뇨 샘플 정량 결과값과 DELFIA법과의 정량값 비교 ... 209
• 3. 연구개발 내용 및 결과 ... 209
• o 2차년도 (2008) ... 209
• 가. 시료내의 E1S 측정을 위한 ELISA법 개발 ... 209
• 나. E1S 정량법에서 DELFIA와 ELISA의 비교 ... 215
• 다. ELISA법에서 실제뇨를 이용한 표준적정곡선 ... 216
• 라. ELISA법으로 실제뇨 샘플 정량 결과값과 DELFIA법과의 정량값 비교 ... 218
• 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 221
• 제1절 연도별 연구 목표 및 달성도 ... 221
• 가. 1차년도 ... 221
• 나. 2차년도 ... 222
• 다. 3차년도 ... 223
• 제2절 관련분야 기술 발전에의 기여도 ... 223
• 가. 임신 진단법에 관한 기초 연구 분야 ... 223
• 나. 기술에의 기여도 ... 225
• 제5장 연구개발 성과 및 성과활용 계획 ... 226
• 제1절 추가연구의 필요성 ... 226
• 제2절 타 연구에의 응용 ... 226
• 제3절 기업화 추진 방향 ... 227
• 제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 229
• 제1절 면역분석법을 통한 돼지뇨 내의 Estrone sulphate의 정량 ... 229
• 제2절 Europium conjugation을 이용한 Time-resolved fluoroimmunoassay법 개발 ... 229
• 제3절 조기 임신 진단을 위한 키트 개발에 관한 정보 ... 230
• 제7장 참고문헌 ... 231
• 끝페이지 ... 240