초록 ▼

IV. 연구개발결과

- 돼지 게놈분석을 통한 돼지 항미생물펩타이드 12종의 유전자 분석 및 클로닝을 통한 유전자 확보
- 게놈수준에서의 돼지 디펜신 및 카셀리시딘 펩타이드 분석 및 데이터 베이스화
- 항균펩타이드 12종에 대한 radiation hybrid map 작성완료 및 비교유전체지도 작성
- 살모넬라, 병원성 대장균 또는 돼지 질병 바이러스 저항성이 있는 항균 펩타이드로써 beta defensin 1,2 및 3와 PG1, PMAP1 및 PR을 선발함
- 항균펩타이드가 발현된 cell

IV. 연구개발결과

- 돼지 게놈분석을 통한 돼지 항미생물펩타이드 12종의 유전자 분석 및 클로닝을 통한 유전자 확보
- 게놈수준에서의 돼지 디펜신 및 카셀리시딘 펩타이드 분석 및 데이터 베이스화
- 항균펩타이드 12종에 대한 radiation hybrid map 작성완료 및 비교유전체지도 작성
- 살모넬라, 병원성 대장균 또는 돼지 질병 바이러스 저항성이 있는 항균 펩타이드로써 beta defensin 1,2 및 3와 PG1, PMAP1 및 PR을 선발함
- 항균펩타이드가 발현된 cell lysate를 이용하여 in vitro 상에서 항균효과 검증 (Salmonella Enteriditidis, E.coli 0157:H7)
- 확보된 돼지항미생물펩타이드 중 PG1, PMAP1 및 PR에 대한 형질전환 벡터시스템 및 in vitro 발현시스템 개발
- 돼지항균펩타이드 PG1, PMAP1 및 PR 유전자 과발현 형질전환 마우스 3종의 개발
- 돼지항균펩타이드 PG1, PMAP1 및 PR 유전자를 동시에 과발현하는 3중 형질전환 마우스의 개발
- 항균펩타이드 과발현 형질전환 마우스를 대상으로 행동학적 조직학적 수준의 표현형 및 과발 현 부작용의 분석
- 항균펩타이드 과발현 형질마우스를 대상으로한 in vivo 박테리아 감염실험을 통한 항균펩타이드의 효능 분석
- Yeast를 활용한 in vitro 항미생물펩타이드 생산시스템의 개발 및 해당 발현산물의 항균효과 검정
- Salmonella Enteritidis 접종실험
- Listeria monocytogens 접종실험

(출처 : 요약문 5p)

Abstract ▼

III. Results

We performed a genome level analysis to identify anitimicrobial peptide genes in the porcine genome. We constructed radiatio hybrid map to determine the locations of these genes in the pig genome. From the results we identified 12 functional antimicrobial peptides including beta

III. Results

We performed a genome level analysis to identify anitimicrobial peptide genes in the porcine genome. We constructed radiatio hybrid map to determine the locations of these genes in the pig genome. From the results we identified 12 functional antimicrobial peptides including beta defensins, protagrins and calthelicidins. We constructed the vector system to developing transgenic mice overexpressing PG1, PMAP1 and PR genes. We also developed a triple transgenic mice expressing these genes at the same time. Transgenic mice showed increase expression of these animicrobial peptides and also showed abnormal phenotypes probably caused by alteration of normal immune system. The more detailed analysis is currently undergoing. We also developed in vitro expression systems of these antimicrobial peptides using yeast expression system. The in vitro expressed peptides showed some level of antimicrobial activity but the expression level was still relatively low to obtain complete analysis results. The yeast lysates from the in vitro expression of beta defensin 1 showed positive effects on Salmonella Enteriditidis, E.coli O157:H7.

(출처 : SUMMARY 7p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 3
• 요약문 ... 4
• SUMMARY ... 7
• CONTENTS ... 9
• 목차 ... 11
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 13
• 제1절 연구개발의 필요성 ... 13
• 1. 연구개발대상 기술의 경제적·산업적 중요성 및 연구개발의 필요성 ... 13
• 제2장 국내외 기술개발 현황 ... 15
• 제1절 세계적 수준 ... 15
• 1. 무 항생제 사육 동물개발기술 현황 ... 15
• 2. 항생제 대체제 개발 기술개발 현황 ... 15
• 3. 질병저항성 유발언자 발굴기술 현황 및 관련 특허 ... 16
• 4. beta defensin 관련 기술현황 ... 16
• 제2절 국내수준 ... 16
• 제3절 국내·외의 연구현황 ... 17
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 20
• 제1절 연구범위 및 연구수행 방법 ... 20
• 제2절 연구수행 결과 ... 21
• 1. 돼지 항미생물펩타이드의 발굴, 분석 및 발현벡터의 제작 ... 21
• 2. 살모넬라 및 대장균에 대한 돼지 디펜신의 효과 검정 ... 25
• 3. 효모(yeast)를 이용한 돼지 beta defensin 1,2,3 발현 산물의 항균 효능 검정 ... 26
• 4. 형질전환마우스 생산을 위한 항균펩타이드 construct 제작 ... 31
• 5. 항미생물펩타이드 형질전환 마우스 3종 Protegrin 1, PR-26, PMAP-36의 생산 ... 33
• 6. 형질전환마우스의 유전자 발현분석 ... 36
• 7. 합성펩타이드 PG-1을 이용한 돼지 항균펩타이드 항균효능검정 ... 36
• 8. Pichia pastoris를 활용한 돼지 항균 펩타이드의 발현 ... 38
• 9. 항균펩타이드 과발현 마우스 안구의 조직학적 분석 ... 40
• 10. 수립된 형질전환 Yeast의 발현 및 발현산물 확인(세포 내 분비 yeast) ... 41
• 11. 수립된 형질전환 Yeast의 발현 및 발현산물 확인(세포 외 분비 yeast) ... 44
• 12. Salmonella Enteritidis 접종실험 ... 46
• 13. Listeria monocytogens 접종실험 ... 47
• 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 49
• 제1절 연도별 연구목표 및 달성도 ... 49
• 제2절 관련분야의 기술발전에의 기여도 ... 50
• 제5장 연구개발 성과 및 성과활용 계획 ... 52
• 제1절 연구성과 활용실적 ... 52
• 1. 논문게재 ... 52
• 2. 특허성과 ... 52
• 제2절 연구성과 활용계획 ... 52
• 제3절 핵심기술 ... 53
• 제4절 연구결과별 기술적 수준 ... 53
• 제5절 각 연구결과별 구체적 활용계획 ... 54
• 제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 55
• 제7장 참고문헌 ... 56
• 끝페이지 ... 59