초록 ▼

□ 연구의 목적 및 내용
본 연구의 주요 목적은 골수 근간세포로부터 면역관용 특성의 수지상세포를 최대한 다량으로 생산하는 최적 방법을 개발하는 것, 생산된 수지상세포가 면역관용을 유도한다는 것을 시험관 내 실험 및 생쥐를 이용한 생체 내 실험을 통하여 입증하는 것임. 주요 연구내용은 minocycline을 이용하여 면역관용 특성의 수지상세포의 생산을 크게 증가시킬 수 있음을 입증한 것, minocycline과 dexamethasone을 병용하면면역관용 유도기능이 탁원한 면역관용 수지상세포를 효과적으로 생산할 수 있음을 입증한

□ 연구의 목적 및 내용
본 연구의 주요 목적은 골수 근간세포로부터 면역관용 특성의 수지상세포를 최대한 다량으로 생산하는 최적 방법을 개발하는 것, 생산된 수지상세포가 면역관용을 유도한다는 것을 시험관 내 실험 및 생쥐를 이용한 생체 내 실험을 통하여 입증하는 것임. 주요 연구내용은 minocycline을 이용하여 면역관용 특성의 수지상세포의 생산을 크게 증가시킬 수 있음을 입증한 것, minocycline과 dexamethasone을 병용하면면역관용 유도기능이 탁원한 면역관용 수지상세포를 효과적으로 생산할 수 있음을 입증한 것, 면역관용 수지상세포가 면역관용을 나타내는 기작을 밝힌 것 등임.

□ 연구결과
○ 생쥐 골수 세포에 GM-CSF 및 IL-4와 더불어 minocycline을 첨가하여 배양하면, 생산되는 수지상세포의 수가 약 60% 이상 증가하며, 이 수지상세포 (mDC)는 면역관용 수지상세포의 특성을 나타냄을 입증함
○ mDC의 세포 표현형적 및 기능적 특성을 규명하였으며, 특히 experimental autoimmune encephalitis (EAE) 유발 모델에서 mDC의 혈관 내 주사는 EAE 발병을 억제하는 효능을나타냄을 확인함
○ Minocycline과 더불어 rapamycin, dexamethasone, vitamin D3, IL-10 을 각각 가한 조건에서 수지상세포를 생산하여, 최종적으로 얻어지는 세포의 총 수, 세포 표현형적 및 기능적 특성, allogeneic T cell 활성화 능력의 차이 비교 등을 비교 분석함
○ Minocycline (5 μM)과 dexamethasone (1 μM)을 병용하여 면역관용 특성의 수지상세포를 효율적으로 생산할 수 있다는 결론을 도출함
○ Minocycline 및 dexamethasone을 병용하여 생산한 면역관용 수지상세포 (mdDC)는 MHC 분자를 통한 항원제시능 및 면역반응 유도 싸이토카인의 생산은 감소되어 있으나,면역억제 싸이토카인의 생산능 및 co-inhibitory 분자의 발현은 증가되어 있음을 밝힘
○ mdDC는 CD4+CD25- T cell로부터 CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cell의 생산을 유도하는 능력이 강력함을 입증함
○ Minocycline이 수지상세포 생산을 증가시키는 기전의 하나는 inhibitor of DNA binding 3 (Id3) 유전자의 발현을 증가시키기 때문임을 확인함

□ 연구결과의 활용계획
○ Minocycline을 이용하여 면역관용 수지상세포의 생산을 크게 증가시킬 수 있다는 사실은 국내특허등록을 통하여 지식재산권을 획득한 상태이며, 향후 기술이전을 추진함
○ M-CSF 및 IL-4와 더불어 minocycline 및 dexamethasone을 이용하여 면역관용 유도능이 강력한 수지상세포를 생산한다는 연구결과는 면역관용 수지상세포를 이용한 난치성 면역질환의 세포치료법 개발에 활용될 수 있을 것임
○ 항원을 탑재한 면역관용 수지상세포를 이용하여 항원 특이 면역관용을 유도할 수 있는 기술 확보를 위한 후속 연구로 이어나감

(출처 : 연구결과 요약문 4p)

Abstract ▼

□ Purpose&contents
The therapeutic potential of tolerogenic dendritic cells (tDCs) are increasingly being recognized in recent studies. In this study, we will firstly develop the most efficient methods to generate Tol-DCs using minocycline in combination with other Tol-DC-inducing agents. The tol

□ Purpose&contents
The therapeutic potential of tolerogenic dendritic cells (tDCs) are increasingly being recognized in recent studies. In this study, we will firstly develop the most efficient methods to generate Tol-DCs using minocycline in combination with other Tol-DC-inducing agents. The tolerogenic activity of the tDCs and the underlying mechanisms will then be elucidated. The final goal of this study is to establish methods to induce antigen-specific immune tolerance using antigen-pulsed Tol-DCs.

□ Result
○ We demonstrated that the addition of minocycline together with GM-CSF and IL-4 to mouse bone marrow cell culture increased the generation of DCs to about 60%, and the DCs exerted tolerogenic properties.
○ The phenotypic and functional characteristics of the minocycline-conditioned DCs(mDC) were identified. In addition, it was shown that the pretreatment of micewith MOG35-55 peptide-pulsed mDCs ameliorates clinical signs of experimental autoimmune encephalitis (EAE).
○ Various tDCs were also generated using minocycline in combinations with dexamethasone, rapamycin, vitamin D3, and interleukin (IL)-10, which are allknown inducers of tDC generation, and the phenotypic and functional propertiessuch as allostimulatory capacity were examined in vitro.
○ Based on the above results, it was concluded that tDCs with potent tolerogenic properties could be efficiently generated by the combined use of minocycline (5 μM) and dexamethasone(1 μM), along with GM-CSF and IL-4.
○ Minocycline/dexamethasone-conditioned tDCs (mdDCs) are severely deficient in Ag-specific T-cell stimulation and inflammatory cytokine production, while producing high amounts of IL-10. In mdDC, the proportion D-L1^hiCD86^low cells was significantly higher.

○ mdDCss potently induce Foxp3+ Tregs from CD4+CD25- T cells.
○ One of the mechanisms for the growth-promoting activity of minocycline is the increased expression of inhibitor of DNA binding 3 (Id3) gene.

□ Expected Contribution
○ The new finding demonstrating that increased number of tDCs could be generated using minocycline and dexamethasone was registered as a patent in Korea, and this intellectual property could be transferred to a company.
○ The technology confirming that increased number of tDCs could be generated using minocycline and dexamethasone together with GM-CSF and IL-4 would help in thedevelopment of ex vivo tDC-based immunotherapies against intractable immune diseases.
○ Further studies such as the optimization of the cell number and the timing of injection for therapeutic development would lead to develop antigen-specific immune tolerance using antigen peptide-pulsed tDCs.

(출처 : SUMMARY 5p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 목차 ... 2
• 연구계획 요약문 ... 3
• 연구결과 요약문 ... 4
• 한글요약문 ... 4
• SUMMARY ... 5
• 연구내용 및 결과 ... 6
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 6
• 2. 국내외 기술개발 현황 ... 9
• 3. 연구수행 내용 및 결과 ... 12
• 4. 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 31
• 5. 연구결과의 활용계획 ... 33
• 6. 연구과정에서 수집한 해외 과학기술정보 ... 33
• 7. 주관연구책임자 대표적 연구실적 ... 33
• 8. 참고문헌 ... 34
• 9. 연구성과 ... 37
• 10. 국가과학기술지식정보서비스에 등록한 연구시설‧장비 현황 ... 39
• 11. 연구개발과제 수행에 따른 연구실 등의 안전조치 이행실적 ... 40
• 12. 기타사항 ... 40
• 별첨1. 대 표 연 구 실 적 ... 41
• 별첨2. 세부 목표 관련 증빙 ... 54
• 끝페이지 ... 70