초록 ▼

□ 연구개요
1차년도 (2016): 말기신부전 환자에서 유래된 호중구의 증가된 세포외 트랩 (NET)의 형성과 연관된 임상적 특징, 내피세포 기능부전 및 동맥경화와의 연관성 조사하였다.
2차년도 (2016-2017): 말기신부전 혈청 내 호중구 세포외 트랩 형성 증가를 객관적으로 증명하고, 그 기전을 연구하였다.
3차년도 (2017-2018):2차년도에서 시행된 결과를 이용하여, 혈중 nucleosome level 의 prognositc effect를 확인하고, 세포연구를 시행하여 neutrophils- endoth

□ 연구개요
1차년도 (2016): 말기신부전 환자에서 유래된 호중구의 증가된 세포외 트랩 (NET)의 형성과 연관된 임상적 특징, 내피세포 기능부전 및 동맥경화와의 연관성 조사하였다.
2차년도 (2016-2017): 말기신부전 혈청 내 호중구 세포외 트랩 형성 증가를 객관적으로 증명하고, 그 기전을 연구하였다.
3차년도 (2017-2018):2차년도에서 시행된 결과를 이용하여, 혈중 nucleosome level 의 prognositc effect를 확인하고, 세포연구를 시행하여 neutrophils- endothelial cells 상호관계(crosstalk)를 조사하였다.

□ 연구 목표대비 연구결과
- 말기신부전 환자의 호중구의 활성화 상태 및 NET형성 정도가 정상인과 차이가 있는 지를 확인하였다 또한 증가된 NET형성정도와 연관이 되어 있는 임상 및 생화학적 표지인자를 확인하였다
- 말기신부전 환자 및 정상인의 상완동맥의 FMD (flow-mediated dilatation)을 측정하여, 말기신부전 환자의 increased NET 정도와 혈관의 내피세포 기능장애와의 연관성을 조사하였으며, 의미있는 음의 상관관계를 확인하였다.
- 혈중 in vivo NET의 양을 반영하는 serum biomarker를 찾기 위해, circulating nucleosome level, serum MPO (myeloperoxidase) level 및 DNase I level을 측정하여 상호 연관성을 확인하였다.
- 증가된 NET 형성정도를 직접적으로 정량하기 위해 neutrophil에서 유래된 neutrophil elastase (NE) level 을 측정하고, confocal microscopy를 이용하여 direct visualization으로 확인하였다. 또한 정상인 및 환자에서 neutrophil을 isolation하여 기저상태 및 PMA 자극에 대한 NET 반응정도가 다른 지를 확인하였다.
- 요독성 환경에서 증가된 NET의 기전을 확인하기 위하여 호중구 내 자가포식작용(autophagy)를 정상인과 투석환자에서 비교한 후 자가포식작용과 NET형성과의 연관성을 사하였다. In vitro test를 위해, HL-60 cell line 을 neutrophil 로 분화시켜, 말기신부전 환경의 각종 자극에 대한 NET formation을 확인하여 요독인자와 NET형성과의 관계를 확인하였다, 또한 자극에 의해 유리된 NET을 HUVEC line에 처리하여 direct endothelial cell toxicity를 확인하였다.
- Increased NET의 prognostic marker 로서의 기능을 확인하기 위해 all-cause mortality 및 fatal and nonfatal cardiovascular outcomes을 조사하여 의미있는 인자로서의 그 기능을 확인할 수 있었다.

□ 연구개발결과의 중요성
본 연구자는 지난 3년간의 연구를 통하여, 말기신부전 환자의 경우, 정상인에 비해 혈액 내순환 호중구의 수가 의미있게 증가되어 있고, 그 기능도 활성화되어 있어 산화스트레스 및 호중구 세포 외 트랩(neutrophil extracellular traps, NETs) 형성이 증가되어 있음을 혔다. 특히 이렇게 증가된 NETs는 혈관 내피세포 손상 정도 (endothelial dysfunction)와 매우 밀접하게 연관되어 있었으며, 이는 투석 환자의 장기간 심혈관계 질환의 유병률을 크게 높였고, 더 나아가 사망률의 증가에 영향을 미치는 것으로 확인 되었다. 본 연구결과를 통하여, 투석환자의 장기예후를 결정하는 중요한 바이오 마커로 in vivo NET amount가 유용할 것으로 생각되며, 결국 과도한 NET을 억제하는 것이 장기 예후개선에 도움이 될 수 있다는 중요한 근거가 된다. 본 연구는 NET이 therapeutic target이 될 수 있음을 시사한다.

(출처 : 요약문 3p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 연구결과요약문 ... 3
• 목차 ... 4
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 4
• 2. 연구수행내용 및 연구결과 ... 5
• 연구결과 1) 말기신부전 환자의 호중구의 활성화 상태 및 NET형성 정도가 정상인과 차이가 있는 지를 확인함 ... 5
• 연구내용 2) 말기신부전 환자의 증가된 NET과 연관이 되어 있는 임상 및 생화학적 표지인자를 확인 ... 6
• 연구내용 3) 말기신부전 환자 및 정상인의 상완동맥의 FMD (flow-mediated dilatation)을 측정하여, 말기신부전 환자의 increased NET 정도와 혈관의 내피세포 기능장애와 연관이 있는 지를 확인함 ... 6
• 연구내용 4) 혈중 NET을 반영하는 serum biomarker를 찾기 위해, circulating nucleosome level, serum MPO(myeloperoxidase) level 및 DNase I level을 측정하여 비교함 ... 7
• 연구내용 5) 증가된 NET 형성정도를 정량하기 위해 neutrophil에서 유래된 neutrophil elastase (NE) level 을 측정하고, confocal microscopy를 이용하여 direct visualization으로 확인 후, 정상인 및 환자에서 neutrophil을 isolation하여 기저상태 및 PMA 자극에 대한 NET 반응정도가 다른 지를 확인함 ... 7
• 연구내용 6) 호중구 내 자가포식작용(autophagy)를 정상인과 투석환자에서 비교한 후 자가포식작용과 NET형성과의 연관성을 확인함 ... 9
• 연구내용 7) In vitro test를 위해, HL-60 cell line 을 neutrophil 로 분화시켜, 말기신부전 환경의 각종 자극에 대한 NET formation을 확인하여 어떤 인자가 중요한지 확인 ... 10
• 연구내용 8) 위에서 유리된 NET을 HUVEC line에 처리하여 direct endothelial cell toxicity를 확인하 ... 11
• 연구내용 9) Increased NET의 prognostic marker 로서의 기능을 확인하기 위해 투석 시작당시의 nucleosome level 과 long-term all-cause mortality 및 fatal and nonfatal cardiovascular outcomes을 확인함 ... 11
• 3. 연구개발결과의 중요성 ... 12
• 4. 참고문헌 ... 13
• 5. 연구성과 ... 14
• 대표적 연구실적 ... 15
• 끝페이지 ... 26