초록 ▼

- 안전한 유전자 가위 전달법 개발
· 유전자 가위와 CPP 펩타이드 연결 방법 개발함.
· 기존 플라스미드 검증법에 비해 비특이적 절단이 줄어들어 보다 안전함을 검증.

- 인간 APP 유전자 KO을 위한 유전자 가위 및 Swedish 돌연변이에 선택적으로 작용하는 유전자 가위 제작.
· 정상 APP 유전자 KO 하기 위한 3세대 유전자 가위 제작 및 검증
· APP Swedish 돌연변이 시퀀스를 KO 하기 위한 3세대 유전자 가위 제작

-유전자가위를 이용하여 인간 환자 및 동

- 안전한 유전자 가위 전달법 개발
· 유전자 가위와 CPP 펩타이드 연결 방법 개발함.
· 기존 플라스미드 검증법에 비해 비특이적 절단이 줄어들어 보다 안전함을 검증.

- 인간 APP 유전자 KO을 위한 유전자 가위 및 Swedish 돌연변이에 선택적으로 작용하는 유전자 가위 제작.
· 정상 APP 유전자 KO 하기 위한 3세대 유전자 가위 제작 및 검증
· APP Swedish 돌연변이 시퀀스를 KO 하기 위한 3세대 유전자 가위 제작

-유전자가위를 이용하여 인간 환자 및 동물 세포에서 특정 유전자의 선택적인 교정방법 수립
· ssODN과 유전자 가위를 이용하여 세포 내 유전자 교정
· 유전자가위를 이용하여 인간 환자 및 동물 세포에서 유전자 교정을 통한 세포 표현형 변이 확인.

- 질환 모델에서 생체 내 유전자 조작의 가능성 조사
· 질환 모델에서 생체 내 유전자 조작의 가능성 확인.

- 안전한 생체 내 유전자 전달법 개발
· 유전자가위를 생체 내 전달하기 위해 AAV 바이러스 벡터를 이용하였음.

(출처 : 요약서 3p)

Abstract ▼

Purpose & Contents
The purposes of this study include 1) in vitro generation of KO cells or correction of specific genetic mutations, 2) development of safe delivery methods for programmable nucleases, 3) the correction of genetic mutations uisng nickases, and 4) the development of in vivo genet

Purpose & Contents
The purposes of this study include 1) in vitro generation of KO cells or correction of specific genetic mutations, 2) development of safe delivery methods for programmable nucleases, 3) the correction of genetic mutations uisng nickases, and 4) the development of in vivo genetic modification methods using programmable nucleases. Thus, the ultimate goal of our study is to establish methods to correct genetic abnormalities in vitro and in vivo.

Results
● Develop safe delivery methods for programmable nucleases
· Invent a novel approach to conjugate programmable nucleases and cell-penetrate peptide (CPP)
· Compare safety level between the conventional and CPP-based delivery method
· Adapt AAV-vector for a safer delivery

● Find the programmable nucleases selectively efficient on Swedish mutant and human gene knock-out
· Create/validate the third-generation programmable nuclease to knock-out a normal human gene 'APP'
· Create the third-generation programmable nuclease to knock-out a mutant Swedish sequence

● Establish a novel strategy to edit specific genome sequence in mammalian cells and human by programmable nucleases
· Perform a genome editing with ssODN and programmable nucleases in mammalian cells
· Confirm phenotypic change of human/mammalian cells from programmable nuclease application

● Investigate the potential of genome editing in disease model
· Observe the probability of in vivo genome editing in disease model

Expected Contribution
Based on the previous research progress on the new approach to safely deliver programmable nucleases, we proceeded to develop the safe next-generation programmable nuclease. It is expected to be utilized as cell therapeutic tool in that our programmable nucleases can provoke efficient genome editing without non-specific delivery in induced pluripotent stem cells or adult stem cells. Also, they have an advantage to be applied in cell therapy due to feasible insertion/deletion of specific genomic sequence by using single-stranded oligonucleotide.

When it comes to raising issue in safety of delivering programmable nuclease in vivo, we adapted AAV-vector to ensure safer in vivo approach and confirm the potential of programmable nuclease utilization for broader application.

As generating various knock-out mice models based on the ratio of Alzheimer-related genes, our research team will support to scrutinize the relationship between the occurrence of Alzheimer and disease-associated genes.


(출처 : SUMMARY 6p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제 출 문 ... 2
• 보고서 요약서 ... 4
• 요약문 ... 5
• SUMMARY ... 6
• 목차 ... 7
• 제1장. 연구개발과제의 개요 ... 8
• 1. 연구개발 목적 ... 8
• 2. 연구개발의 필요성 ... 8
• 3. 연구개발 범위 ... 8
• 제2장. 국내외 기술 개발 현황 ... 9
• 1. 주요 기술 현황 ... 9
• 2. 그 밖에 국내외 연구현황 ... 15
• 제3장. 연구 수행 내용 및 성과 ... 16
• 1. 안전한 유전자 가위 전달법 개발 ... 16
• 2. 인간 APP 유전자 KO을 위한 유전자 가위 및 Swedish 돌연변이에 선택적으로 작용하는 유전자 가위 제작 ... 19
• 3. 유전자가위를 이용하여 인간 환자 및 동물 세포에서 특정 유전자의 선택적인 교정방법 수립 ... 24
• 4. 질환 모델에서 생체 내 유전자 조작의 가능성 조사 ... 27
• 제4장. 목표 달성도 및 관련 분야 기여도 ... 30
• 제5장. 연구개발성과의 활용계획 ... 30
• 제6장. 연구 과정에서 수집한 해외 과학기술 정보 ... 31
• 1. 유전자 가위 기반 새로운 유전자 교정 기술 개발 ... 31
• 2. 새로운 타입의 유전자 가위 기술 개발 ... 32
• 제7장. 연구개발성과의 보안등급 ... 33
• 제8장. 국가과학기술종합정보시스템에 등록한 연구시설·장비 현황 ... 34
• 제9장. 연구개발과제 수행에 따른 연구실 등의 안전 조치 이행 실적 ... 35
• 제10장. 연구개발과제의 대표적 연구 실적 ... 37
• 제11장. 기타 사항 ... 38
• 제12장. 참고 문헌 ... 39
• 끝페이지 ... 41