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4. 당해년도 연구결과 요약
O 제1세부과제명: 신규* 동물줄기세포 확립, 확보 및 특성 분석
- 성체줄기세포 227주 유지, 신규 줄기세포 18주* 확립 및 특성 분석 진행(~’19.11.20.)
돼지(50주) : 지방조직/3주, 골수/14주, 탯줄조직/1주, 제대혈/1주, 복부조직(ET)/9주, 복부조직/4주, 귀조직(ET)/9주, 귀조직/7주, 폐조직/2주
미니돼지(13주) : 지방조직/1주, 골수/3주, 복부조직/1주, 귀조직/3주, 귀조직(ET)/2주, 폐조직/3주
말(83주) : 지방조직/57주

4. 당해년도 연구결과 요약
O 제1세부과제명: 신규* 동물줄기세포 확립, 확보 및 특성 분석
- 성체줄기세포 227주 유지, 신규 줄기세포 18주* 확립 및 특성 분석 진행(~’19.11.20.)
돼지(50주) : 지방조직/3주, 골수/14주, 탯줄조직/1주, 제대혈/1주, 복부조직(ET)/9주, 복부조직/4주, 귀조직(ET)/9주, 귀조직/7주, 폐조직/2주
미니돼지(13주) : 지방조직/1주, 골수/3주, 복부조직/1주, 귀조직/3주, 귀조직(ET)/2주, 폐조직/3주
말(83주) : 지방조직/57주, 골수/9주, 탯줄조직/4주, 복부조직/2주, 귀조직(ET)/1주, 연골조직/10주
개(27주) : 지방조직/22주, 골수/1주, 탯줄조직/4주
고양이(14주)* : 지방조직/11주(3주)
쥐 (17주) : 지방조직/6주, 골수/11주
닭 (9주) : 지방조직/6주, 골수/2주, 폐조직/1주
소(9주)* : 지방조직/3주, 골수/1주, 탯줄조직/2주, 혀조직/2주(1 주)
멧돼지(3주) : 골수/3주
사슴 (11주)* : 지방조직/1주, 골수/2주(1주), 귀조직/1주(1주), 안검조직/1주(1주), 안막조 직/1주, 혀조직/1주(1주)
염소(3주)* : 지방조직/1주, 골수/1주, 귀조직/1주
칡소(6주)* : 지방조직/1주, 골수/1주, 귀조직/1주, 안검조직/1주, 안막조직/1주, 혀조직/1주

- 배아줄기세포 4주 유지
ᄋ 돼지 유래 배아줄기세포 4주 유지, 배양 및 특성 분석 완료
- 유도만능줄기세포 3주 유지
ᄋ 돼지 유래 유도만능줄기세포 3주 유지, 배양 및 특성 분석 완료
ᄋ 계대방법별 줄기세포 성능 조사(기계적 계대 및 효소적 계대 배양법 간 줄기세포 성능 비교)
* 기계적 계대법에서 줄기세포 전사인자 및 알칼라인 포스파타아제 활성 증가 확인
- 줄기세포 성능 개선을 위한 “고품질 줄기세포” 확립 기법 확립
ᄋ 저산소 조건 배양환경에서 줄기세포 증식 및 특정 세포로의 분화 우수성 확인
ᄋ 3차원 세포 배양법을 이용한 줄기세포 증식 및 특정 세포로의 분화능 분석
* Spheroid형 및 hydrogel을 이용한 3차원 세포 배양환경에서 줄기세포 우수성 확인
※ 고품질 줄기세포 연구성과 : SCI급 국제학술는문 발표 (‘18.09. Vet Res Commun)
- 줄기세포 성능 보유 장기 유사체 “오가노이드” 제작 및 특성 분석
ᄋ 쥐 소장 유래 장 유사 오가노이드 제작
* 쥐 장 유사 오가노이드 제작. 장 특이마커 확인 및 지속 계대(8계대 유지 확인)
ᄋ 미니돼지 소장 분리 및 장 유사 오가노이드 제작(특성 분석 진행 중)
※ 오가노이드 : 줄기세포를 3차원으로 배양하여 만든 장기 유사체로 장기의 구조나 기능 재현
- 장기 저장 줄기세포 성능 평가
ᄋ 장기 저장(long-term cryopreservation)에 따른 줄기세포 성능 평가 진행(매 년)
* 6년차 장기 저장 줄기세포 성능 평가(증식능. 분화능 등): 이상없음( ’19.11.20.)
※ 4년차 장기 저장 줄기세포 안전성 연구성과 : 비SCI논문 발표 (‘18.12.)
※ 6년이상 장기 저장 동물줄기세포 성능 평가에 관한 결과 : SCI논문 작성. 투고 준비 중 (’19.12.)

O 제2세부과제명: 동물줄기세포은행 표준조작절차(SOP) 제정
- 동물줄기세포 확립, 배양, 유지 등 업무 전반에 대한 표준조작절차(SOP) 제정 및 개정
ᄋ 축종별, 조직별 줄기세포 확립을 위한 SOP 제정 및 개정(Ver 6.2, ’19.11.20)
ᄋ 신규 줄기세포 확립을 위한 SOP 제정(칡소 등 신규 축종 유래 줄기세포 확립 조건 등)
ᄋ 축종별, 조직별 줄기세포 특성 분석에 필요한 특이마커 규명

O 제3세부과제명: 동물줄기세포 안전성 평가
- 유해 미생물 오염 여부 검정을 통한 세포 안전성 평가
ᄋ Bacteria 검사(혈액배지 및 영양배지 이용 줄기세포 배양액 오염여부 검사법 확립)
ᄋ Endotoxin 검사(줄기세포 배양액에서 오염여부 검사법 확립)
ᄋ Mycoplasma 검사(특이세포 염색법, 중합효소 연쇄반응법 확립)
* 외래 미생물 등 오염검사를 반드시 거친 무감염 세포만을 분양 진행
- 우수 의약품 제조 및 품질관리 기준(준GMP)에 부합하는 청정시설 유지 및 지속 점검
ᄋ 청정시설(공기 청정기준 class 3에 해당)에서 동물줄기세포 확립, 배양, 유지

O 제4세부과제명: 동물줄기세포은행(한국수의유전자원은행, KVCC) 운영
- 동물줄기세포주 등록을 위한 운영체계 확립 및 운영
- 동물줄기세포주 분양·기탁 등 등록관련 DB 구축 및 개선
ᄋ 한국줄기세포은행 온라인 시스템 (KVCC) 활성화(온라인 분양 진행)
* 대학, 산업체 등 외부 연구자 분양 및 검역본부 내부 연구자 분양 진행

(출처 : 요약 1p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• I. 연구배경 및 목표 ... 4
• 1. 연구배경 ... 4
• 2. 연구의 최종목표 ... 7
• 3. 연차별 연구개발 목표와 내용 ... 7
• II. 연구방법 및 수행전략 ... 8
• 1. 재 료 ... 8
• 2. 연구전략 및 방법 ... 8
• III. 연구결과 ... 9
• 1. 제1세부과제명: 다양한 동물줄기세포 자원 확보 및 특성 분석 ... 9
• 2. 제2세부과제명: 동물줄기세포 확립 표준조작절차(SOP) 제정 ... 55
• 3. 제3세부과제명: 동물줄기세포 안전성 평가 ... 57
• 4. 제4세부과제명: 동물줄기세포은행(한국수의유전자원은행) 운영 ... 60
• IV. 연구결과요약 ... 65
• 1. 다양한 동물줄기세포주 확립 및 특성 분석 ... 65
• 2. 동물줄기세포 확립을 위한 표준조작절차(SOP) 제정 ... 65
• 3. 동물줄기세포 안전성 평가 진행 ... 65
• 4. 동물줄기세포은행 운영 (한국수의유전자원은행, KVCC) ... 65
• V. 금후 추진계획 ... 65
• VI. 참고자료 ... 66
• 끝페이지 ... 66