초록 ▼

연구결과
필요성 및 목표
○ 최근 유전자변형마우스의 제작과 이용이 급격하게 증가하고 있음. 이들유전자변형마우스를 모두 살아있는 상태로 유지하기에는 시설 및 비용소요가 막대할 뿐 아니라 오염사고 등으로 동물자원을 잃을 가능성도상존. 따라서 효과적으로 자원을 보존하기 위해 수정란 및 정자동결보존이 활용되고 있음
○ 수정란 및 정자동결보존시 마우스의 각 품종별로 최적조건이 모두 다르므로 각 품종별로 최적조건을 확립할 필요가 있음
○ 대부분의 유전자변형마우스는 C57BL/6J를 background로 하여 제작되어 계통

연구결과
필요성 및 목표
○ 최근 유전자변형마우스의 제작과 이용이 급격하게 증가하고 있음. 이들유전자변형마우스를 모두 살아있는 상태로 유지하기에는 시설 및 비용소요가 막대할 뿐 아니라 오염사고 등으로 동물자원을 잃을 가능성도상존. 따라서 효과적으로 자원을 보존하기 위해 수정란 및 정자동결보존이 활용되고 있음
○ 수정란 및 정자동결보존시 마우스의 각 품종별로 최적조건이 모두 다르므로 각 품종별로 최적조건을 확립할 필요가 있음
○ 대부분의 유전자변형마우스는 C57BL/6J를 background로 하여 제작되어 계통보존에 사용될 수 있는 효율적인 수정란 및 정자보존방법을 확립하고자 함
방법 및 결과
○ 마우스 수정란 및 정자 보존방법 문헌조사
○ 마우스의 효율적 수정란 동결보존방법 확립
- 동결조건(첨가제, 동결온도조건 등) 및 해동조건에 따른 C57BL/6J 및 질환모델마우스 수정란의 보존율 평가
○ 마우스의 효율적 정자동결보존방법 확립
- 동결조건(첨가제, 동결온도조건 등) 및 해동조건에 따른 C57BL/6J 및 질환모델마우스 정자의 fertility 평가
기대성과
○ 수정란 및 정자동결보존을 통한 유전자변형마우스 종 보존 기반 확립
○ 질환모델마우스 기탁등록보존기관에서 분양수요가 많지 않은 동물은 수정란 및 정자동결보존을 실시하여 live 동물 유지로 인한 부담 경감

Abstract ▼

Breeding of laboratory animal to maintain a strain needs more cost and labor than cryopreservation of embryo and sperm. In this study, we explored the optimized conditions for stably maintaining the embryo and sperm of laboratory mice. The representative cryopreservation solutions of embryo are the

Breeding of laboratory animal to maintain a strain needs more cost and labor than cryopreservation of embryo and sperm. In this study, we explored the optimized conditions for stably maintaining the embryo and sperm of laboratory mice. The representative cryopreservation solutions of embryo are the kit from CARD in Kumamoto university in Japan and the commercial kit(e.g., LifeGlobal, Irvin VitKit). Recently, cryoprotectant agents such as ficoll 70, raffinose are suggested to have low cytotoxicity in cryopreservation of embryo. In treatment of cryopreservation solutions to embryo, Group 5(15% DMSO, 15% ethylene glycol, 0.1 M raffinose) showed morphological changes and it means a possibility to cause cytotoxicity in thawing embryo. Survival rate and deveolopment rate after thawing embryo were highest in Group 2(2 M DMSO, 1 M acetamide, 3 M propylene glycol). Development rate of embryo from Alzheimer's disease transgenic mice(APPc105) was also high in Group 4(15% DMSO, 15% ethylene glycol,1% ficoll 70, 0.5 M sucrose). The temperature of thawing reagents were changed from 25℃ to 37℃ and it leaded to 4-time increase of survival rate. The interval time of PMSG and hCG injections were prolonged from 46 hr to 48 hr and it leaded to double increase of embryo collection. The concentration of hyaluronidase was diluted from 5 mg/mL to 0.5 mg/mL and it leaded to one and half-time increase of embry collection. The representative cryopreservation solutions of sperm is 18R3S(18% raffinose, 3% skim milk), but it showed low IVF rate. Recently, supplements such as L-glutamine, 1-thioglycerol are suggested to inrease IVF rate. Group 4(18R3S, 1-thioglycerol) showed highest IVF rate and Group 3(18R3S, L-glutamine) showed highest motility after thawing sperm. Thawing time of sperm was optimised to about 10 min because more than 10 min in thawing sperm showed high sperm motility, but low IVF rate.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 자체연구개발과제 최종보고서 ... 2
• 국문 요약문 ... 3
• Summary ... 4
• 목차 ... 5
• 연구개발과제 연구결과 ... 6
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 6
• 제1절 연구개발과제의 목표 ... 6
• 제2절 연구개발과제의 필요성 ... 6
• 제2장 연구개발과제의 국내․외 연구개발 현황 ... 9
• 제3장 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과 ... 12
• 가. 연구개발의 내용 ... 12
• 나. 추진전략 ... 12
• 다. 연구방법 ... 13
• 라. 실험방법 ... 13
• 마. 연구결과 ... 23
• 제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 41
• 제5장 연구개발과제의 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 42
• 제6장 연구개발과제 연구개발 결과 활용계획 ... 43
• 제1절 활용성과 ... 43
• 제2절 활용계획 ... 43
• 제7장 참고문헌 ... 44
• 제8장 첨부서류 ... 47
• 끝페이지 ... 90