초록 ▼

○ 연구결과
1. 상황버섯 에센스 오일의 생물학적 활성규명
(1) 항산화 작용
피부세포 배양물에 과산화수소를 이용, 활성산소 생성을 유발하여 상황버섯 오일 첨가에 의한 세포내 활성산소가 억제됨을 확인하였다.
(2) 상황버섯의 동정
수거검체 3종에 대한 ITS부위의 염기서열분석 결과를 확인한 결과 각각 Phellinus igniarius와 98%, Phellinus linteus와 99%, Phellinus baumii와 99.8%의 상동성이 나타남을 확인하였고 이는 유통되고 있는 진흙버섯류의 제품명과 동정

○ 연구결과
1. 상황버섯 에센스 오일의 생물학적 활성규명
(1) 항산화 작용
피부세포 배양물에 과산화수소를 이용, 활성산소 생성을 유발하여 상황버섯 오일 첨가에 의한 세포내 활성산소가 억제됨을 확인하였다.
(2) 상황버섯의 동정
수거검체 3종에 대한 ITS부위의 염기서열분석 결과를 확인한 결과 각각 Phellinus igniarius와 98%, Phellinus linteus와 99%, Phellinus baumii와 99.8%의 상동성이 나타남을 확인하였고 이는 유통되고 있는 진흙버섯류의 제품명과 동정결과가 일치하였으며, 이중에서 초원농장에서 제공한 상황버섯은 Phellinus baumii로 나타나 정유성분 등 에센스 오일 시험을 위한 원료로 사용하였다.
(3) 면역세포 증진, 항체 형성능 촉진
인체혈액으로부터 림프구를 분리하여 배양, 상황버섯 에센스오일 및 시제품을 첨가하여 림프구 생장이 촉진됨을 DNA 합성량을 통하여 확인하였다.
(4) IgE 억제를 통한 피부 알러지 보호
IgE 생성억제를 측정하기 위하여 비만세포 (RBL2HB)에 상황버섯 에센스 오일을 첨가한 결과 세포탈과립화가 억제됨을 확인하였다. 특히 BuOH층과 EA층에서 비슷한 정도의 탈과립화 억제결과가 나타나 상황버섯 오일에 함유되어 있는 성분은 극성 방향성 화합물일 것으로 추정되며 약 10%의 탈과립화 억제효과가 나타났다.
(5) Systemic anaphylaxis 억제 효과
Mouse model에서 anaphylaxis를 유발한 쥐에 상황버섯 에센스 오일을 복강주사하였을 때 anaphylaxis가 억제됨을 확인하였으며, 혈청에서도 histamine 분비가 억제됨을 확인하였다.
(6) Cytokine 발현조절 기능 평가
인체 비만세포인 HMC-1으로부터 상황버섯 에센스 오일 시제품에 의한 TNF-α와 IL-6와 같은 cytokine 발현이 감소함을 Bio-plex system을 이용하여 확인하였다.
2. 상황버섯 에센스 오일의 생산공정 연구
(1) 에센스 오일 생산공정 연구
상황버섯으로부터 에센스 오일을 생산하기 위하여 증류법, 용매추출법, 오일추출법, 초음파 추출물을 사용하여 생산량을 비교한 결과 오일을 용매로한 초음파 추출이 가장 생산수율이 높았다.
(2)최적 생산공정
따라서, 증류법을 통한 1차 생산을 통하여 에센스 오일 생산동안 부산물로 화장수 190kg을 얻었으며, 최종 오일을 용매로한 초음파추출을 통하여 100kg의 상황버섯으로부터 (사용한 상황버섯은 성분 및 효능은 동일하나 겉모양 및 가공과정에서 외관이 손상된 비상품으로 하였다) 160ml의 농축 에센스 오일을 얻었으며, 추출물 70kg을 얻어 최종 15kg으로 농축하였다. 따라서, 본 생산을 통하여 최종적으로 에센스오일, 상황버섯추추물, 상황버섯 화장수를 생산할 수 있었다.
3. 상황버섯 에센스 오일의 개발 및 효력/독성 전임상
(1) 상황버섯 에센스 오일 및 시제품의 단회 투여 독성 평가
본 시험에서 시험물질 투여와 관련된 어떠한 독성 증상도 관찰되지 않았으며 LD50값은 50㎖/㎏을 훨씬 상회할 것으로 생각되었다. 이상의 결과에서 상황버섯 에센스 오일 및 시제품은 수컷 마우스에 의한 경구투여를 통한 단회 투여 독성시험에서 안전한 물질인 것으로 판단되었으며, 따라서 식품 및 화장품 소재로의 이용에 적합할 것으로 사료된다.
(2) 피부트러블 억제
Benzoic acid와 같은 염증유발 물질을 마우스의 귀에 처치하고 상황버섯 에센스 오일을 처리한 결과 유발 물질에 의한 피부트러블이 완화됨을 확인하였으며, 상황버섯 에센스 오일이 5% 함유된 Olive oil 및 chemical을 동시에 처리한 경우에는 마우스의 귀에 피부트러블 및 염증이 유도되지 않았다.
(3) 피부암 억제
피부암세포(마우스 melanoma, B16-BL6)를 마우스의 등배부에 주입하여 암세포에 의한 폐사율 억제 (Life span 증가) 및 암세포 크기를 측정한 결과, 시험기간 중 사망동물은 대조군에서만 1례가 관찰되었고 암세포의 무게 변화는 대조군에 비해 상황버섯에센스 오일 10㎖/㎏/day 투여군에서 암세포의 크기가 42.54% 감소하였다.
(4) 안점막 시험
안검사에 있어서는 시험물질 투여후 1, 24, 48, 72, 96 시간 및 7 일 째에 관찰을 실시하였
는 데, 모든 동물에서 투여후 7 일 째까지 각막, 홍채, 결막에서 모두 이상소견이 전혀 관찰
되지 않았다.
(5) 국소독성시험
시험물질인 상황버섯 에센스 오일을 New Zealand White계 토끼 등 피부의 찰과ㆍ비찰과 부위에 경피도포한 결과, 시험물질에 기인한 일반증상의 변화는 관찰되지 않았으며 사망동물도 없었다. 또한, 시험물질 적용 후 7 일째에는 홍반과 가피형성정도가 대체적으로 뚜렷한 회복 경향을 나타내었으며 찰과와 비찰과피부 모두에서 부종은 관찰되지 않았다.

Abstract ▼

II. Major Results and Conclusion
1. Biological examination of essential oil from Phellinus baumii
(1) Anti-oxidative activity
After generation of oxygen free radical, essential oil from Phellinus baumii was treated to 3T3-L1 cells. As a result, the amount of oxygen free radical in cells was

II. Major Results and Conclusion
1. Biological examination of essential oil from Phellinus baumii
(1) Anti-oxidative activity
After generation of oxygen free radical, essential oil from Phellinus baumii was treated to 3T3-L1 cells. As a result, the amount of oxygen free radical in cells was decreased.
(2) Isolation of Phellinus baumii
Sequence analysis of ITS part was carried out to 3 kinds of samples, as a result, they had a homology with Phellinus igniarius (98%), Phellinus linteus (99%) and Phellinus baumii (99.8%), respectively. These results corresponded with Phellinus gilvus which is circulated in market. Among them, sample supplied from Chowon Farm was certified as Phellinus baumii and it was used for raw material for essential oil extraction.
(3) Activation of immunocyte & antibody formation
Lymphocyte was isolated from human blood and cultured. Then, essential oil from Phellinus baumii and prototype were treated to cells. As a result, we verified the activation of lymphocyte proliferation through DNA synthesis.
(4) Anti-allergic activation by suppression of IgE
To investigate the suppression of IgE production, essential oil from Phellinus baumii was treated to mast cell (RBL2H3). As a result, degranulation was suppressed by essential oil from Phellinus baumii. Especially, BuOH and EA layer showed similar activities (10%) each other and these results suggested that effective ingredient in essential oil from Phellinus baumii might be polar aromatic compound.
(5) Systemic anaphylaxis
When essential oil from Phellinus baumii was administered to anaphylactic shock-induced mice by IP, anaphylaxis was attenuated and histamine release in serum was also decreased.
(6) Regulation of cytokine expression
Prototype of essential oil from Phellinus baumii decreased the expressions of cytokines such as TNF- and IL-6 in α HMC-1, human mast cell.
2. Development, effect and safety of essential oil from Phellinus baumii (preclinical)
(1) Acute toxicity of essential oil from Phellinus baumii and prototype There were neither dead animals nor significant changes of body weights during the experimental period. In addition to, no significant essential oil from Phellinus baumii and prototype related changes were found in clinical sign and other findings. No histopathological lesions were observed in both control and treated animals. Above data suggested that no observed adverse effect level (NOAEL) of test materials in ICR mice might be over 50㎖/㎏ in this study.
(2) Suppression of skin trouble
Inflammation inducing agent such as benzoic acid was treated on mouse ear. After induction of inflammation, essential oil from Phellinus baumii was applied on the same part, as a result, skin trouble caused by benzoic acid was attenuated. Moreover, in case of co-treatment of olive oil contains 5% of essential oil from Phellinus baumii and benzoic acid, skin trouble and inflammation of mouse ear were not induced.
(3) Suppression of skin cancer
Mouse melanoma cell line, B16-BL6 was inoculated to the back of mouse for tumorigenic study. The essential oil from Phellinus baumii decreased tumor size (42.54%) at dose of 10㎖/㎏/day.
(4) Ocular irritation
The essential oil from Phellinus baumii did not affect on clinical sign, mortality, body weight, and irritation in case of the ocular application throughout this study.
(5) Local irritation
This study was performed to evaluate irritation potential of the essential oil from Phellinus baumii in male New Zealand White Rabbits. The test substance was topically applied on both normal and scratched dorsal skin. Then the skin was evaluated for signs of irritation. No toxic sign and significant body weight were observed relating to test substance treatment. On the abraded skin of treated section, 1 and 24 hours after application, slight erythema was observed in all three animals. 48 hours after application, slight erythema was observed in two animals. 72 hours after application, slight erythema was observed in one animals.
On the intact skin of treated section, no abnormal signs were observed throughout the study. On the basis of the above results, the essential oil from Phellinus baumii was classified as a non-irritant in this study.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 2
• 요약문 ... 3
• SUMMARY ... 9
• CONTENTS ... 12
• 목차 ... 13
• 제 1 장 연구개발과제의 개요 ... 14
• 제 1 절 개발경위 ... 15
• 제 2 절 기술개발(제품)의 중요성 및 전망 ... 15
• 제 2 장 국내외 기술개발 현황 ... 17
• 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 18
• 제 1 절 상황버섯 에센스 오일의 생물학적 활성규명 ... 18
• 제 2 절 상황버섯 용매 분획 및 오일 시제품의 생물학적 활성규명 ... 25
• 제 3 절 상황버섯 에센스 오일의 생산공정 연구 ... 31
• 제 4 절 상황버섯 에센스 오일의 생산공정 표준화 및 제제화 연구 ... 38
• 제 5 절 상황버섯 에센스 오일의 성분분석 연구 ... 44
• 제 6 절 상황버섯 에센스 오일의 개발 및 효력/독성 전임상 ... 51
• 제 7 절 상황버섯 에센스 오일 시제품의 개발 및 독성 전임상 ... 78
• 제 4 장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 104
• 제 5 장 연구개발결과의 활용계획 ... 105
• 제 6 장 참고문헌 ... 107
• 끝페이지 ... 111