초록 ▼

연구결과
필요성 및 목표
○ 실험동물자원과에서는 알츠하이머 치매 치료제 개발에 유용한 모델동물을 개발해왔음
○ Pen-2, Presenilin, Nicastrin, APH1이라는 4종류의 단백질로 구성된γ-secreatase는 알츠하이머 치매 원인 단백질인 amyloid-β 생성에 관여하는데, Pen-2, Presenilin, Nicastrin을 과발현하는형질전환동물은 개발되어있으나 APH1 과발현 형질전환동물은 부재함
○ 치매모델로 활용가능한 APH1을 과발현하는 형질전환동물 제작
방법 및 결과
○

연구결과
필요성 및 목표
○ 실험동물자원과에서는 알츠하이머 치매 치료제 개발에 유용한 모델동물을 개발해왔음
○ Pen-2, Presenilin, Nicastrin, APH1이라는 4종류의 단백질로 구성된γ-secreatase는 알츠하이머 치매 원인 단백질인 amyloid-β 생성에 관여하는데, Pen-2, Presenilin, Nicastrin을 과발현하는형질전환동물은 개발되어있으나 APH1 과발현 형질전환동물은 부재함
○ 치매모델로 활용가능한 APH1을 과발현하는 형질전환동물 제작
방법 및 결과
○ APH1 과발현 벡터 제작 및 세포주에서 확인
○ APH1 과발현 형질전환마우스 제작
기대성과
○ 치매모델동물로 활용가능한 유용생명연구자원 확보

Abstract ▼

Genetically Engineered Mouse(GEM) Models are mouse that has had its genome altered through the use of genetic engineering techniques and commonly used for biomedical research or as animal models of human diseases. There has been an increase in the use of genetically modified animals, although the nu

Genetically Engineered Mouse(GEM) Models are mouse that has had its genome altered through the use of genetic engineering techniques and commonly used for biomedical research or as animal models of human diseases. There has been an increase in the use of genetically modified animals, although the number of experimental procedures using conventional laboratory animals has reduced. Laboratory animal resources division of National Institute of Food and Drug Safety Evaluation(NIFDS) is designated as the Bioresources bank in 2010 and is consistently developing useful GEMs for Alzheimer's disease(AD). AD-associated Amyloid beta is generated from the amyloid precursor protein (APP) by two distinct enzymes, β-secretase and γ-secretase. The γ-secretase complex consists of four individual proteins: Presenilin, NCT (nicastrin), APH1 (anterior pharynx-defective 1), and PEN2 (Presenilin enhancer 2). NCT-, PS- and PEN-transgenic mouse is created, but APH1 transgenic mouse is as yet undeveloped.
To generate APH1a overexpressing Tg, we constructed APH1a expression vector(pNSE-APH1a) by inserting APH1a cDNA linked to the promoter of neuronal specific NSE(Neuron Specific Enolase) gene into pTet splice. And we confirmed that expression level of APH1a RNA and protein is higher in SK-N-MC and Neuro2a neuroblastoma cells that were transfected pNSE-APH1 than transfected pEGFP. Also we analysed protein level of NCT, PS and PEN2 which formed γ-secretase complex. The results show increased protein expression level of APH1a, NCT, PS and PEN2 in pNSE-APH1a transfected cells than pEGFP-Cl transfected cell. pNSE-APH1a was digested with AflⅢ and NotⅠ and then linear NSE-APH1a construct was microinjected into fertilized egg obtained from C57BL/6 mice. We obtained 77 new born mice and secured four NSE-APH1a Tg among 36 founder mice. NSE-APH1a Tg will be established through mating with C57BL/6 mice. After confirming germline transmission and phenotype analysis, we will register NSE-APH1a Tg in our Bioresource Bank. We expect that NSE-APH1a Tg can be useful for devlopment of new therapeutic drug to AD with other model mice in our bank.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 자체연구개발과제 최종보고서 ... 2
• 국문 요약문 ... 3
• Summary ... 5
• 목차 ... 7
• 연구개발과제 연구결과 ... 8
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 8
• 제1절 연구개발과제의 목표 ... 8
• 제2절 연구개발과제의 필요성 ... 9
• 제2장 연구개발과제의 국내․외 연구개발 현황 ... 11
• 1. 국내연구 개발현황 ... 11
• 2. 국외연구 개발현황 ... 13
• 3. 알츠하이머 질환모델동물 개발현황 ... 15
• 제3장 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과 ... 17
• Ⅰ. 연구수행 내용 및 방법 ... 17
• Ⅱ. 연구수행 결과 ... 40
• 제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 52
• 제5장 연구개발과제의 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 54
• 제6장 연구개발과제 연구개발 결과 활용계획 ... 55
• 제1절 활용성과 ... 55
• 제2절 활용계획 ... 55
• 제7장 참고문헌 ... 57
• 제8장 첨부서류 ... 58
• 끝페이지 ... 60