초록 ▼

연구개요
- 난자에 체세포 복제 수정란이라는 비정상적인 세포의 발달을 막는 생화학적 방어 기전의 존재를 증명
- 성숙난자의 세포질에 존재하는 Rnf12에 의해 발현된 Xist가 X 염색체 비활성화 (XCI)를 유도하여 작동하는 것으로 추정
- 정상 수정란의 발달에서 XCI는 X linked 유전자에 대한 dosage compensation을 위해 기능하지만, 본 연구에서는 생식세포와는 다른 imprinting 특성을 지닌 체세포 복제 수정란의 발달을 차단하는 부가적인 역할을 한다는 가설을 실험을 통해서 증명(proo

연구개요
- 난자에 체세포 복제 수정란이라는 비정상적인 세포의 발달을 막는 생화학적 방어 기전의 존재를 증명
- 성숙난자의 세포질에 존재하는 Rnf12에 의해 발현된 Xist가 X 염색체 비활성화 (XCI)를 유도하여 작동하는 것으로 추정
- 정상 수정란의 발달에서 XCI는 X linked 유전자에 대한 dosage compensation을 위해 기능하지만, 본 연구에서는 생식세포와는 다른 imprinting 특성을 지닌 체세포 복제 수정란의 발달을 차단하는 부가적인 역할을 한다는 가설을 실험을 통해서 증명(proof of concept)
- 이를 확인하기 위해 X-linked GFP reporting system을 사용하여, X-linked 유전자들의 발현여부를 GFP를 통해 육안으로 확인 및 선별하는 실험기법을 도입
- 본 연구의 실험기법이 복제수정란의 리프로그래밍 상태에 대한 정성적인(qualitative) 측면을 판단하는 올바른 기준으로 작용함을 확인

연구 목표대비 연구결과
1차년도 (2015~2016)
- Porcine HPRT 유전자 CRISPR/Cas9 및 GFP KI vector 제작 : 완료
- CRISPR/Cas9 매개 KI condition 및 HPRT linked GFP cell line 확보 : 완료

2차년도 (2016~2017)
- HPRT linked GFP reporting 복제 수정란에서 TE 특이적 GFP reporting 기능성 평가 : 완료
- HPRT linked GFP reporting 복제 수정란 중 TE 특이적 GFP positive 배반포만을 대리모에 이식 : 완료

3차년도 (2017~2018)
- Xist LD 복제수정란 이식 및 복제 효율 개선 확인 : 완료
- Xist LD + ZsGFP reporting 세포주 제작 및 핵이식 실험 진행 : 완료
- Rnf12 매개 X 염색체 비활성화를 억제하는 compound 발굴 및 복제수정란의 발달에 미치는 영향 평가 : 미완료

연구개발결과의 중요성
- 중대동물의 체세포에서 CRISPR/Cas9를 이용한 KO/KI 실험기법 확립
- 수정란 발달 초기에 유전자의 epigenetic 변화에 의한 유전자 발현 여부를 시각적으로 관찰할 수 있는 monitoring system 구축
- 종 간(마우스, 돼지)의 ICM에서 epigenetic reprogramming 시기 차이 확인
- 돼지에서 ICM 유래 embryonic stem cell을 확보할 수 있는 발달 단계 확인
- 돼지에서 비외과적 수정란 이식 기술 개발

(출처 : 요약문 2p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 연구결과 요약문 ... 2
• 목차 ... 3
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 3
• 2. 연구수행내용 및 연구결과 ... 4
• 3. 연구개발결과의 중요성 ... 11
• 4. 참고문헌 ... 12
• 끝페이지 ... 13