초록 ▼

○ 연구결과
1. 살모넬라 특이 항체 개발
Pan Salmonella 항체와 Sal group D 항체의 생산을 위하여 각각 5수의 토끼에 항체생산에 맞는 항원을 선발하여 면역을 시켰으며 최종 생산된 항체는 항원항체 결합반응과 western blotting을 통해 그 특이성이 확인되었다.
2. 제제화
가. 제제화를 위한 최적화 시험을 실시한 결과, 검체 패드는 whatman 903, 골드 패드는 OD10, polyester pad, 멤브레인은 MDI 10 nitrocellulose membrane, 흡습 패드는

○ 연구결과
1. 살모넬라 특이 항체 개발
Pan Salmonella 항체와 Sal group D 항체의 생산을 위하여 각각 5수의 토끼에 항체생산에 맞는 항원을 선발하여 면역을 시켰으며 최종 생산된 항체는 항원항체 결합반응과 western blotting을 통해 그 특이성이 확인되었다.
2. 제제화
가. 제제화를 위한 최적화 시험을 실시한 결과, 검체 패드는 whatman 903, 골드 패드는 OD10, polyester pad, 멤브레인은 MDI 10 nitrocellulose membrane, 흡습 패드는 SM-18150이 가장 적합하였으며, 골드콘쥬게이트 접합을 위한 살모넬라 항체는 Pansal kit를 위해서는 25 ㎍/㎖을, Sal group D를 위해서는 18 ㎍/㎖ 코팅하였으며, 검사선(T)에는 Pan sal kit용 살모넬라 다크론항체 2.1 ㎍/㎖, Sal group D kit용 항체 1.3㎍/㎖을, 대조선(C)에는 산양 항 마우스 항체 2 ㎍/㎖이 코팅되도록 하는 것이 가장 우수하였다.
나. 시제품의 검사방법은 검체를 BPW와 SC broth에 배양한 후 이것을 검체 주입구에 4~5방울 (120 ㎕~150 ㎕) 점적하고 10분 경과 후에 판정하는 것이 가장 우수하였다.
다. Pan Salmonella kit은 살모넬라 이외의 세균에, Sal group D kit는 Salmonella serogroup D 이외의 살모넬라나 기타 세균과 교차반응성이 없었다.
3. 적용시험
Pan sal kit 및 Sal group D kit의 살모넬라 검출한계는 104 CFU이상으로 검체에 대한 일차 증균이 필요함을 알 수 있었다. 따라서 BPW 의 선증균 6시간과 SC broth에서의 18시간 배양 후 kit의 적용시 100 CFU이상의 검출한계를 알 수 있었으며 이는 미국의 Reveal kit제품과 동일한 결과이었다. 또한 닭도체와 소지육을 대상으로 직접 본 키트와 균분리를 비교조사하였을 때, 높은 민감도와 특이도가 있음을 확인할 수 있었다.

Abstract ▼

Foodborne diseases are among the most serious health problems affecting public health and development worldwide (WHO, 1984). Industrialization, mass food production, decreasing trade barriers, and human migration have disseminated and increased the incidence and severity of foodborne diseases worldw

Foodborne diseases are among the most serious health problems affecting public health and development worldwide (WHO, 1984). Industrialization, mass food production, decreasing trade barriers, and human migration have disseminated and increased the incidence and severity of foodborne diseases worldwide (Gomez et al., 1997; Kaferstein et al., 1997; Todd, 1997).
Salmonellae are among the most common bacterial foodborne pathogens worldwide (Todd, 1997). They cause an estimated 1.4 million cases of foodborne disease each year in the United States alone(Voetsch et al., 2004). Salmonella strains are zoonotic enterobacteria responsible for outbreaks of both human and animal clinical diseases and have important worldwide hygienic and economic significance. There are several routes of transmission for salmonellosis, but the majority of human infections result from the consumption of contaminated foods and water. Foods most often associated with the transmission of Salmonella include those of animal origin, such as beef, pork, poultry, eggs, raw milk, and milk products; however, other foods, including fresh fruits, unpasteurized fruit juices, and vegetables such as sprouts, have also served as vehicles for the transmission of the pathogen (Philippe et al., 2005; Jennifer et al., 2005; Eleni et al., 2006; Centers for Disease Control and Prevention, 2006). The genus Salmonella is a typical member of the family Enterobacteriaceae and consists of Gramnegative, nonsporeforming bacilli (Philippe et al., 2005).
Bacteria constituting the genus contain three different types of antigens. The agglutinating properties of the somatic O, flagella H and capsular Vi antigens are used to differentiate among more than 2,500 serologically distinct types of Salmonella (Popoff et al., 2003). O antigen is a carbohydrate antigen that is the outermost component of lipopolysaccharide (LPS). Because it is laborous and time-consuming to isolate the pathogens, many laboratory have used the other methods (PCR, biochemical tests) and screening kit (sandwich ELISA) to identify the pathogens in the samples. Even though the methods were very rapid and accurate, they were also needed the knowledge of molecular biology and a lot of equipment.
The convenience and speed of the test have been achieved by a novel concept of immunochromatographic assay, which depends on the trnasport of tag (usually is colloidal gold)-labeled antibody (or antigen) probe to its binding partner-specific antigen (or antibody) immobilized on the surfaces of the membrane. The transfer is induced by the capillary action of aqueous medium through membrane pores to separate the unbound reactant from the bound complex at the liquid-solid interface. Among different tags/marks-labeled test systems, colloidal gold appears to be most attractive.
Colloidal gold has found application as labels for molecular detection in microscopy and electrophoresis blotting techniques for its resonance absorbance in visible spectroscopy (Horrisberger, 1979; Horisberger and Vauthey, 1984). Unlike fluorescence or enzyme-detection system, gold probes are more stable and easy to use. There are no need for 려뇨 operations as incubation, washing and enzymeatic reactions during signal generation, which distinctly shorten the detection time. Furthermore, nanoscale surfaces provided by colloidal gold particles could accelerate antibody-antigen reaction sufficiently, which provide an amplified signal for immunoassy (Faulk and Taylor, 1971; Richars, 1996). Especially, the results can be read directly by naked eyes, which ensures the convenience of assay on-site. Therefore, nanoglod based IC systems cannot only accelerate the analytical procedure but also provide a means for performing the test without the handling of reagents, allowing a one-step assay (Paek et al., 1999)
We developed the dipstick using immunochromatographic method for the detection of Salmonella spp. The sensitivity of the dipstick are 10₀ CFU after enrichment of the samples. It is useful for the laboratory that treat the many samples.
Dipstick are very useful for the laboratories treated with the small samples. It doesn't need the equipment and specific knowledge to use the kits. Just apply the 4-5 drops of the enrichment samples onto the kits and get the results after 10 minutes. Dipstick can also detect the meat samples after enrichment that contaminated with food-borne bacteria with 10⁰ CFU. These rapid screening kits can be commercially and available in many laboratores.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 2
• 요약문 ... 3
• SUMMARY ... 15
• CONTENTS ... 18
• 목차 ... 20
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 22
• 제1절 연구개발의 목적 ... 22
• 제2절 연구개발의 필요성 ... 22
• 제3절 연구개발의 범위 ... 32
• 제2장 국내·외 기술개발 현황 ... 39
• 제1절 국내·외 기술 및 문제점 ... 39
• 제2절 국내·외 개발 현황 ... 40
• 제3절 개발대상 기술의 개요 ... 42
• 제4절 개발대상기술에 대한 연구기관 잠재력 ... 42
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 44
• 제1절 기술개발 내용 및 범위 ... 44
• 제2절 연구방법 ... 51
• 제3절 연구결과 ... 58
• 제4절 최종 제품 ... 89
• 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 92
• 제1절 계획대비 실적 및 성과 ... 92
• 제2절 관련분야에의 기여도 ... 94
• 제5장 연구개발결과의 활용계획 ... 96
• 1. 추가연구의 필요성 ... 96
• 2. 타 연구에의 응용 ... 96
• 3. 기업화 추진방안 ... 97
• 제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 98
• 제7장 참고문헌 ... 99
• 끝페이지 ... 102