초록 ▼

본 연구는 국내 분포하는 홍반열의 원인병원체를 조사하기 위하여 환경 및 인체유래검체를 대상으로 감염실태를 조사 및 유전자의 특성을 분석하고자 하였다. 검체의 수집은 국내 관련 선행 역학조사자료 분석을 통해 쯔쯔가무시증, 리케치아 질환 다량 발생하는 대표적 지역인 강원도와 전라남도지역을 선정, 5월~11월까지의 환경유래검체를 수집하였고 인체유래검체 또한 같은 이유로 한국의 북동부에 위치한 강원대학교 병원과 남서부에 위치한 충남대학교 병원을 각각 선정하여 환자검체를 수집하였다.

환경유래 검체 중 진드기의 리케치아 감염율은

본 연구는 국내 분포하는 홍반열의 원인병원체를 조사하기 위하여 환경 및 인체유래검체를 대상으로 감염실태를 조사 및 유전자의 특성을 분석하고자 하였다. 검체의 수집은 국내 관련 선행 역학조사자료 분석을 통해 쯔쯔가무시증, 리케치아 질환 다량 발생하는 대표적 지역인 강원도와 전라남도지역을 선정, 5월~11월까지의 환경유래검체를 수집하였고 인체유래검체 또한 같은 이유로 한국의 북동부에 위치한 강원대학교 병원과 남서부에 위치한 충남대학교 병원을 각각 선정하여 환자검체를 수집하였다.

환경유래 검체 중 진드기의 리케치아 감염율은 강원도 22.65%, 전라남도 3.03%로 조사되었고 설치류의 감염율은 강원도 10.71%, 전라남도 13.92%로 조사되었다 (gltA 유전자기준). 또한, 인체유래 검체의 감염율은 15.52%으로 조사되었다.

리케치아의 분리를 위해 세포주 Vero세포에 양성으로 확인된 리케치아 샘플을 감염시킨 결과, 환경검체를 대상으로 진드기유래 29개, 설치류유래 3개 (gltA 유전자 기준)로 분리주를 확보하였고 인체유래검체는 9개 (gltA 유전자기준)의 분리주를 확보하였다. 이때,분리주 리케치아의 확인은 1차에서 3차 배양으로 Culture-scale up하여 얻은 세포배양액을 이용한 PCR (17-kDa, ompB 유전자)의 확인 및 IFA 또는 CPE로 확인하였다.

분리주 리케치아의 분자역학적 특성분석은 인체유래검체에서 분리된 R. japonica와 99% 유사성을 보인 새로운 종인 R. koreansis와 R. monacensis의 라이브러리 구축을 위해 whole genome sequencing 분석하였으며 참조균주와의 각 유전자 및 COG등을 분석한 결과, 분리주에서만 발현하는 단백체 및 유전자 등이 나타났다. 또한, 분리주 리케치아의 in vitro 계대별 유전자변이의 변화는 Invasion & Adhesion에 관여하는 표면단백유전자들을 타겟으로 하여 RT-qPCR을 진행하였고, 분자역학 특성연구는 ompB, sca4 유전자 등의 염기서열을 분석하여 비교하고자 하였다.

분리주 리케치아의 in vivo에서의 병원성 확인을 위해 3 strains (C3H/HeJ, C3H/HeN, and BALB/c)의 마우스에 1x10^4~7의 분리주 Rickettsia를 접종하고 dpi 1, 3, 7, 14에서의 rickettsial load의 정량 및 관련 유전자 발현의 변이를 분석하고자 하였다. 환자유래-분리주 리케치아와 보고된 국내·외 리케치아 와의 분자 역학적 특성을 분석한 결과,ompB유전자의 여러 부위 (I ~ VII)에서 R. japonica 또는 R. heilongjiangensis와 98~99%의 유사성을 보인 분리주 그룹인 R. koreansis, 그리고 R. monacensis와 99%의 유사성을 보인 분리주 그룹으로 분류되는 특성을 보였다.

(출처 : 요약문 4p)

Abstract ▼

The purpose of this study was to investigate the status of infection and genetic characteristics of environmental and human specimens in order to investigate causative agents of erythema. The collection of specimens was carried out by analyzing the data of preliminary epidemiological survey related

The purpose of this study was to investigate the status of infection and genetic characteristics of environmental and human specimens in order to investigate causative agents of erythema. The collection of specimens was carried out by analyzing the data of preliminary epidemiological survey related to Korea, Gangwon and Jeollanam provinces, which are major representative areas of scrub typhus and Rickettsia, were selected and environmental samples from May to November were collected. Kangwon University Hospital located in the Northeastern part of Korea and Chungnam National University Hospital located in the Southwestern part were selected and patient samples were collected. The result of infection rates of Rickettsia in the environmental samples were 22.65% in Gangwon province and 3.03% in Jeollanam province (based on gltA). In addition, the infection rates of rodents were 10.71% in Gangwon province and 13.92% in Jeollanam province. The infection rates of the human-derived specimen was 15.52% (based on gltA gene). In order to isolate and infect Rickettsia, Vero cell was infected with a positive sample of Rickettsia. As a result, 29 isolates from ticks and 3 isolates from rodents (based on gltA) were obtained from environmental samples and 9 isolates from human blood (based on gltA). At this time, identification of the isolate Rickettsia was confirmed by PCR (17-kDa, ompB), IFA and CPE method using culture medium obtained from culture-scale up from primary (in 24 well) to tertiary (in T25 flask) culture. Molecular epidemiological characterization of the isolated Rickettsia was performed by whole genome sequencing to construct a 20-kb library of R.koreansis and R. monacensis isolated from human-derived samples. In addition,RT-qPCR was performed on the surface protein genes involved in invasion & adhesion, and the molecular epidemiological characteristics of the isolates were compared with those of ompB, sca4 gene nucleotide sequences. In order to confirm the virulence of isolated Rickettsia, 3 strains (C3H/HeJ, C3H/HeN, and BALB/c) mice were inoculated with 1 × 10^4~7 and were harvested the organs in dpi 1, 3, 7, and 14, and qRT-PCR was performed to quantify of rickettsial load and gene expression in vivo. Molecular characterization of isolated Rickettsia and reference Rickettsiasp. (based on NCBI) showed 98-99% homology with R. japonica or R.heilongjiangensis in various parts of the ompB gene (fragments I to VII), and showed 99% homology to R. monacensis.

(출처 : SUMMARY 5p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 학술연구개발용역과제 최종결과보고서 ... 2
• 목차 ... 3
• 연구결과최종보고서 요약문 ... 4
• Summary ... 5
• 학술연구개발용역과제 연구결과 ... 6
• 제1장 최종 목표 ... 6
• 제2장 국내외 기술 현황 ... 9
• 제3장 최종 연구 내용 및 방법 ... 10
• 제4장 최종 연구 결과 ... 20
• 제5장 연구결과 고찰 및 결론 ... 58
• 제6장 연구성과 및 활용계획 ... 59
• 제7장 연구용역과제 진행과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 62
• 제8장 기타 중요변경사항 ... 62
• 제9장 연구비 사용 내역(당해년도) 및 연구원 분담표 ... 63
• 제10장 참고문헌 ... 65
• 제11장 첨부서류 ... 66
• 끝페이지 ... 79