초록 ▼

□ 연구개요
치주질환은 세균감염질환으로서 만성염증을 초래하여 성인에서 치아상실을 유발하는 가장 중요한 원인. Filifactor alocis는 최근 밝혀지기 시작한 원인 세균 중 가장 중요한 균으로서 치주조직파괴에 직접적으로 관여하는 중요한 pathobiont로 알려져 있음. 본 연구에서는 F. alocis를 억제하는 수동면역백신으로 사용할 식물항체를 생산하기 위해 첫 단계로 마우스에서 단클론항체를 생산. 단클론항체 중에서 F. alocis와 면역반응이 강하고 이 균의 감염을 가장 잘 억제하는 단클론항체를 선정한 후 이와 반응

□ 연구개요
치주질환은 세균감염질환으로서 만성염증을 초래하여 성인에서 치아상실을 유발하는 가장 중요한 원인. Filifactor alocis는 최근 밝혀지기 시작한 원인 세균 중 가장 중요한 균으로서 치주조직파괴에 직접적으로 관여하는 중요한 pathobiont로 알려져 있음. 본 연구에서는 F. alocis를 억제하는 수동면역백신으로 사용할 식물항체를 생산하기 위해 첫 단계로 마우스에서 단클론항체를 생산. 단클론항체 중에서 F. alocis와 면역반응이 강하고 이 균의 감염을 가장 잘 억제하는 단클론항체를 선정한 후 이와 반응하는 F. alocis 항원단백질을 표적항원(백신후보항원)으로 동정한 다음 재조합단백질을 대장균에서 발현. 한편, 표적항원에 대한 이 단클론항체의 유전자를 클로닝하여 벼 callus를 형질전환. 형질전환된 벼 callus의 현탁배양을 통해 식물 단클론항체, 즉 식물항체를 생산하였고, 생산한 식물항체의 표적항원과의 면역반응, 치주인대세포 침투 및 동물 abscess 모델에서 F. alocis 감염 억제효과를 관찰하였음.

□ 연구 목표대비 연구결과
목표 : F. alocis에 대한 표적항원 발굴 및 재조합단백질 생산
연구결과 : 마우스에서 생산한 단클론항체 중 가장 면역반응이 강한 항체에 대한 표적항원은 MALDI MS/MS 분석을 통해 F. alocis의 80(95)-kDa copper amine oxidase N-domain protein (HMPREF0389_ RS08505)로 동정되었고, 이 표적항원을 대장균에서 재조합단백질으로 발현

목표 : 표적항원에 대한 단클론항체의 유전자 클로닝
연구결과 : 단클론항체의 heavy, light chain 유전자를 PCR로 증폭한 후 pGEM-T 벡터에 클로닝하여 염기서열을 분석한 다음 이들 유전자를 식물벡터에 클로닝

목표 : 벼 callus의 형질전환 및 식물항체의 생산
연구결과 : 클로닝된 식물발현벡터를 gold particle에 코팅하여 bombardment로 벼 callus를 형질전환시킨 후 현탁배양하여 항체단백질(=식물항체)을 생산하여 Protein-G column으로 정제

목표 : 식물항체의 F. alocis 방어능 및 감염억제효과 관찰
연구결과 : 현재 생산된 식물항체는 light chain의 발현은 아주 미약하여 heavy chain으로만 구성된 것으로 밝혀짐. 이 식물항체는 F. alocis 및 대장균에서 발현된 F. alocis의 재조합 copper amine oxidase N-domain protein과 반응하였고, 치주인대세포침투 억제효과, 마우스 abscess 모델에서 감염지연효과가 관찰됨

□ 연구개발결과의 중요성
1. F. alocis는 최근에 들어서야 구강미생물학분야에서 주목받기 시작한 치주질환 원인 pathobiont. 본 연구는 F. alocis 제어와 관련한 학계 최초 시도이며, 이를 통해 F. alocis의 제어분야에서 기술적으로 선도역할을 할 수 있는 계기를 마련.
2. 생산된 식물항체는 치주질환 억제 전략이나 F. alocis 검색 수단으로 이용 가능.
3. 연구과제 수행과정을 통해 얻은 일련의 식물항체 생산기술은 또 다른 미생물에 대한 식물항체 생산 또는 중요 단백질 발현을 위한 식물형질전환체 개발에 응용 가능.
4. 본 연구의 표적항원 선택과 검증에 이용한 전략은 백신관련 연구에 중요한 기반 자료로 활용 가능.

(출처 : 요약문 2p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 연구결과 요약문 ... 2
• 목차 ... 3
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 4
• 2. 연구수행내용 및 연구결과 ... 5
• 1) 1차년도 ... 5
• 2) 2차년도 ... 6
• 3) 3차년도 ... 8
• 3. 연구개발결과의 중요성 ... 12
• 1) 치주질환의 문제점 ... 12
• 2) F. alocis를 억제하는 연구의 중요성 ... 12
• 3) 치주질환 치료 및 예방용 백신 ... 13
• 4. 참고문헌 ... 13
• 5. 연구성과 ... 15
• 끝페이지 ... 17