초록 ▼

본 연구과제에서는 무세포 단백질 합성시스템을 활용하여 간흡충 유래 유전자 라이브러리로부터 간흡충 진단 및 백신 개발을 위한 항원 후보 단백질을 발현 및 스크리닝 하고자 하였다. 질병관리본부가 기 확보한 5,000여 종의 간흡충 유래 유전자들을 PCR을 통해 T7 프로모터 및 터미네이터 서열을 도입하여 무세포 단백질 발현이 가능한 주형으로 변환한 후, 개별 유전자들을 발현하여 간흡충 환자 혈청에 대한 항원성을 조사하고자 하였다. 무세포 발현된 단백질들을 별도의 정제과정 없이 항원성 검증을 할 수 있도록 주형 유전자를 마이크로 비드에

본 연구과제에서는 무세포 단백질 합성시스템을 활용하여 간흡충 유래 유전자 라이브러리로부터 간흡충 진단 및 백신 개발을 위한 항원 후보 단백질을 발현 및 스크리닝 하고자 하였다. 질병관리본부가 기 확보한 5,000여 종의 간흡충 유래 유전자들을 PCR을 통해 T7 프로모터 및 터미네이터 서열을 도입하여 무세포 단백질 발현이 가능한 주형으로 변환한 후, 개별 유전자들을 발현하여 간흡충 환자 혈청에 대한 항원성을 조사하고자 하였다. 무세포 발현된 단백질들을 별도의 정제과정 없이 항원성 검증을 할 수 있도록 주형 유전자를 마이크로 비드에 접합시키고 발현된 단백질이 동일한 마이크로비드에 고정화되도록 한 후 고정화된 단백질의 항원성을 조사하였다. 이를 통하여 유전자와 이로부터 발현되는 단백질의 항원성이 연결된 고속 항원 스크리닝 시스템을 개발하였다. 유전자 라이브러리로부터 발현 주형을 만들고자 시도한 결과, 2,300여종의 유전자가 성공적으로 증폭되었으며, 이들을 대상으로 한 무세포 발현 및 스크리닝 결과 환자 혈청에 대해 강한 항원성을 가지는 21 종의 신규 단백질들을 발굴할 수 있었다.

(출처 : 보고서 요약문 4p)

Abstract ▼

This study aims to screen novel antigenic proteins against clonorchiasis patients from a genetic library. Cell-free protein synthesis-based expression/screening method was applied for massive investigation of approximately 5,000 genes from Clonorchis sinensis. As the genetic library of KCDC is not c

This study aims to screen novel antigenic proteins against clonorchiasis patients from a genetic library. Cell-free protein synthesis-based expression/screening method was applied for massive investigation of approximately 5,000 genes from Clonorchis sinensis. As the genetic library of KCDC is not cloned in expression vectors, for the preparation of expression-ready template, T7 promoter and terminator have been added to the cloned genes through 3-step PCR procedures. We could amplify approximately 2,300 genes and tested for the antigenicity of the expressed proteins. To integrate the expression, analysis and identification steps, template DNAs were conjugated on the surface of dual functionalized (with streptavidin and Ni-NTA) microbeads so that the expressed proteins are instantly captured on the same bead where the encoding DNAs are conjugated.

As a result, we were able to discover 21 novel proteins that were shown to respond to patient sera.

(출처 : Summary 5p)

목차 Contents

• 표지 ... 1정책연구용역사업 최종결과보고서 ... 2목차 ... 3보고서 요약문 ... 4Summary ... 5제1장 최종 목표 ... 6 1.1 목표 ... 6 1.2 목표달성도 및 관련분야에 대한 기여도 ... 8제2장 국내외 기술 현황 ... 10제3장 최종 연구내용 및 방법 ... 11 3.1 연구내용 ... 11 3.2 연구방법 ... 11제4장 최종 연구결과 ... 16 4.1 무세포 단백질 합성 기술을 위한 기생충 항원후보 유전자 라이브러리 제작 기술 개발 ... 16 4.2 분자 샤페론을 이용한 무세포 단백질 합성 기술 도입 ... 20 4.3 DNA와 단백질의 동시/동소 고정화 테스트 ... 23 4.4 FACS (fluorescence-activated cell sorting)를 이용한 스크리닝 가능성 테스트 ... 25 5. Plate 기반의 항원 단백질 라이브러리 항원성 평가 ... 29제5장 연구결과 고찰 및 결론 ... 31제6장 연구성과 및 활용계획 ... 33 6.1 연구성과 ... 33 6.2 활용계획 ... 34제7장 진행과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 35제8장 기타 중요변경사항 ... 36제9장 연구비 사용 내역 및 연구원 분담표 ... 37 9.1 연구비 사용 내역 ... 37 9.2 연구분담표 ... 37제10장 참고문헌 ... 38제11장 첨부서류 ... 39끝페이지 ... 40