초록 ▼

경제적으로 매우 중요한 가지과 및 콩과식물에 병을 일으키는 식물검역 대상 병원세균 10종(콩과 종자 검역대상 세균 6종, Pseudomonas savastanoi pv. phaseolicola, Pseudomonas syringae pv. pisi, Pseudomonas syringae pv. glycinea, Xanthomonas campestris pv. glycines, Rhodococcus fascians, Clavibacter michiganensis subsp. insidiosus, 가지과 종자 검역대상 세균 4종, Ra

경제적으로 매우 중요한 가지과 및 콩과식물에 병을 일으키는 식물검역 대상 병원세균 10종(콩과 종자 검역대상 세균 6종, Pseudomonas savastanoi pv. phaseolicola, Pseudomonas syringae pv. pisi, Pseudomonas syringae pv. glycinea, Xanthomonas campestris pv. glycines, Rhodococcus fascians, Clavibacter michiganensis subsp. insidiosus, 가지과 종자 검역대상 세균 4종, Ralstonia solanacearum, Pseudomonas syringae pv. tomato, Xanthomonas campestris pv. vesicatoria, Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus)에 대한 검출법을 개발하였다. 본 연구에서는 대상 세균 10종의 대표균주를 수집하였고, 배지에서 형태적ㆍ배양적 특성을 조사하였다. 대상 세균의 검출을 위한 기존에 발표된 PCR방법의 재현성을 검토 후 종자 검출법 개발이 필요한 8종에 대한 PCR 방법을 개발하였고, 검출민감도를 높이기 위하여 9종의 대상세균에 대한 nested PCR 방법을 개발하였다. 본 연구를 통해 개발한 모든 PCR방법은 농수산검역검사본부에서 사용하고 있는 종자 전처리 방법을 그대로 이용할 수 있도록 하였으며, 가능한 종자추출물로부터 DNA를 분리하지 않고 종자추출물을 직접 PCR에 사용하는 direct PCR법을 개발하였다. 대상 세균 중 한 종을 선정하여 거짓양성 반응을 줄이고 정량적 검출이 가능한 실시간 PCR(real time PCR)을 개발하였다. 또한 본 연구에서 매우 유사한 대상 세균을 검출할 수 있는 DNA chip 기술의 사용가능성을 검토하였다. 본 연구를 통해 개발된 PCR 검출기술은 2번의 워크샵을 통해 식물검역원에 전달되었다.

(출처 : 연구결과보고서 요약문 4p)

Abstract ▼

Detection methods of the plant quarantine bacterial pathogens that cause disease on economically important Fabaceae and Solanaceae crops (Pseudomonas savastanoi pv. phaseolicola, Pseudomonas syningae pv. pisi, Pseudomonas syringae pv. glycinea, Xanthomonas campestris pv. glycines, Rhodococcus fascia

Detection methods of the plant quarantine bacterial pathogens that cause disease on economically important Fabaceae and Solanaceae crops (Pseudomonas savastanoi pv. phaseolicola, Pseudomonas syningae pv. pisi, Pseudomonas syringae pv. glycinea, Xanthomonas campestris pv. glycines, Rhodococcus fascians, Clavibacter michiganensis subsp. insidiosus for Fabaceae crops; Ralstonia solanacearum, Pseudomonas syringae pv. tomato, Xanthomonas campestris pv. vesicatoria, Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus for Solanaceae) were developed in this study. The strains representative of each bacterial species were collected and, cultural and colony morphological characteristics were determined on agar media. PCR primers and PCR assays for the bacteria were developed for detection them from the seeds. Nested PCR methods were also developed to increase the detection limit of the PCR assays. Direct PCR assays in which the seed extracts were used directly to PCR were developed. Real time PCR with Taqman probe was developed for one of the target bacteria, P. syringae pv. pisi. Application possibility of DNA chip technique to detect bacterial pathogens from seeds was checked using Clavibacter michiganesis subspecies and PNA chip.

(출처 : SUMMARY 5p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 2
• 목차 ... 3
• 연구결과보고서 요약문 ... 4
• Summary ... 5
• 제1장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ... 6
• 1.1. 총괄연구개발과제의 목표 ... 6
• 1.2. 총괄연구개발과제의 목표달성도 ... 8
• 1.3. 국내·외 기술개발 현황 ... 9
• 제2장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법 ... 11
• 2.1. 균주 수집 ... 11
• 2.2. 대상 병원균의 특성 분석 ... 11
• 2.3. 기존 PCR 방법의 재현성 검증 ... 12
• 2.4. 콩과 종자전염 검역대상 병원세균 PCR 검출법 개발 ... 13
• 2.5. 가지과 종자전염 검역대상 병원세균 PCR 검출법 개발 ... 15
• 2.6. 콩과·가지과 종자전염 검역대상 병원세균 nested PCR 검출법 개발 ... 16
• 2.7. 새로운 PCR 방법 개발(Direct PCR) ... 17
• 2.8. 기존의 검출방법과의 민감도 비교 ... 17
• 2.9. 실시간 (Real-time) PCR방법의 개발 ... 19
• 제3장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 결과 ... 20
• 3.1. 균주 수집 ... 20
• 3.2. 병원균의 배양적 특성 ... 23
• 3.3. 콩과 종자전염 검역세균 검출 PCR 방법의 개발 ... 28
• 3.4. 가지과 종자전염 검역세균 검출 PCR 방법의 개발 ... 55
• 3.5. 종자 조사의 적용 ... 72
• 3.6. Direct PCR ... 82
• 3.7. 선택배지, ELISA를 이용한 검출방법과의 민감도 비교 ... 85
• 3.8. 실시간(Real-Time) PCR을 이용한 P. syringae pv. pisi의 검출 ... 89
• 3.9. PNA 칩의 Clavibacter michigaensis subspecies 검출 가능성 탐색 ... 94
• 3.10. 종자 감염 세균 DNA 추출 표준화 ... 98
• 3.11. 개발된 PCR 검사방법의 검역현장 적용 ... 98
• 제4장 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 99
• 제5장 총괄연구개발과제의 연구성과 ... 102
• 5.1. 활용성과 ... 102
• 5.2. 활용계획 ... 105
• 제6장 기타 중요변경사항 ... 105
• 제7장 참고문헌 ... 106
• 제8장 첨부서류 ... 109
• 총괄 연구과제 요약 ... 112
• 끝페이지 ... 115