초록 ▼

◦ 국내 HPAI 분리주 및 외국 HPAI 분리주 패널 구축
- '16/'17 동절기에는 H5N6와 H5N8 HPAI가 발생함. H5N6 HPAI는 가금류 268건 및 야생조류 52건으로 320건이었음. H5N8 HPAI은 가금류 39건 및 야생조류 3건으로 총 42건이었음
- 해외도입 바이러스는 45주로 '16년에는 베트남 H5N1(3주) 및 H5N6(4주) 총 7주 도입을 완료함
- 과거 국내 발생 분리주를 포함하여 현재까지 확보된 H5형 AIV 77주는 병원성에 따라 HPAI 65주, LPAI 11주로 나눠지며

◦ 국내 HPAI 분리주 및 외국 HPAI 분리주 패널 구축
- '16/'17 동절기에는 H5N6와 H5N8 HPAI가 발생함. H5N6 HPAI는 가금류 268건 및 야생조류 52건으로 320건이었음. H5N8 HPAI은 가금류 39건 및 야생조류 3건으로 총 42건이었음
- 해외도입 바이러스는 45주로 '16년에는 베트남 H5N1(3주) 및 H5N6(4주) 총 7주 도입을 완료함
- 과거 국내 발생 분리주를 포함하여 현재까지 확보된 H5형 AIV 77주는 병원성에 따라 HPAI 65주, LPAI 11주로 나눠지며 HPAI 바이러스는 총 6개 Clade에 속하고 N1, N6 및 N8 혈청형이 포함됨. 유전형 및 지역 등을 고려하여 대표주 37주를 선발하고 그에 대한 항혈청 패널 24종 생산을 완료하고 추가적으로 항혈청을 생산하여 항원성을 분석중임
- 현재 전 세계적으로 발생하고 있는 주요 유전형은 Clade 2.3.4.4, 2.3.2.1, 2.2.1으로 '16/'17 국내 발생 HPAI H5N6 및 H5N8 바이러스가 속하는 clade 2.3.4.4에는 다양한 N subtype(N1/N2/N5/N6/N8)의 바이러스가 분포함. ‘16년 말부터 ‘17년 초까지 분리된 국내 H5N6 HPAI 바이러스는 Clade 2.3.4.4c 내에서 subgroup C1~C5형 구분하였으며, 유전형별 대표주는 백신후보주로 선정함

◦ 대표주 및 항혈청 패널을 이용한 교차항원성 분석
- 항혈청이 확보된 24주에 대하여 교차반응을 실시한 결과, Clade 2.3.2.1 바이러스간에 8배 이내로 항원적 관련성이 있으며 LPAI 바이러스 2주가 Clade 1.1 및 2.3.4와 상대적으로 높은 항원 관련성이 확인됨
- H5N8 바이러스는 다른 유전형 바이러스들과 교차반응이 나타나지 않아 항원성이 매우 다름이 확인됨
- H5형 항원 패널에 대한 백신후보주 확보하여 Seed bank를 구축하고자 역유전학 기법을 이용하여 rgAIV 제작을 추진함. 대표주 HPAI 바이러스 중에서 각 유전형별로 28종 rgAIV 제작을 완료하였고, 10^6.3~10^8.1 EID₅₀/0.1ml의 증식성을 확인함
- Clade 2.3.4.4 및 2.3.2.1. 백신후보주 3종에 대한 배양조건 및 증식성을 조사하여 10¹~10³ EID₅₀ 바이러스 접종량에서 60시간 배양 조건을 확립하였으며, 면역원성 확인결과 동종 항원에 대한 HI(log2) 역가는 7.5~7.8 수준으로 나타남
- 방어능 실험은 H5형 백신후보주 library 구축을 위한 사전 효능 평가 자료를 확보하는데 있으며, OIE manual에서는 백신 항원량 50 PD₅₀ 또는 3ug HA protein, 공격접종량 10^6.0 EID₅₀, 폐사율 80% 이상을 방어능 기준으로 제시하고 있음
- H5형 백신후보주 library 구축을 위한 사전 효능 평가 자료를 확보하기 위한 실험이 수행되고 그를 위한 평가기준 마련이 필요함
- 평가기준에 따른 백신항원량 제시를 위해 백신후보주별 PD₅₀를 측정하고자 전세계적으로 유행 및 발생 보고되고 있는 clade 2.3.4.4에 속하는 백신후보주 2종(Buan2 및 ES2)을 우선 선정하여 동종 및 이종에 대한 교차방어능 평가를 실시함
- 공격주는 최근 분리된 clade 2.3.4.4c H5N6형 ES2 바이러스로 선정하여, 공격접종량을 10^6.0 EID₅₀으로 실시함
- 백신후보주에 대한 유효백신 dose 및 PD₅₀ 측정을 위하여, Clade 2.3.4.4 및 2.3.2.1 백신 후보주에 대한 dose-dependent 방어능 실험을 수행한 결과, PD₅₀는 각각 46.7 및 158로 확인

(출처 : 연구결과 요약 2p)

Abstract ▼

During November 2016 - April 2017, both H5N6 and H5N8 HPAI have occurred simultaneously in South Korea. In particular, outbreaks by H5N6 were sharply reported to 320 isolates at that short period. Of these, 268 were from poultry farms, and 52 were from wild birds. Moreover, new H5N8 HPAI was also re

During November 2016 - April 2017, both H5N6 and H5N8 HPAI have occurred simultaneously in South Korea. In particular, outbreaks by H5N6 were sharply reported to 320 isolates at that short period. Of these, 268 were from poultry farms, and 52 were from wild birds. Moreover, new H5N8 HPAI was also reported to 42 isolates at the spring this year. These HPAI outbreaks have damaged big socio-economic loss and pose a threat to public health. This study is aimed to establish avian influenza virus library, and to provide basic data necessary for prevention and control for HPAI.

In order to prepare for the emergence of pandemic influenza viruses, we have established an influenza virus library through this study. Total 77 AI viruses have selected from domestic(44) and abroad(33), which are classified into 66 HPAI and 11 LPAI isolates. HPAI viruses belong to 6 clades and contain N1, N6 and N8 serotypes. Of them, the 37 isolates were re-selected as representative viruses considering the genotype and region. To analyze their antigenicity, we produced their antisera using SPF chickens and performed antigenic cartography by cross-HI test. The results showed relatively high antigenic correlation among clade 2.3.2.1 viruses as < 8-fold, and 2 LPAI viruses and clade 1.1 & 2.3.4 viruses.

Moreover, we ave been generated 28 rgAIVs using reverse genetics system and confirmed virus propagation of 10^6.3~10^8.1 EID₅₀/0.1ml in embryo eggs and 7.5~7.8 HI(log2) titer for homologous antigen in SPF chickens. As seed virus, the two viruses(Buan2 and ES2) belonging to clade 2.3.4.4, which were prevalent and occurring globally were investigated the cross-protective efficacy against homologous and heterologous. The clade 2.3.4.4c H5N6 virus(ES2) was selected as challenge virus and the infection dose was 10^6.0 EID₅₀ and their protective efficacy were 46.7 and 158PD₅₀, respectively. In establishing minimum antigen requirements, 50 PD₅₀ or 3ug of haemagglutinin per dose have been suggested and minimum HI serological titeres in field birds should be 1/32 to protect from mortality or greater than 1/128 to provide reduction in challenge virus replication and shedding(OIE).

(출처 : 영문초록 25p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 농림축산검역검사기술개발 연구과제 최종결과보고서 Final Report (FR) ... 2
• Ⅰ. 연구배경 및 목표 ... 4
• 1. 연구배경 ... 4
• 2. 연구최종목표 ... 6
• 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 6
• Ⅱ. 연구방법 및 수행전략 ... 7
• 1. 재 료 ... 7
• 2. 연구전략 및 방법 ... 7
• Ⅲ. 연구결과(제1, 제2세부과제) ... 9
• 1. 국내외 HPAI 항원 패널 구축 ... 9
• 2. 구축된 패널에 대한 항원성 및 교차방어능 평가 ... 17
• Ⅳ. 고찰 ... 21
• Ⅴ. 연구결과요약 ... 22
• Ⅵ. 연구사업 추진상 문제점 및 건의사항 ... 23
• Ⅶ. 주요연구과제 변경사항 ... 23
• Ⅷ. 참고자료 ... 23
• IX. 영문초록 ... 25
• 끝페이지 ... 26