초록 ▼

(1) 인체 만성 간질환 및 다단계 간암발생과정에서 telomere dysfunction조절 및 DNA damage 검색
- 다단계 간암 발생 과정에 따라, telomere induced foci (TIF)는 증가하며, telomere의 길이는 짧아지고, telomere dysfunction의 조절 인자인 stathmin, EF1α 의 발현이 증가하며, DNA damage marker인 γ -H2AX의 발현이 증가함.

(2) 세포노화 및 노화분비활성 (SASP)의 주요인자인 IL6 및 관련 pathway (pSTA

(1) 인체 만성 간질환 및 다단계 간암발생과정에서 telomere dysfunction조절 및 DNA damage 검색
- 다단계 간암 발생 과정에 따라, telomere induced foci (TIF)는 증가하며, telomere의 길이는 짧아지고, telomere dysfunction의 조절 인자인 stathmin, EF1α 의 발현이 증가하며, DNA damage marker인 γ -H2AX의 발현이 증가함.

(2) 세포노화 및 노화분비활성 (SASP)의 주요인자인 IL6 및 관련 pathway (pSTAT3, NFκ B, p-p65) 발현 검색
- 동반 병변 없는 간경변, 이형성 병변/결절을 동반한 간경변, 다발성 간암을 동반한 간경변 조직에서 PDX1의 발현은 동반 병변없는 간경변 조직에서 발현이 높고, pSTAT3의 발현은 다발성간암이 동반된 간경변 조직에서 가장 높음을 확인함.

(3) 간암세포주와 노화세포주의 co-culture system 구축
- Fibroblast에 CTGF를 stable expression함으로써 노화 fibroblast 세포주를 수립.
- 노화 fibroblast 세포주와 간암 세포주의 indirect co-culture model 을 수립함.

(4) 인체 만성간질환 및 다단계 간암발생과정에서 SASP 인자에 의한 간줄기세포의 활성화 및 조절 기전
- 인체 다단계 간암발생과정에서 간줄기세포 표지자가 RNA와 단백질 수준에서 점진적으로 증가함을 확인함.
- 인체 다단계 간암발생과정에서 TGF-β 연관 유전자들이 점진적으로 증가함을 제시함. 또한 줄기 세포표지자들과 TGF-β 연관 유전자들의 간암의 크기와 분화가 나쁠수록 증가함을 제시함.

(5) 간암세포주와 노화세포주의 co-culture시 생물학적 특성 변화 검색
- 노화세포와의 co-culture는 간암세포에서 senescence를 유발하였으며 세포 증식을 저해함을 확인함.
- 노화세포와의 co-culture는 간암세포의 stem cell marker인 K19과 EpCAM 발현을 증가시켰으며, SASP factor인 IL6도 증가시켰음.

(6) 인체 만성 간질환 및 다단계 간암발생과정에서 microRNA에 의한 노화분비활성(SASP) 인자 조절기전
- 만성 간질환에 의한 인체 다단계 간암 발생에서 miR-24, miR-124, miR-181b, HNF4α , IL6의 발현은 RNA 수준에서는 큰 차이를 보이지 않았음.
- IL6와 그 downstream signal인 pSTAT3는 단백질 수준에서 발현이 증가함을 확인함.

(7) 간암세포주와 노화세포주의 co-culture에서 간암세포주의 생물학적 특성을 변화시키는 SASP 인자 발굴 및 발굴한 SASP 인자 검증
- Hepatic stellate cell에서 SASP factor 다수의 gene expression이 증가하여 있음을 확인하였고, 이 중 IL8, CXCL1, CXCL12, IL6, CCL20의 secretion을 확인함.
- 발굴한 SASP factor 중 CXCL8 (IL8), CXCL12에 의하여 간암줄기세포표지자 K19, CD133의 발현이 증가함을 확인하였으며, IL6에 의해 EMT regulator의 활성화 및 세포의 이동성 증가가 나타남을 확인함.
- 인체 간암조직에서 IL6의 발현이 높으면 간암에서 간암줄기세포 표지자 K19의 발현이 높고, pSTAT3의 발현이 높고, 수술 후 생존기간이 짧음을 확인함.
- 만성 간염/간경화 환자에서 노화 관련 인자 p21, pSTAT3의 발현이 양성이면, 간암 발생이 증가함을 확인함.

(출처 : 보고서 요약서)

Abstract ▼

III. Results (in vitro study)
- We developed the indirect co-culture model of senescent fibroblast and HCC cell lines. By co-culture, we observed the senescent phenotype in HCC cells.
- We identified SASP factors in co-culture model, including IL8, CXCL1, CXCL12, IL6 and CCL20. The cancer stem

III. Results (in vitro study)
- We developed the indirect co-culture model of senescent fibroblast and HCC cell lines. By co-culture, we observed the senescent phenotype in HCC cells.
- We identified SASP factors in co-culture model, including IL8, CXCL1, CXCL12, IL6 and CCL20. The cancer stem cells were activated by IL8 and CXCL12, and the EMT phenotype was increased by IL6 in HCC cells.(human study)
- In multistep hepatocarcinogenesis, the telomere induced foci, telomere shortening, the expression of stathmin, EF1α, and γ -H2AX were gradually increased.
- In chronic hepatitis or cirrhosis patients, HCC were more frequently occurred in p21- or pSTAT3-positive patients, compared to negative ones.
- HCC with high stromal IL6 expression was related with high K19 expression, and poor survival outcome.

(출처 : SUMMARY)

목차 Contents

• 표지 ... 1제출문 ... 2보고서 요약서 ... 3요약문 ... 5SUMMARY ... 66.1 총괄연구개발과제의 연구성과 실적 및 향후 계획 ... 76.2 연구성과 유형별 세부 내역 ... 87. 참여연구원 현황표 ... 9Ⅱ. 총괄연구과제 연구결과 ... 10 1. 연구개발과제의 배경 및 필요성 ... 11 2. 국내외 기술개발 현황 ... 18 3. 연구개발과제의 추진체계 ... 19 4. 연구개발수행 내용 및 결과 ... 20 5. 목표달성도 및 관련분야 기여도 ... 43 6. 향후 연구성과 추진 계획 ... 46 7. 연구개발결과의 파급효과 ... 47 8. 연구개발결과의 활용계획 ... 47 9. 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 48 10. 참고문헌 ... 49Ⅳ. 첨부서류 ... 51끝페이지 ... 66