보고서 정보
주관연구기관 |
농림축산검역본부 Animal and Plant Quarantine Agency |
연구책임자 |
최준구
|
참여연구자 |
이수경
,
김현정
,
이지혜
,
김성희
,
강해은
,
김준배
,
정광면
,
이지연
,
하성재
,
최종음
|
보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
|
발행년월 | 2017-12 |
과제시작연도 |
2017 |
주관부처 |
농림축산식품부 Ministry of Agriculture, Food and Rural Affairs(MAFRA) |
등록번호 |
TRKO201800042136 |
과제고유번호 |
1545014794 |
사업명 |
농림축산검역검사기술개발 |
DB 구축일자 |
2018-10-20
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키워드 |
말전염성자궁염.진단킷트.산업화.
|
DOI |
https://doi.org/10.23000/TRKO201800042136 |
초록
▼
◦세부과제명: 말전염성자궁염 유전자 진단법 개발 및 평가
- 국내분리주에 특화된 프라이머, 프로브 제작 및 후보군 선정
- 선정된 프라이머, 프로브 후보군에 대한 민감도(검출한계), 특이도 확인
· 프라이머, 프로브 후보군 1, 2, 3의 검출한계 : 100 copy/㎕
· 말 생식기내 존재하여 감별이 필요한 세균간 비특이 반응 없음
- 선정된 프라이머, 프로브 후보군에 대한 특이도 확인
· T. equigenitalis 와 감별이 필요한 세균 및 환경에서 검출될 수 있는 기타 균
◦세부과제명: 말전염성자궁염 유전자 진단법 개발 및 평가
- 국내분리주에 특화된 프라이머, 프로브 제작 및 후보군 선정
- 선정된 프라이머, 프로브 후보군에 대한 민감도(검출한계), 특이도 확인
· 프라이머, 프로브 후보군 1, 2, 3의 검출한계 : 100 copy/㎕
· 말 생식기내 존재하여 감별이 필요한 세균간 비특이 반응 없음
- 선정된 프라이머, 프로브 후보군에 대한 특이도 확인
· T. equigenitalis 와 감별이 필요한 세균 및 환경에서 검출될 수 있는 기타 균을 대상으로 반응성 평가결과 비특이 반응 없음
- 야외 시료를 이용한 유전자진단킷트 시제품 평가
· 야외 가검시료를 이용한 유전자진단킷트 시제품 평가완료: 개발된 후보 1, 2, 3의 시제품 평가결과 민감도, 특이도, 정확도 면에서 후보 2가 우월한 결과를 나타냄
· 야외시료를 대상으로 기존 검사법과의 비교 평가 완료
◦세부과제명: 말전염성자궁염 유전자 진단킷트 시제품 생산 및 효능 개선
- 유전자 진단 킷트의 시제품 생산
· 교차오염 방지용 유전자 진단 킷트 제작을 위해 uracil DNA glycosylase(UDG)시스템 적용
- 평가결과를 바탕으로 한 시제품 품질 개선
· 야외검체의 민감도, 특이도 개선을 위한 추가 프라이머, 프로브 후보군 선정 및 최적반응을 위한 realtime PCR 조건 확립 및 시약조성 설정 후 민감도, 특이도 확인
- 개발 진단킷트 생산 단계별 품질평가 기준 설정
· 진단킷트 생산 단계 및 단계별 품질평가 기준 설정
· 단계별 품질평가 (Premix 반제품 QC-Control DNA 부품 QC- 완제품 QC) 기준 설정
(출처 : 최종 연구결과 요약 2p)
Abstract
▼
Bluetongue is a non-contagious, arthropod-borne viral disease caused by the bluetongue virus (BTV) in ruminants. BTV is transmitted by various Culicoides biting midges, a tiny blood sucking insect classified into the Ceratopogonidae family. Until now, 27 serotypes of BTVs have been identified worldw
Bluetongue is a non-contagious, arthropod-borne viral disease caused by the bluetongue virus (BTV) in ruminants. BTV is transmitted by various Culicoides biting midges, a tiny blood sucking insect classified into the Ceratopogonidae family. Until now, 27 serotypes of BTVs have been identified worldwide. In Korea, although there have been no direct economic losses by BTV infection in livestock, serotype 1 and 3 BTV was isolated from healthy cattle in 2012 and 2014, respectively. The whole genome of the two Korean BTV isolates were analyzed and the viruses belong to the eastern topotype, and classified as nucleotype H (BTV-1) and B (BTV-3). In addition, the sequence analysis of the Korean isolates suggested that the isolates had undergone vigorous reassortment with the viruses circulating in eastern asian countries such as Japan, China and Taiwan.
Contagious equine metritis (CEM) is a highly transmissible venereal disease of horses caused by the bacterium, Taylorella equigenitalis. The diagnostic test currently recognized by the World Organization for Animal Health (OIE) for CEM for international trade purposes is bacterial isolation and identification. However T. equigenitalis is fastidious, slow growing and readily overgrown by other commensal microorganisms, making it difficult to diagnose CEM by bacterial culture. In order to overcome these difficulties, a molecular detection method (real time-PCR) was developed in this study. We designed primers and probe to detect 16S rRNA gene of T. equigenitalis. The analytical detection limit of the assay was 100 copy/㎕ and it detected T. equigenitalis specifically and did not react with other bacterial species such as T. asinigenitalis , Klebsiella pneumoniae , Pseudomonas aeruginosa and Sterptococcus zooepidemicus . It is expected that the assay developed in this study would be useful in CEM national surveillance in Korea.
(출처 : 영문초록 19p)
목차 Contents
- 표지 ... 1
- 농림축산검역검사기술개발 연구과제 최종결과보고서 Final Report (FR) ... 2
- Ⅰ. 연구배경 및 목표 ... 4
- 1. 연구배경 ... 4
- 2. 연구최종목표 ... 5
- 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 6
- Ⅱ. 연구방법 및 수행전략 ... 6
- 1. 재 료 ... 6
- 2. 연구전략 및 방법 ... 6
- Ⅲ. 연구결과 ... 7
- 1. 제1세부과제명: 말 전염성자궁염 유전자 진단법 개발 및 평가(검역본부 수행) ... 7
- 2. 제2세부과제명: 말 전염성자궁염 유전자 진단킷트 시제품 생산 및 효능개선(산업체 수행) ... 13
- Ⅳ. 연구결과요약 ... 16
- 1. 세부과제명: 말전염성자궁염 유전자 진단법 개발 및 평가 ... 16
- 2. 세부과제명: 말 전염성자궁염 유전자 진단킷트 시제품 생산 및 효능 개선 ... 16
- Ⅴ. 고 찰 ... 17
- Ⅵ. 연구사업 추진상 문제점 및 건의사항 ... 18
- Ⅶ. 주요연구과제 변경사항 ... 18
- Ⅷ. 참고자료 ... 18
- IX. 영문초록 ... 19
- 끝페이지 ... 19
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