초록 ▼

□ t(9;11)에서 비정상적인 발현을 보이는 유전자들의 Network 분석 및 관련 유전자 스크리닝
○ t(9;11)에 의해 생성되는 MLL-AF9 fusion 단백질에 의해 비정상적으로 발현이 되는 유전자들을 분석함으로써, t(9;11) 유래 급성 골수성 백혈병의 특이적인 발병 메커니즘을 규명할 수 있음
○ 총 6개의 전사조절인자 (NUCB2, ZNF706, CBX1a, COMMD6, DACH1a, LRRC57)가 Mll-AF9 fusion 단백질에 의해 유사 혈액암 세포주에서 과발현 되는 것을 확인하였음
○ D

□ t(9;11)에서 비정상적인 발현을 보이는 유전자들의 Network 분석 및 관련 유전자 스크리닝
○ t(9;11)에 의해 생성되는 MLL-AF9 fusion 단백질에 의해 비정상적으로 발현이 되는 유전자들을 분석함으로써, t(9;11) 유래 급성 골수성 백혈병의 특이적인 발병 메커니즘을 규명할 수 있음
○ 총 6개의 전사조절인자 (NUCB2, ZNF706, CBX1a, COMMD6, DACH1a, LRRC57)가 Mll-AF9 fusion 단백질에 의해 유사 혈액암 세포주에서 과발현 되는 것을 확인하였음
○ DACH1의 경우, 인간 골수성 백혈병 세포주 THP-1의 증식을 증가 시키는 것을 확인
□ 집락 측정법 (Colony forming assay)을 통한 oncogenic effect 확인
○ MLL-AF9의 표적 유전자의 중 DACH1의 백혈병 유발 유전자로서의 기능을 확인하기 위하여, Colony forming assay를 실시
○ DACH1 도입에 의한 골수전구세포의 집락 형성능 증가 및 형태 확인
○ DACH1 도입에 의한 성숙한 골수세포 및 대식세포 세포표면 표지자 (Cell Surface Marker) Cd11b, Csf1r의 발현 감소를 확인 함으로써, DACH1 의 분화 억제능을 검증
□ DACH1에 의한 세포주기 조절인자의 발현 변화를 총체적으로 분석
○ DACH1 도입에 의한 Cyclin D-Cdk 4/6 및 Cyclin F 발현 증가 확인
○ DACH1 발현 억제에 의한 Cyclin D-CDK 4/6의 발현 감소 확인 및 p21 발현 증가 확인
○ Immunoblot를 이용하여 DACH1의 저발현에 의한 Rb 단백질의 저인산화를 탐지하여 G1 세포주기의 Block 현상을 증명
○ DACH1 발현이 억제 된 HL-60 세포주의 PI 염색 및 Flow cytometry를 통한 세포주기 변화 분석
□ 배아의 발생 조절 및 급성 골수성 백혈병의 가장 핵심적인 분자인 HOXA9과 DACH1의 물리적, 기능적 상호 interaction을 확인
○ DACH1의 과발현으로 HOXA9의 표적 분자인 MEIS1과 PIM1 발암유전자의 발현이 증가함을 Realtime-PCR을 통하여 확인
○ 조혈과정을 조절하는 필수적인 전사조절인자인 C/EBPa, GATA1 이 DACH1의 promoter 활성을 조절하는 것을 밝힘
○ MLL-AF9이 존재하는 골수계 백혈병 세포의 경우, 정상적인 조절을 벗어난 과도한 DACH1의 발현이 골수계 백혈병을 초래하는 것이라 추측 할 수 있음