초록 ▼

○ 연구결과
본 연구과제는 인간난포자극호르몬(hFSH) 유전자를 도입한 체세포의 핵이식에 의하여 유선에서 고부가 가치 호르몬을 분비하는 형질전환 젖소의 생산을 목표로 하여 수행되었다. 1차년도에 hFSH 유전자의 cloning과 single-chain hFSH transgene construct의 작성을 완료하였고, 2차년도에 체세포내 hFSH 유전자의 도입, Chinese hamster ovary(CHO) 세포에서의 발현 및 체세포 복제수정란에서 hFSH유전자의 전이를 확인하였다. 2차년도 말-3차년도에 걸쳐 31두의 대리모

○ 연구결과
본 연구과제는 인간난포자극호르몬(hFSH) 유전자를 도입한 체세포의 핵이식에 의하여 유선에서 고부가 가치 호르몬을 분비하는 형질전환 젖소의 생산을 목표로 하여 수행되었다. 1차년도에 hFSH 유전자의 cloning과 single-chain hFSH transgene construct의 작성을 완료하였고, 2차년도에 체세포내 hFSH 유전자의 도입, Chinese hamster ovary(CHO) 세포에서의 발현 및 체세포 복제수정란에서 hFSH유전자의 전이를 확인하였다. 2차년도 말-3차년도에 걸쳐 31두의 대리모에 hFSH 형질전환 복제 수정란을 이식하였으며 그 중 1두의 대리모는 7개월까지 임신이 유지되었으나 유산하였고, 현재 2두의 대리모가 GFP와 hFSH를 동시에 형질전환시킨 복제태아의 임신을 유지하고 있다. 책정된 예산을 3차년도에 모두 투입하여 수정란이식을 실시하였으나 연구과제가 종료되는 시점까지 목표로 하였던 hFSH 형질전환 복제젖소의 생산에는 이르지 못하였고, 현재 임신 중인 2두의 대리모에서 출산을 기다리고 있다.

Abstract ▼

Human follicle-stimulating hormone (hFSH) is a pituitary glycoprotein that plays an essential role in the regulation of follicular development and ovulation. Clinicaly, hFSH has been used to induce follicular growth in infertile women. The hormone was composed of heterodimers including a common α su

Human follicle-stimulating hormone (hFSH) is a pituitary glycoprotein that plays an essential role in the regulation of follicular development and ovulation. Clinicaly, hFSH has been used to induce follicular growth in infertile women. The hormone was composed of heterodimers including a common α subunit among gonadotropin family and hormone-specific β subunit. Since assembly of the heterodimer is often a rate-limiting step in the production of functional hormone from cultured cells and transgenic animals, nuclear transfer was attempted using fibroblasts carrying single-chain hFSH transgene. Genes encoding α and β subunit of hFSH were linked using C-termial peptide (CTP) sequence from β subunit of human chorionic gonadotropin. To test a secretion of hFSH prior to nuclear transfer experiment, hFSH gene under the regulation of rat β actin promoter was introduced into Chinese hamster ovary (CHO) cells. In subsequent enzyme-linked immunosorbent assay, production of hFSH from CHO cells was verified. Bovine fibroblasts were transfected with a gene construct including β casein promoter and single-chain hFSH sequences. Fibroblasts carrying hFSH transgene were transferred to enucleated oocytes, and an existence of transgene in nuclear transfer embryos was confirmed by polymerize chain reaction. Transfers of embryos to recipients to produce cloned calves carrying single-chain hFSH are currently in progress.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 2
• 요약문 ... 3
• SUMMARY ... 5
• CONTENTS ... 6
• 목차 ... 8
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 10
• 제1절 연구개발의 목적 ... 10
• 제2절 연구개발의 필요성 ... 10
• 1. 기술적 측면 ... 11
• 2. 경제ㆍ산업적 측면 ... 12
• 3. 사회ㆍ문화적 측면 ... 12
• 제3절 연구개발의 범위 ... 13
• 제2장 국내외 기술개발 현황 ... 14
• 제1절 형질전환동물 ... 14
• 제2절 체세포복제 ... 15
• 제3장 연구개발 수행내용 및 결과 ... 16
• 제1절 연구방법 ... 16
• 1. 외래유전자 발현벡터의 제작 및 체세포 내 도입 ... 16
• 2. 체세포핵이식 ... 17
• 3. 체세포 복제 형질전환 젖소의 유전형 및 표현형 조사 ... 17
• 제2절 연구내용 ... 18
• 제3절 연구결과 ... 18
• 1. 인간 난포자극호르몬(human follicule-stimulating hormone; hFSH) 유전자의 cloning ... 18
• 2. 외래유전자 construct의 작성 ... 19
• 3. 외래유전자 발현율의 제고 ... 23
• 4. 세포주에서 hFSH 외래유전자의 발현 ... 29
• 5. 체세포핵이식의 효율성 제고 ... 30
• 6. 체세포 복제송아지의 생산 ... 32
• 7. 체세포 내 외래유전자의 도입 ... 34
• 8. Single-chain hFSH 형질전환 체세포의 생산 ... 35
• 9. Single-chain hFSH 형질전환 체세포 복제수정란의 생산 ... 36
• 10. hFSH 형질전환 복제수정란의 이식 ... 37
• 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 38
• 제1절 연구목표 및 평가의 착안점 ... 38
• 제2절 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 39
• 1. 목표달성도 ... 39
• 2. 연구실적 ... 39
• 3. 관련분야에의 기여도 ... 40
• 제5장 연구개발결과의 활용계획 ... 41
• 제1절 활용분야 ... 41
• 제2절 활용유형 및 활용방안 ... 41
• 제6장 참고문헌 ... 42
• 끝페이지 ... 44