초록 ▼

본 연구과제는 윤부 줄기세포의 체외배양 (ex vivo expansion)의 효율을 증가시필 수 있는 최적의 배양법 구축을 목표로 하는 과제로써 동물성분이 배제된 feeder free 방법으로 윤부조각(explant)을 이용한 상피판 제작 기술을 확립하였음. 제작된 상피판에서 JC1 dye를 이용한 side population 방법으로 윤부줄기세포의 비율을 측정하였고 성공적으로 colony를 획득함. 제작된 윤부조각 유래 상피판을 동물에게 이식하기 위한 양막 링 제작 및 양막 위에서 성공적으로 배양되었음. 윤부줄기세포의 효율을 증가

본 연구과제는 윤부 줄기세포의 체외배양 (ex vivo expansion)의 효율을 증가시필 수 있는 최적의 배양법 구축을 목표로 하는 과제로써 동물성분이 배제된 feeder free 방법으로 윤부조각(explant)을 이용한 상피판 제작 기술을 확립하였음. 제작된 상피판에서 JC1 dye를 이용한 side population 방법으로 윤부줄기세포의 비율을 측정하였고 성공적으로 colony를 획득함. 제작된 윤부조각 유래 상피판을 동물에게 이식하기 위한 양막 링 제작 및 양막 위에서 성공적으로 배양되었음. 윤부줄기세포의 효율을 증가시키기 위해 Wnt 신호전달 (signal) 자극조건인 Chiron을 처리하여 줄기세포 효율 및 colony forming efficiency가 증가되었으며 윤부줄기세포 표지자 발현이 증가하였음. 결막의 precursor가 포함된 다층상피세포판을 제작하여 윤부줄기세포결핍 동물모델에 이식하여 각막상피로의 분화와 재생을 확인함. 인체상피판에서 유래된 것을 확인하기 위해 Human nucleri에 대한 면역화학염색 및 CK3 및 CK12 각막상피 분화 마커를 확인하였으며 이식된 상피판에 precursor가 존재함을 확인하였음. 향후 이 연구결과를 바탕으로 첨단의료기술개발을 위한 과제에 지원계획임.

Abstract ▼

The purpose of this study is to develop culture technique without xenogenic factor and feeder for treatment of intractable limbal stem cell deficiency patients sufffering from corneal blindness. In the first year we successfully developed culture technique without xenogenic factor and feeder and cre

The purpose of this study is to develop culture technique without xenogenic factor and feeder for treatment of intractable limbal stem cell deficiency patients sufffering from corneal blindness. In the first year we successfully developed culture technique without xenogenic factor and feeder and created epithelial sheet. Side population (SP) cell percents and colony forming efficiency (CFE) was measured. We cultured limbal explant onto the amniotic membrane ring and cells are successfully grown from the edg. In the second year we treated Wnt signal stimulator Chiron to limbal explant. SP cell rate, CFE, and expression of limbal stem cell markers were increased. In additions, we created multi-layered epithelial sheets from conjunctiva precursor cells and transplanted these sheets onto rabbit limbal stem cell deficiency model. It differentiated into corneal epithelial sheets resulting in clear corneal surface. We secured limbal explant culture technique for the first time nationally and would prepare clinicla trial based on this technique.