보고서 정보
주관연구기관 |
경상대학교 GyeongSang National University |
보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
|
발행년월 | 2002-08 |
주관부처 |
농림부 Ministry of Agriculture and Forestry |
등록번호 |
TRKO201400023386 |
DB 구축일자 |
2014-11-10
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초록
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Ⅳ. 연구개발 결과 및 활용에 관한 건의
1. 연구개발 결과
가. 자돈 하리 원인 대장균의 프로테옴 연구
병원성 E. coli 8종의 strain에 대한 항원성 단백질을 규명하고 비교하였다. 각 strain에 대해 토끼 E. coliO157:H7 항혈청을 이용해 immunoblot 한 결과 ACH5 strain에서는 182개 spot중 69개의 항원성 spot과 42개의 동정된 항원성 spot을 찾았고, K88에서는 총 182개 spot중 87개의 항원성 spot과 43개의 동정된 항원성 spot을 찾았다. K99에
Ⅳ. 연구개발 결과 및 활용에 관한 건의
1. 연구개발 결과
가. 자돈 하리 원인 대장균의 프로테옴 연구
병원성 E. coli 8종의 strain에 대한 항원성 단백질을 규명하고 비교하였다. 각 strain에 대해 토끼 E. coliO157:H7 항혈청을 이용해 immunoblot 한 결과 ACH5 strain에서는 182개 spot중 69개의 항원성 spot과 42개의 동정된 항원성 spot을 찾았고, K88에서는 총 182개 spot중 87개의 항원성 spot과 43개의 동정된 항원성 spot을 찾았다. K99에서는 총 154개 spot중 86개의 항원성 spot과 30개의 동정된 항원성 spot을 찾았고, O148에서는 총 210개 spot중 91개의 항원성 spot과 14개의 동정된 항원성 spot을 찾았다. O59에서는 총 222개 spot중 50개의 항원성 spot과 10개의 동정된 항원성 spot을 찾았으며 O157:H7에서는 총 247개 spot중 75개의 항원성 spot과 38개의 동정된 항원성 spot을 찾았다. C2에서는 총 286개 spot중 83개의 항원성 spot과 22개의 동정된 항원성 spot을 찾았고 O26에서는 총 156개 spot중 67개의 항원성 spot과 42개의 동정된 항원성 spot을 찾았다. 아울러 각각의 strain에 특징적인 항혈청을 이용한 immunoblot의 결과 K88 strain에서는 46개, K99에서는 10개, O148에서는 18개, O157:H7에서는 75개 그리고 O26에서는 29개의 strain specific spot을 찾았다.
나. Neospora caninum의 프로테옴 연구
이차원전기영동법과 immunoblot 법 그리고 MALDI TOF-MS를 이용해서 Neospora caninum에 대한 프로테옴 분석을 실시 하였다. pH 3-10 그리고 pH 4-7의 13cm IPGstrip을 이용해서 총 350여개의 단백질 spot을 관찰 할 수 있었으며, 이들 중 관심있는 spot을 선택하여 MALDI-TOF MS를 이용해 단백질 동정을 한 결과 20개의 서로 다른 단백질로 구성된 31개의 단백질 spot을 동정 할 수 있었다. 이들 중 6개의 단백질(NTPase, 14-3-3 protein homologue, NcMIC1, NCDG1, NcGRA1 그리고 NcGRA2)은 N. caninum database로부터 동정 하였으며, 11개의 단백질 (HSP70, HSP60, pyruvate kinase, tubulin α- 그리고 β-chain, putative protein disulfide isomerase, enolase, actin, fructose-1,6-bisphosphatase, lactate dehydrogenase 그리고 glyceradehyde-3-phosphate dehydrogenase)은 서로 계통분류학적으로 유사한 T. gondii database를 이용해 동정을 하였다. N. caninum 가토화 혈청을 이용한 pH 4.7 IPG strips을 이용한 immunoblot법에서는 102개의 항원성 spot을 관찰할 수 있었으며 이들 중 11개의 단백질로 구성된 17개의 항원성 spot을 동정 할 수 있었다.
다. Salmonella enteritidis의 프로테옴 연구
S. enteritidis를 이용한 이차원 전기영동결과 pH 4-7범위 13cm silver stained gel에서 788개의 spot을 count할 수 있었고 이들을 MALDI-TOF MS 분석법으로 단백질 동정을 한 결과 65개의 단백질로 구성된 70개의 spot을 동정 할 수 있었다. 아울러 S. enteritidis 가토화 혈청을 이용한 immunoblot 결과 100여개의 항원성 spot을 확인할 수 있었으며 이들 중 35개의 단백질을 동정 할 수 있었다. 동정된 단백질들은 chaperone에 관련되거나 단백질 생합성의 transcription, translation에 관련된 단백질이 발견 되었고 대다수는 에너지 대사에 관련된 단백질들을 확인 할 수 있었다.
2. 활용에 대한 건의
가축질병의 신속・정확한 진단방법과 치료법의 개발을 위한 proteome database를 확립함으로써 국내 가축질병의 예방과 치료약재 개발 그리고 특이 항원성 단백질 marker를 이용한 질병역학조사에도 기여할 수 있을 것으로 기대되며 이러한 결과는 양축가와 소비자들에게 안정적 생산과 소비를 창출할 수 있을 것이다.
Abstract
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Ⅳ. Results of Research
In the E. coli study, a total of 69 antigenic spots out of 182 and corresponds to 42 proteins were determined in strain ACH5 using E. coliO157:H7 antiserum, 87 of 182 spots corresponding to 43 proteins in K88, 86 of 154 spots that corresponds to 30 proteins in K99, 91 of 21
Ⅳ. Results of Research
In the E. coli study, a total of 69 antigenic spots out of 182 and corresponds to 42 proteins were determined in strain ACH5 using E. coliO157:H7 antiserum, 87 of 182 spots corresponding to 43 proteins in K88, 86 of 154 spots that corresponds to 30 proteins in K99, 91 of 210 spots in O148 which corresponds to 14 proteins, 50 of 222 spots that corresponds to10 proteins in O59, 38 proteins corresponded to 75 of 247 spots in O157:H7, 83 of 286 spots which corresponds to 22 proteins in C2, and 67 antigenic spots out of 156 that corresponds to 42 proteins were determined in O26. On the other hand, strain specific antisera detected a total of 46 out of 102 spots in K88 strain, 10 of 31 spots in K99, 18 of 35 spots in O148, 75 of 247 spots in O157:H7 and 29 of 41 spots in O26. Common as well as specific antigenic proteins were being noted and differentiated between respective strains. Comparison conducted reveals a total of 15 common antigenic spots present in each strain as recognized by E. coli O157:H7 antiserum. In contrast, specific antigenic proteins identified differs in total numbers between strains. E. coliK88 and O148 were identified having 17 specific antigenic spots, a total of 10 in strains K99 and O59, 7 in E. coli C2, O1578:H7 and O26 strains, whereas 4 were present in ACH5.
In the N. caninum study, 31 spots corresponding to 20different proteins were identified from N. caninum tachyzoites by peptide mass fingerprinting (PMF). Six proteins were identified from a N. caninum database (NTPase, 14-3-3 protein homologue, NcMIC1, NCDG1, NcGRA1 and NcGRA2), and 11 proteins were identified in closely related species, namely the T. gondii database (HSP70, HSP60, pyruvate kinase, tubulin - and -chain, putative protein disulfide isomerase, enolase, actin, fructose-1,6-bisphosphatase, lactate dehydrogenase, and glyceradehyde-3-phosphate dehydrogenase). One hundred and two antigen spots were observed using pH 4-7 IPG strips on immunoblot profiles. Among them, 17 spots corresponding to 11 antigenic proteins were identified from a N. caninum protein map.
In the S. enteriditis study, a total of 788 spots were observed on a silver stained gel using pH 4-7 IPG strip (13 cm). Among them, 70 spots correspondingto 65 different proteins were successfully identified by MALDI-TOF MS analysis.With rabbit anti-S. enteritidis sera, 100 spots were observed as antigenic proteins and 35 proteins were identified from database search after MALDI-TOF MS. Most of the proteins identified were belonging to chaperone like action, protein synthesis, and metabolic pathway of G(-) bacteria.
In conclusion, 2-DE combined with immunoblotting assay proved very useful for the analysis of antigenic proteins. The maps established in the present study will provide useful basic information for the development of a diagnostic tool for the understanding the pathogenesis and for the development of vaccines or drugs for the disease of E. coli, N. caninum, and S. enteritidis.
목차 Contents
- 표지 ... 1
- 최종보고서 ... 2
- 제출문 ... 3
- 요약문 ... 4
- SUMMARY ... 9
- CONTENTS ... 13
- 목차 ... 14
- 제1장 연구개발과제의 개요 ... 15
- 제1절 연구개발의 목적 ... 15
- 제2절 필요성 ... 18
- 제3절 연구범위 ... 18
- 제4절 연구개발 추진체계 ... 19
- 제2장 국내·외 기술개발현황 ... 20
- 제3장 연구개발내용 및 결과 ... 22
- 제1절 E. coli의 프로테옴 연구 ... 22
- 2절 Neospora caninum의 프로테옴 연구 ... 62
- 3절 Salmonella enteritidis의 프로테옴 연구 ... 102
- 제4장 목표달성도 및 관련분야의 기여도 ... 111
- 제1절 연구평가의 착안점 ... 111
- 제2절 연구개발목표달성도 ... 112
- 제3절 관련분야의 기술발전의 기여도 ... 113
- 제5장 연구개발의 활용계획 ... 114
- 제1절 추가연구의 필요성 ... 114
- 제2절 타 연구에의 응용 ... 114
- 제3절 기업화 추진방안 ... 114
- 제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학 기술정보 ... 115
- 제7장 참고문헌 ... 117
- 끝페이지 ... 133
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