초록 ▼

Ⅲ. 연구개발 내용 및 결과
1. 미국인을 대상으로 한 임상시험
표준화된 백수오등 복합추출물의 갱년기증상에 대한 효능 및 안전성을 비아시아인을 대상으로 확인하기 위해 위약대비 무작위 이중맹검 임상실험을 진행하였다. 총 64명의 미국 비아시아 갱년기 여성을 대상으로 12주간 하루 514mg 의 백수오등 복합추출물을 함유한 정제를 급여하고 급여전, 6주, 12주에 Kupperman Index 의 변화를 비교하였다. 투여군(n=31) 대조군(n=33) 대비 KI 값이 유의하게 감소하였다. (p<0.01) KI의 세부항목 중 v

Ⅲ. 연구개발 내용 및 결과
1. 미국인을 대상으로 한 임상시험
표준화된 백수오등 복합추출물의 갱년기증상에 대한 효능 및 안전성을 비아시아인을 대상으로 확인하기 위해 위약대비 무작위 이중맹검 임상실험을 진행하였다. 총 64명의 미국 비아시아 갱년기 여성을 대상으로 12주간 하루 514mg 의 백수오등 복합추출물을 함유한 정제를 급여하고 급여전, 6주, 12주에 Kupperman Index 의 변화를 비교하였다. 투여군(n=31) 대조군(n=33) 대비 KI 값이 유의하게 감소하였다. (p<0.01) KI의 세부항목 중 vasomotor, insomnia, nervousness, melancholia, vertigo, fatigue(p<0.01), and rheumatic pain 과 paresthesia(p<0.05)은 대조군 대비 통계적으로 유의하게 개선되었고 KI와 별도로 추가한 질건조증 또한 유의하게 개선되었다.
(p<0.05), Formication 은 대조군 대비 6주째에 통계적으로 유의하게 개선되었다. (p<0.05) 백수오등 복합추출물 섭취에 의한 체중, 혈중 에스트로겐 등 생화확적 지표에서 대조군과 유의적 차이가 관찰되지 않았고 심각한 부작용도 없었다. 이 결과로 보아 백수오등 복합추출물은 갱년기 여성에게 체중증가나 부작용의 발생이 없어 갱년기 증상들을 통계적으로 유의하게 개선할 수 있음을 보여주었다.
2. 독성 시험
백수오등 복합추출물의 미국시장을 포함한 해외시장진출을 위해 국내 GLP 기관을 통해 단회독성시험과 유전독성; 복귀돌연변이, 염색체이상, 소핵시험을 실시하였다. 랫드에 단회 경구 투여한 결과, 개략의 치사량은 암수 각 4,000mg/kg 을 상회하는 것으로 판단된다. 또한 백수오등 복합추출물은 복귀돌연변이 시험결과 5,000ug/plate 수준에서 유전자 돌연변이 유발성은 음성으로 판단되었고 포유류세포를 이용한 시험에서 5,000ug/ml에서 염색체이상을 유발하지 않는 것으로 판단된다. 또한 마우스를 이용한 소핵시험에서 2,000mg/kg에서 마우스 골수세포의 소핵유발에 영향을 주지 않는 것으로 판단된다.
3. 제품의 안정성 확인
표준화된 백수오등 복합추출물원료에 대해서는 장기보관기간에 따른 품질변화를 관찰한 결과 24개월의 보관기간 동안 설정된 기준규격을 만족시켰음을 확인하였다.
또한 완제품의 경우 경질캅셀 및 정제 제품을 시생산하고 가속시험을 통하여 유통기한 24개월 이상의 안정성 자료를 확보하였다.
4. 백수오등 복합추출물의 활성성분 연구
백수오, 속단, 당귀로부터 얻은 다양한 추출물에 대해 에스트로겐 활성을 MCF-7 cell 을 이용하여 탐색하였다. 속단과 당귀 용매 추출물의 에스트로겐 활성은 열수>70%에탄올>부탄올>다이클로로메탄 순으로 당귀 열수 추출물 (250ug/mL)에서 138%로 가장 높았다.
추출물의 총폴리페놀과 퐁폴라보노이드, 함량은 0.6~1.6% 및 0.6~1.2%로 에스트로겐 활성과의 상관성을 보이지 않았다. 따라서, 시료 내 총폴리페놀 및 총폴라보노이드 함량보다는 특정한 폴리페놀 성분이 에스트로겐 활성에 영향을 미치는 것을 알 수 있었다. 가장 높은 에스트로겐 활성을 보인 당귀 열수추출물을 C18 cartridge 가 장착된 prep-HPLC 로 분획한 90개의 획분에 대해 MCF-7 cell proliferation 방법에 의한 에스트로겐 활성과 폴리페놀 화합물 조성분석을 통하여 가장 우수한 획분을 분리하였다. 분리된 활성성분의 구조는 Mass spectrometer 와 ¹H-NMR 을 사용하여 분석하였고, 에스트로겐 유사활성은 ER competitive binding assay, cell proliferation assay, yeast-based estrogenicity assay, pS2 mRNA expression assay 를 이용하여 평가하였다. 가장 높은 활성을 보인 당귀 열수추출물로부터 얻은 90개의 획분 중 우수한 에스트로겐 활성을 보인 획분(F28)을 분리하여 구조를 분석한 결과, caffeic acid 와 일치함을 확인하였다. 또한, 당귀의 에스트로겐 활성 성분으로 확인된 caffeic acid는 estrogen receptor β와 강하게 결합하고, estrogen-responsive element dependent β-galactosidase activity 와 pS2 mRNA transcription 을 효과적을 유도하였다. 이상과 같이, 본 연구로부터 당귀 열수출출물 유래 식물성에스트로겐 활성 물질이 caffeic acid 임을 확인하였으며, 폐경기여성의 호르몬 대체요법을 위한천연물 위한 천연물 신약 개발의 자료로 활용될 수 있다.

Abstract ▼

Ⅲ. The Researches and Results
1. Clinical test with non-Asian American women
To evaluate the efficacy and safety of EstgroG-100 the standardized mixed herbal extract of Cynanchum wilfordii, Phlomis umbrosa, and Angelica gigas, a randomized double-blind placebo-controlled clinical study for non

Ⅲ. The Researches and Results
1. Clinical test with non-Asian American women
To evaluate the efficacy and safety of EstgroG-100 the standardized mixed herbal extract of Cynanchum wilfordii, Phlomis umbrosa, and Angelica gigas, a randomized double-blind placebo-controlled clinical study for non-Asian American women has been performed. Total 64 non-Asian women in USA was enrolled and tablets containing 514mg/day of EstroG-100 or placebo were taken for 12 weeks. The mean change of Kupperman Index(KI), the constituent symptorns of KI, and vaginal dryness was compared at baseline, week 6 and week 12 between active and placebo groups. The mean KI was decreased statistically significantly in EstroG-100 group(n=31) in comparison with placebo group(n=33). The mean change at week 12 from the baseline was significantly different (p<0.01) for vasomotor (hot flush and night sweat), insomnia, nervousness, melancholia, vertigo, and also different with significance (p<0.05) for fatigus, rheumatic pain and paresthesia between both groups. The improvement of vaginal dryness was significant (p<0.05) in comparison with placebo group. Formication was improved at week 6 from the baseline in comparison with placebo group (p<0.05). There were no significant differences in body weight, serum estrogen level and other biochemical markers. Not only a single adverse event was not reported during the study, but no vaginal spotting case was observed in the active group. We ca nconclude that EstroG-100 improved significantly menopausal symptorms with no adverse event without increase of body weight and without influencing serum E2.
2. Toxicity
For the globalization of the proprietary phytoestrogen or EstroG-100, single-dose oral toxicity test and genetic toxicity test including bacterial reverse mutation test, chromosomal aberration test, and micronucleus test were performed in a GLP institute in Korea. The appropriate lethal dose of EstroG-100 was observed to be over 4000mg/kg as a result of the single dose oral toxicity test with rats. There was no clear indications for mutagenic potential as a result of bacterial reverse mutation test at the 5,000ug/plate level. In Chinese Hamster Lung cells, there was no evidence of chromosomal aberration at the level of 5,000ugml of EStroG-100. There was no mutagenic effect on micronucleus formation in the bone marrow cells in mice at 2,000mg/kg dose.
3. Stability of EStroG-100 and its products
Stability of standardized EstroG-100 was confirmed by 24 month long storage test, Stabilities of end products of EstroG-100 under the form of hard capsules and tablets have been performed to confirm by accelerated storage test their shelf lives are 24 months.
4. The study of Active ingredient of EstroG-100
The estrogenicity of various extracts obtained from Cynanchum wilfordii(C. wilfordii), Phlomis umbrosa Turaz (P.umbrosa), and Angelica gigas Nakai (A. gigas) was investigated using MCF-7 cell . Estrogenic compound in the active extract was isolated and identified.
The estrogenicity of extracts of the three herbs using 4 different solvents was evaluated.
The estrogenic activities of extracts of P. umbrosa and A. gigas were in the order of hot-water>70% ethanol>butanol>dichoromethane and the hot-water extract of A. gigas showed highest estrogenic activity (138%) at 250 ug/ml.
Total polyphenols and flavonoids contents of extract were 0.6~1.6% and 0.6~1.2% respectively. But there was no relation between estrogenic activities and the contents of ployphenols or flvonoids. It was concluded that specific polyphenol compounds rather than total polyphenols or flavonoids might have affected estrogenic activities of extracts.
The graction containing high-potent compound was isolated by comparing the estrogenicity of 90 fractions with prep-HPLC fractionation with C18 column of the hot-water extract of a. gigas The structure of active isolate was identified with mass spectrometer and ¹H-NMR. Estrogenic activity of the active isolate was evaluated by ER binding assay, cell proliferation assay, yeast-based estrogenic assay, and pS2 mRNA expression assay. The highest estrogenic fraction(F28) of 90 fractions from hot-water extract of A.gigas was analysed and identified to be caffeica acid. We found out htat caffeic acid had strong binding affinity to ERβ and induced effectively estrogen responsive element dependant β-glactosidase and pS2 mRNA transcription. In results of this study, we concluded that one of the estrogenic chermicals in A. gigas was caffeic acid.

목차 Contents

• 최종보고서 ... 1
• 제출문 ... 2
• 요약문 ... 3
• SUMMARY ... 6
• CONTENTS ... 9
• 목차 ... 11
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 13
• 제2장 국내외 기술개발 현황 ... 16
• 제1절 해외 갱년기 소재 개발현황 ... 16
• 제2절 국내 갱년기 소재 개발현황 ... 17
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 19
• 제1절 연구개발 수행방법 ... 19
• 1. 백수오등 복합추출물 유통기한 설정 ... 19
• 2. 제형개발 및 제품개발 ... 22
• 3. 백수오, 속단, 당귀의 유효성분 연구 ... 24
• 4. 백수오등 복합추출물의 안전성 연구 ... 29
• 5. 코카시안 대상 갱년기 증상 개선 임상시험 ... 36
• 제2절 연구 개발 수행 결과 ... 42
• 1. 백수오등 복합추출물 장기보관시험결과 ... 42
• 2. 백수오등 복합추출물을 함유한 제형 및 제품개발 ... 44
• 3. 백수오, 속단, 당귀의 유효성분 연구 ... 48
• 4. 백수오등 복합추출물의 안전성 연구 ... 63
• 5. 인체임상 ... 65
• 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 82
• 제1절 목표달성도 ... 82
• 제2절 관련분야 기여도 ... 83
• 1. EstroG-l00 유효성 검증 ... 83
• 2. 백수오, 속단, 당귀로부터 에스트로겐 활성 물질의 분리, 정제 및 특성 분석 ... 83
• 3. EstroG-l00 안전성 검증 ... 84
• 4. 건강기능식품 제형 및 유통기한 연구 ... 84
• 제5장 연구개발 성과 및 성과활용 계획 ... 85
• 제1절 산업화 실적 및 계획 ... 85
• 1. 산업화 실적 ... 85
• 2. 산업화 계획 ... 85
• 제2절 논문 및 특허확보 실적 및 계획 ... 86
• 1. 논문진행상황 ... 86
• 제3절 추가연구 및 활용계획 ... 86
• 1. 천연물 신약 개발 ... 86
• 2. 기작연구 명확화 ... 86
• 3. 신규 노화관련 연구 ... 87
• 제6장 참고문헌 ... 88
• 끝페이지 ... 92