보고서 정보
주관연구기관 |
전남대학교 Chonnam National University |
보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2015-11 |
과제시작연도 |
2014 |
주관부처 |
농림축산식품부 Ministry of Agriculture, Food and Rural Affairs(MAFRA) |
등록번호 |
TRKO201600000105 |
과제고유번호 |
1545008540 |
사업명 |
농생명산업기술개발 |
DB 구축일자 |
2016-04-02
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DOI |
https://doi.org/10.23000/TRKO201600000105 |
초록
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Ⅴ. 연구개발결과
1. CsGolS1 유전자 공대수박 형질전환체의 내병성 및 내재해성 계통 선발
CsGolS1 유전자 공대수박 형질전환체에서 수박 만고병균(Didymella bryoniae)에 저항성을 보이는 계통은 T3라인 4계통(GolS4-1-2, GolS4-2-2, GolS4-2-3, GolS4-2-5)과 T4라인 4 계통 (GolS1-2-3-1, GolS10-21-2-4, GolS10-23-2-2, GolS10-25-4-4, GolS10-25-13-1)을 확보하였다. 또한 이들 계통 중 GolS10-21-2-4,
Ⅴ. 연구개발결과
1. CsGolS1 유전자 공대수박 형질전환체의 내병성 및 내재해성 계통 선발
CsGolS1 유전자 공대수박 형질전환체에서 수박 만고병균(Didymella bryoniae)에 저항성을 보이는 계통은 T3라인 4계통(GolS4-1-2, GolS4-2-2, GolS4-2-3, GolS4-2-5)과 T4라인 4 계통 (GolS1-2-3-1, GolS10-21-2-4, GolS10-23-2-2, GolS10-25-4-4, GolS10-25-13-1)을 확보하였다. 또한 이들 계통 중 GolS10-21-2-4, GolS10-25-4-4 계통 덩굴쪼김병균(Fusarium oxysporinum)에 대해서도 항균활성이 확인되었다. CsGolS1 유전자 공대수박 형질전환체에서 먼저 NaCl과 고염 처리에 대한 내염성 정도를 클로로필 함량 측정을 통해 분석한 결과 T3라인 GolS4-1-2과 T4라인 GolS10-25-4-1으로 각각 1계통에 대하여 대조구에 비하여 고염에 대한 내성이 다소 차이가 나타남을 확인하였다. 그러나 고염에 대한 내성의 정도가 차이가 적어 추가적으로 CsGolS1 유전자 형질전환체의 고염에 대한 내성을 지닌 T1 라인 3계통 (GolS10-1-1, GolS13-1-1, GolS45-3-1을 선발하였다. 또한 고온에 대한 내성 검정을 실시한 결과 T1 라인 3계통(GolS9-4, GolS13-1, GolS45-3)을 확보할 수 있었다. 이들 계통에 대해서는 세대진전을 통한 T3 라인 3계통 확보하여 동일한 방법으로 고염과 고온에 대한 내성을 검정하였다.
2. Pep J1-1 유전자 공대수박 형질전환체의 내병성 및 내재해성 계통 선발
Pep J1-1 유전자 공대수박 형질전환체에서 수박 만고병균(Didymella bryoniae)에 저항성을 보이는 계통은 T4라인 17개 계통이 병징 크기에 다소차이가 있지만 모두 대조구에 비교하여 내병성을 있음을 확인하였다. 또한 이들 병원균 중 T4라인 2계통(WJ121-34-24, WJ121-34-36)에 대해서는 탄저병균에 대해서도 저항성을 나타남을 확인할 수 있었다. 또한 이들 계통 중 T4라인 2계통(WJ121-34-14, WJ121-34-15)에서 덩굴쪼김병균(Fusarium oxysporinum)에 대해서도 항균활성이 확인되었다. Pep J1-1 유전자 공대수박 형질전환체에서 먼저 NaCl과 고염 처리에 대한 내염성 정도를 클로로필 함량 측정을 통해 분석한 결과 과 T4 라인 2계통 (WJ121-34-14, WJ121-34-31)이 염에 대한 내성이 있음을 확인하였다.
3. 공대수박 형질전환체 동형접합 호모라인 선발
CsGolS1 유전자 및 Pep J1-1 유전자 공대수박 각 세대 별 형질전환체 선발은 1차적으로 이들 유전자의 도입여부는 pBI121-1 binary vector 내 CaMV 35S promoter 부위와 NPTII 부위에서 primer를 제작하여 확인하였으며 이후 genomic southern 분석과 taq man PCR 분석을 통해 동형접합체 선발실험을 수행하여 최종 2계통(GolS13-1-1, GolS45-3-1)을 선발하였으며, Pep J1-1 유전자 계통에 대하여서도 추가적으로 taq man PCR 분석을 통해 동형접합체 선발실험을 수행하여 5계통(WJ121-34-2-1-4, WJ121-34-15-1-4, WJ121-34-33-1-1, WJ121-34-33-1-4, WJ121-34-33-1-5)을 선발하였다. CsGolS1 유전자 및 Pep J1-1 유전자 형질전환 교잡종은 2014년 14가지 교배조합 중 최종 3계통(WJ121-34-15-1-4 X GolS10-3-1-1과 WJ121-34-31-1-2 X GolS45-3-1-1, GolS10-1-1-1 X WJ121-34-2-1-5)을 선발하여 유전자도입 및 내재해성 검정을 진행하고 있다.
4. Agrobacterium 매개 LsRZF1, LsADC 및 LsSAMDC 유전자가 도입된 공대수박 및 참박 형질전환체 생산
LsSAMDC 유전자가 도입된 형질전환체를 생산하기 위하여 공대수박의 경우 총 1,389개체에 도입하여 이중 989개체가 hygromycin 선발 평균 11.4%, 토양순화 생존 최종개체 확보율은 9개체(0.91)%이었다. 항생제 선발과정을 거치지 않은 개체는 400개체로 이 중 토양순화 생존 개체수는 32개체(8%)으로 나타났으나 순화 후 생육과정에서 모두 고사되었다. 참박을 대목으로 사용한 경우 총 340개체 중 hygromycin 선발 평균 5.1%로 나타났으나 항생제 선발을 거치지 않은 25개체 포함 모두 순화 과정에서 고사되었다. LsRZF1 유전자가 도입된 형질전환체 생산은 공대수박을 사용하여 총 475개체에 도입하여 hygromycin 선발 평균 12%, 토양순화 생존 최종개체 확보율은 2.3%이었다. LsADC 유전자의 경우 대목으로 공대수박을 사용한 경우 총 315개체에 도입하여 hygromycin 선발 평균 3.4%, 토양순화 후 생존하는 개체가 없었고, 생육도중에 모두 고사되었다. 참박을 대목으로 사용한 경우 도입 개체수 총 447개체 중 항생제 선발 효율은 24개체(5.3%)였으나 공대수박과 동일하게 토양 순화과정에서 모두 고사되었다. LsRZF1 유전자가 도입된 식물체 11개체들에 대하여 CaMV35S promoter 부위와 LsRZF1 유전자 부위에서 각각 primer를 제작하여 유전자 도입분석을 실시한 결과 모든개체에서 유전자가 도입되어 있음을 알 수 있었다. 또한 이들 개체에 대하여 LsRZF1 유전자의 발현분석을 실시한 결과 모두 강하게 발현됨을 알 수 있었다. 이와 같이 선발된 11계통을 2세부에 인계하였다.
5. LsRZF1 유전자 기능 분석 및 공대수박 형질전환체로부터 내건성 확인
LsRZF1은 중앙부분에 C3HC4-type zinc finger domain(195-236aa)을 포함하고 있었으며, 건조 스트레스에 대한 LsRZF1 유전자의 발현 양상은 스트레스 처리 후, 정상 조건보다 5배 정도 감소하는 경향으로 나타났음을 알 수 있었다. 또한, LsRZF1은 CFP vector만 형질전환 시킨 원형질체와 마찬가지로 세포질에 발현됨을 알 수 있었다. LsRZF1 유전자 전사 발현량은 삼투 스트레스 조건하에서 1.5배 정도 감소함을 확인 할 수 있었고, ABA 조건하에서 1.1배 정도 감소함을 확인 할 수 있었다. 수분결핍스트레스에 대해 LsRZF1 과발현 및 atrzf1/LsRZF1 형질 전환체들은 매우 감수성임을 알 수 있었다. 정량 분석 결과, LsRZF1 형질전환체들은 20% 이하의 자엽이 녹색화 되는 반면, WT은 30%, atrzf1 돌연변이체는 무려 80%의 유식물체 자엽이 녹색화됨을 알 수 있었다. 또한, 삼투스트레스에 대한 atrzf1/LsRZF1 형질전환체들의 cotyledon greening 결과로 보아, LsRZF1 유전자는 AtRZF1 유전자와 생체 내 유사한 기능을 할 것으로 추정되어진다. LsRZF1 각 형질전환체들은 WT과 atrzf1 돌연변이체 보다 스트레스 마커 유전자들의 전사 유도 증가율이 감소함을 알 수 있었다. 또한, RAB18, RD29A 및 RD29B 유전자들의 전사 발현량을 분석한 결과, LsRZF1 각 형질전환체들은 WT과 atrzf1 돌연변이체 보다 ABA 마커 유전자들의 전사 유도 증가율이 감소함을 알 수 있었다. LsRZF1은 중앙부분에 C3H2C3-type zinc finger domain을 포함하고 있으며, 이러한 C3H2C3-type zinc finger 단백질들은 ubiquitination E3 ligase activity를 가지고 있다는 보고가 된 바 있기 때문에 auto-ubiquitination assay를 수행하였다. Anti-MBP 항체를 이용, auto-ubiquitination assay 결과, LsRZF1 단백질은 E1 및 E2 단백질이 존재 하에 ubiquitination이 이루어짐을 알 수 있었다. 이러한 결과는 LsRZF1 단백질은 AtRZF1과 같이 세포 내 생화학적 기능으로써 E3 ubiquitin ligase임을 알 수 있었다. 현재 11종의 T3세대 LsRZF1 공대수박 형질전환체들로부터 총 7종의 우수 순종 라인들을 선발하였으며, K5-5-3, K6-1-6, K7-6-75 및 K9-8-11 라인들은 WT 보다 더 강한 내건성 표현형이 나타남을 알 수 있었다.
6. LsADC 및 LsSAMDC 유전자 기능 분석 및 애기장대 형질전환체로부터 내건성 확인
푸트레신을 합성하는 Arginine decarboxylase(ADC)와 S-adenosylmethionine decarboxylase (SAMDC) 유전자를 참박으로부터 클로닝하여 환경스트레스 관련 기능을 분석한 결과, 건조 및 고염과 같은 비생물학적 스트레스와 만고병과 탄저병과 같은 생물학적 스트레스에 강하게 발현되는 현상을 확인하였다. 따라서 두 유전자를 식물형질전환 벡터에 클로닝한 후 1세부과제와 함께 대량으로 공대수박으로의 형질전환을 끊임없이 시도하였다. 또한 참박 및 공대수박으로의 형질전환의 효율이 높지 않기 때문에 특히 중요한 LsADC 유전자의 경우는 애기장대에 형질전환하여 그 기능을 확인하였다. 형질전환 후 기내 배양을 하면서 분자생물학적 기법으로 확인한 몇 종의 잠재적인 형질전환체들은 기내에서 순화 시키는 과정 및 온실에서 순화 시키는 과정에서 대부분이 고사하는 현상을 나타내었다. 아마도 폴리아민의 과다발현으로 인한 식물체내의 호르몬 불균형이 그와 같은 결과를 나타냈을 것으로 생각하고 있다. 그러나 다행스럽게 LsADC 유전자가 형질전환된 애기장대 형질전환체는 확보할 수 있었다. 따라서 LsADC 유전자 발현 및 푸트렛신 함량이 높은 LsADC 과발현 형질전환체들 중 두 개 라인을 선발하여 건조 내성에 대한 검정을 실시하였다. 형질전환 애기장대의 내건성을 분석한 결과 col-0에 비해 건조 스트레스에 대한 내성이 높게 관찰되어 LsADC에 의해 형성된 푸트렛신의 증가가 건조 내성을 증가시키는 중요한 역할을 했음을 확인하였다. 또한 애기장대 AtADC 유전자가 형질전환된 애기장대 형질전환체보다 참박 LsADC에 유전자가 형질전환된 애기장대 형질전환체가 형질전환 비율이 4.6배정도 감소하였으나 내건성은 더 우수함을 확인할 수 있었다.
7. 형질전환 대목의 생육 및 특성 분석
CsGolS1 유전자 형질전환체를 대목으로 이용하여 접목 했을 때 15일 후 생존율이 95-97.5%였고 Pep J1-1 유전자 형질전환체 대목은 8일째 생존율은 97.5%로 두 형질전환체 모두 시판되고 있는 대목 품종들과 유사한 수준을 보였다. 생육과 특성에 있어서는 계통마다 다양한 특성을 보여 계통에 따라 대목으로 충분히 이용할 수 있을 것으로 판단되며, F1 교배조합은 CsGolS1 유전자 형질전환체 2계통과 Pep J1-1 유전자 형질전환체 5계통을 모계로 이용하고 야생근연종 수박 3계통을 부계로 이용하여 15조합에서 종자를 얻었고, CsGolS1 유전자 형질전환체 3계통과 Pep J1-1 유전자 형질전환체 3계통을 교배하여 12조합에서 종자를 얻었다. Pep J1-1 유전자 형질전환체와 Pep J1-1 유전자 형질전환체를 모본으로 만든 F1 계통에 대해서 토양수분 조건별 생육 및 과 특성을 조사하여 형질전환 대목 물관리 방법에 대해 검토하였다.
Abstract
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Ⅳ. Research contents and results
1. We produced several homozygous transgenic lines using the cucumber galactinol synthase 1(CsGolS1) gene and pepper defensin(Pep J1-1) gene, respectively, and their enhanced tolerance against several environmental stresses were discussed in these experiments. In
Ⅳ. Research contents and results
1. We produced several homozygous transgenic lines using the cucumber galactinol synthase 1(CsGolS1) gene and pepper defensin(Pep J1-1) gene, respectively, and their enhanced tolerance against several environmental stresses were discussed in these experiments. In order to obtain large pools of transgenic lines that can be developed as resistant root stock for the growth of watermelon against drought and fungal diseases, we continue to produce transgenic Gongdae watermelon and gourd plants using gourd genes such as LsRZF1, LsSAMDC, and LsADC.
2. Several lines of evidence show that AtRZF1 belongs to the C3H2C3-type RING-H2 zinc finger gene family in the complete Arabidopsis genome, and its biochemical functions have reported as one of the negative ubiquitin E3 ligase of stress responses [20]. In an effort to gain an insight into the function of the RING-H2 zinc finger gene in plants, we attempted to isolate the gene in gourd species L. siceraria that encodes for sequences similar to the isolated AtRZF1. The isolated cDNA sequence comprised 918 bp and encoded 305 amino acids with a calculated molecular weight of 33.5 kDa. The protein harbored a predicted zinc finger domain as shown by software program. The deduced amino acid sequence displayed a considerable degree of homology with already identified AtRZF1. The L. siceraria gene was therefore designated as LsRZF1. Overall homology values of 59% identity and 66% similarity were observed between LsRZF1 and AtRZF1 proteins. LsRZF1 contains a single RING domain in its central region that is 83% identical to the corresponding region of AtRZF1 proteins. To obtain clues regarding the functions of LsRZF1, accumulation of LsRZF1 mRNA in 14-day-old gourd seedlings was assessed during drought and mannitol treatment using qPCR. LsRZF1 transcripts were significantly reduced in response to drought and slightly declined during osmotic stress. LsRZF1 mRNA was reduced 5.1- and 1.5-fold by drought and mannitol treatments, respectively. The AtRZF1 protein is a member of the C3H2C3-type RING-H2 protein and has previously been tested for E3 ligase activity [20]. Thus, it was of interest to test the ability of LsRZF1 to function as an E3 ligase in the ubiquitination process. Toward this end, LsRZF1 was tested for E3 ligase activity using in vitro assays. Recombinant MBP-LsRZF1 protein was produced in E. coli and affinity purified using amylase resin. In the presence of E1 and E2, ubiquitinated MBP-LsRZF1 proteins were detected by immunoblot analysis using anti-Ub antibody. In the absence of either E1 or E2, the ubiquitination activity was not observed with MBP-LsRZF1. High-molecular-mass ubiquitinated bands were produced by LsRZF1, indicating that LsRZF1 had Ub E3 ligase activity in vitro. MBP-AtRZF1 protein was use as positive control for in vitro ubiquitin E3 ligase activity. To assess its function in vivo, LsRZF1 ectopic expression was induced in Arabidopsis under the control of the 35S promoter. Sixteen homozygous lines(T3generation) were obtained. Two lines(OX18-2 and OX32-5) with high levels of transgene expression were selected for phenotypic characterization. In an effort to further evaluate the function of LsRZF1 in Arabidopsis, a complementation test was done. LsRZF1 gene was ectopically expressed in the atrzf1 mutant. An independent complementation line was selected and confirmed by RT-PCR. RT-PCR analysis revealed that LsRZF1 transgene was clearly expressed in atrzf1 complementation T3 transgenic plants. This T3 complementation line was used to analyze stress-relatedphenotypes. To assess the effects of LsRZF1 expression on dehydration stress, seeds of WT, atrzf1, atrzf1/LsRZF1 and LsRZF1-ectopic expressing plants were germinated on MS medium. Macroscopically, there was little difference in terms of plant growth among the WT, atrzf1, atrzf1/LsRZF1 and LsRZF1-ectopic expressing plants (OX18-2, OX32-5). The germination ratio among WT, atrzf1, atrzf1/LsRZF1 and LsRZF1-ectopic expressing plants was similar and not poor on MS medium. At 400 mM mannitol, approximately 30% of the WT leaves expanded and turned green 10 days after germination, as compared to less than 18% and 6-14% of the atrzf1/LsRZF1 and LsRZF1-ectopic expressing lines (OX18-2 and OX32-5), respectively. On the contrary, 80% of the atrzf1 mutant line remained alive at 10 days after germination. To assess water loss from leaves, leaves of similar size, age, and positions on WT, atrzf1, atrzf1/LsRZF1 and LsRZF1-ectopic expressing plants were detached and measured for decreases in fresh weight, as described previously [20]. After detachment, leaves from the atrzf1/LsRZF1and LsRZF1-ectopic expressing plants exhibited higher loss of fresh weight than those from WT and atrzf1 plants under ambient conditions. The difference occurred within 20 min, and became more apparent following detachment. These results indicate that physiological processes of drought induced phenotype began faster in the LsRZF1-ectopic expressing line than in the WT and atrzf1 plants. Since AtRZF1 participates negatively in proline production under drought condition [20], we determined the proline content in rosette leaves of WT and transgenic plants. To assess whether there were differences in the accumulation of proline among WT, atrzf1, atrzf1/LsRZF1 and LsRZF1-ectopic expressing plants, the proline contents of leaves were determined at 10 days after drought treatment. Before stress, the contents of proline were at similarly low levels in all seedlings. Under drought stress, a significant difference in proline content was observed among WT, atrzf1, atrzf1/LsRZF1 and LsRZF1-ectopic expressing plants. With regard to proline, the atrzf1 mutant exhibited higher levels than the WT, atrzf1/LsRZF1 and LsRZF1-ectopic expressing plants. The content of proline was slightly more induced by drought treatment in WT and atrzf1/LsRZF1 plants than in the LsRZF1-ectopic expressing plants. To identify the association between LsRZF1 and ABA response, accumulation of LsRZF1 mRNA in 7-day-old gourd seedlings was assessed during ABA treatment using qPCR. qPCR results demonstrated that LsRZF1 mRNA showed 4.3-fold reduction by ABA treatment. As the seeds of the WT, atrzf1, atrzf1/LsRZF1 and LsRZF1-ectopic expressing plants(OX18-2 and OX32-5) were germinated on MS medium containing 0 or 1 mM ABA, the relative reduction in the cotyledon greening of the atrzf1/LsRZF1 and LsRZF1-ectopic expressing lines in response to ABA treatment was more profound than was observed in the WT and atrzf1 plants at 10 days after germination. In the WT plants, the cotyledon greening efficiency dropped to 26% relative to the untreated plants(100%), whereas the cotyledon greening efficiency of atrzf1/LsRZF1 and LsRZF1-ectopic expressing lines was 19% and 11-14%, respectively, of control levels with the experimental concentration of ABA. However, the cotyledon greening efficiency of atrzf1 mutant lines was reduced to 68% of that of untreated plants with the 1 mM ABA. The transcript levels of stress-inducible genes including RAB18, RD29A and RD29B displayed less induction in atrzf1/LsRZF1 and LsRZF1-ectopic expressing OX18-2 and OX32-5 lines than in the WT and atrzf1 plants following ABA treatment. However, expression of the three genes was more induced by ABA treatment in the atrzf1 mutant lines than in the WT plants.
3. The full length of LsADC gene was isolated through RT-PCR using primers designed based on highly conserved region of cucumber ADC gene. Sequence analysis by BLASTX program revealed that the putative amino acid sequence of LsADC shared high identities with known ADCs from other plants, such as cucumber(96%), Nicotiana tabacum(76%), Arabidopsis thaliana(71%) and rice(64%). The LsADC contained two well-conserved motifs characteristic of decarboxylase and a potential chloroplast transit peptide in the N-terminal. LsADC was expressed at high level in the stem, cotyledon and root, whereas a weak signal could be detected in the leaves. Transcripts of LsADC in bottle gourd leaves were induced continuously in response to drought and high salt treatment and pathogen infection as well. Furthermore, the full length of LsSAMDC gene was also isolated through RT-PCR using primers designed based on highly conserved region of cucumber SAMDC gene. Sequence analysis by BLASTX program revealed that the putative amino acid sequence of LsSAMDC shared high identities with known SAMDCs from other plants, such as cucumber(48%), Nicotiana tabacum(71%), Arabidopsis thaliana(67%) and rice(55%). The LsSAMDC contained one well-conserved PEST domain. LsSAMDC was expressed at high level in the stem, cotyledon and root, whereas a weak signal could be detected in the leaves. The expression of ADC2 was highly induced by Pst DC3000 inoculation, while the transcript levels of ADC1 were slightly up-regulated. Compared to the WT plant, Put content in the adc2 knock-out mutant was reduced after Pst DC3000 inoculation, and showed enhanced susceptibility to pathogen infection. The adc2 mutant exhibited reduced expression of PR-1 after bacterial infection and the growth of the pathogen was about 4-fold more than that in the WT plant. Also, we were able to measure putrescine accumulation in transgenic Arabidopsis plants harboring LsADC gene compared to wild type. The transgenic LsADC Arabidopsis plants confers tolerance to drought stress.
4. Generation advancement, investigation of growth characteristics and seed collection was conducted using Galactinol transgenic plant. Collected seeds was seeded and then invested germination rate 4, 8, 12 days after. Grafting compatibility is tested using survival rate 15 days after draft. Fruit qualities and plant height, internode length, leaf length, leaf width was investigated after grafting with general watermelon. Fruit qualities of watermelon was produced using Defensin transgenic plant as rootstock was investigated. Grafting compatibility, growth characteristics, fruit characteristics of F1 from crossbreeding between Defensin transgenic plant and wild wild species was investigated. To test dry tolerance and disease endurance, chlorophyll content and growth of F. oxysporium on crossing parent and F1 extract. To develop superior F1, Defensin and Galactinol transgenic plants were use as mother plants and wild species of watermelon was used as father plant for crossbreeding. Reciprocal cross between Defensin and Galactinol transgenic plants were conducted. Ultimately, seeds from all crosses were collected. To establish the method of the irrigation management, growth and fruit characteristics on the basis of levels of soil moisture were investigated in Defensin transgenic plant, and F1 from mother transgenic plant expressing Defensin. Water was supplied for 3min. at every 15min. intervals during 8~10a.m.. Soil moisture content was 16±2%, 20±2%, 24±2%, 28±2% and 24±2%, 28±2%, 32±2%, 36±2%.
목차 Contents
- 표지 ... 1
- 제출문 ... 2
- 요약문 ... 3
- SUMMARY ... 11
- CONTENTS ... 19
- 목차 ... 20
- 제 1 장 연구개발과제의 개요 및 성과목표 ... 21
- 1절. 연구개발의 목적, 필요성 및 범위 ... 21
- 2절. 연구성과 목표 대비 실적 ... 23
- 제 2 장 국내외 기술개발 현황 ... 25
- 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 28
- 1절. 기후변화 대응을 위한 형질전환 수박 대목 실용화 연구 ... 28
- 2절. 내재해성 및 복합기능성 수박 대목 개발 및 실용화 ... 55
- 3절. 내재해성 수박 대목 품종 육성 및 실용화 연구 ... 72
- 제 4 장 목표달성도 및 관련분야에서의 기여도 ... 89
- 1절. 기후변화 대응을 위한 형질전환 수박 대목 실용화 연구 ... 89
- 2절. 내재해성 및 복합기능성 수박 대목 개발 및 실용화 ... 91
- 3절. 내재해성 수박 대목 품종 육성 및 실용화 연구 ... 95
- 제 5 장 연구개발 성과 및 성과활용 계획 ... 98
- 1. 추가연구의 필요성 및 타 연구에의 활용 ... 98
- 제 6 장 연구개발과정에서의 수집한 해외과학기술정보 ... 99
- 제 7 장 연구시설·장비 현황: 해당사항 없음 ... 100
- 제 8 장 연구실 안전관리 이행실적 ... 101
- 제 9 장 참고문헌 ... 102
- <첨부> 특허, 논문 및 시장분석 보고서 ... 105
- 끝페이지 ... 108
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