초록 ▼

5. 최종 연구결과 요약

○ 간편한 조작과 신속한 검사가 가능한 AI 정밀검사 키트의 연구 (카트리지형 AI 정밀진단키트 단계별 조건 최적화)
- 핵산 추출: 기존 상용 제품과 비교 시험한 결과, 개발한 추출시약의 효율이 동등 이상이었음
닭 분변 바이러스 스파이킹, 오리 간, 닭 간, swab 시료 등 평가
- 유전자 검출용 primer 및 probe 설계: 최근 유라시안 H5 및 H7 분리주에 대한 coverage rate를 97 100%로 향상시키고 double target 방식(2개 primer s

5. 최종 연구결과 요약

○ 간편한 조작과 신속한 검사가 가능한 AI 정밀검사 키트의 연구 (카트리지형 AI 정밀진단키트 단계별 조건 최적화)
- 핵산 추출: 기존 상용 제품과 비교 시험한 결과, 개발한 추출시약의 효율이 동등 이상이었음
닭 분변 바이러스 스파이킹, 오리 간, 닭 간, swab 시료 등 평가
- 유전자 검출용 primer 및 probe 설계: 최근 유라시안 H5 및 H7 분리주에 대한 coverage rate를 97 100%로 향상시키고 double target 방식(2개 primer set 사용)으로 설계함.
- PCR 시약의 온도 안정성: 카트리지 상온 보관 시 PCR 시약 안정성 확보를 위해 동결건조 조성 및 조건 최적화 후 평가한 결과, 실시간 유전자 검출의 효율 저하는 관찰되지 않았음
- 유전자 검출 비교 시험: 표준주에 대한 검출한계 비교시 민감도 향상을 확인하였으며, 최근 국내 분리주와 동남아 지역 분리주 등 표준 바이러스 25종을 대상으로 M, H5, H7 유전자 검출 시약을 시험하여 기존의 시약과 비교한 결과 동등 이상의 효율을 확인하였음

(최종 원스탑 키트에 대한 평가)
- 단계별 최적화 조건의 원스탑 키트(핵산 추출 및 PCR 일체형 카트리지 및 현장진단검사 (POCT) 장비)를 구동하여 RNA 추출부터 PCR까지 전자동으로 이뤄짐을 확인함.
* 그러나, 최종 유전자 검출 결과가 확인된 반응은 33.3%로 확인되었으며 이는 단계별로 수율이 저하(RNA 추출 83.3%, RT-PCR 46.6%)되어 나타난 결과임, 그 원인은 일부 반응에서 자동 제어 시스템 문제 발생에 의한 것으로 기기의 hardware 및 software 개선이 필요한 상황임.
→ 이는 SK텔레콤에서 수행하는 카트리지 제작 및 기기 자체의 하드웨어적 개선이 필요한 문제로, SK텔레콤은 본 과제 종료시점인 2019년 내에는 하드웨어 업그레이드 기기 제공이 불가함을 밝힘

o AI 정밀검사 키트의 검사 결과 실시간 전송 시스템 개발 (무선 자동 전송 시스템)
- AI 정밀진단키트를 위한 data 관리 도구로 EzerCloud(가칭)를 개발하였으며, 정밀진단 기기(단말기)로부터 전송받은 data를 cloud server에 저장 및 분석, 지정된 사용자에게 결과를 전송하여 정보 제공이 가능함
- 검사 정보 입력을 위해 시료 ID와 카트리지 ID 바코드(최대 15자) 스캔 방식을 개발 및 적용하였음
- 시료 ID 정보에 대한 결과 조회, 결과 판정, 관련 정보 조회 등에 대한 화면 구성을 완료하고 무선 자동전송시스템 결과 전송을 확인하였음

(출처 : 요약 1p)

Abstract ▼

Fast and accurate diagnosis is needed to eradicate and manage economically important and infectious diseases. On-site testing provides additional advantages of providing a rapid result without sending the sample to a diagnostic laboratory that maybe some distance away. The portable real-time PCR met

Fast and accurate diagnosis is needed to eradicate and manage economically important and infectious diseases. On-site testing provides additional advantages of providing a rapid result without sending the sample to a diagnostic laboratory that maybe some distance away. The portable real-time PCR method developed here can serve as an alternative to laboratory-based approaches and a useful on-site tool for Avian Influenza diagnosis. In this study, the trial of development a device achieved using a rapid and simple protocol comprising of magnetic bead-based nucleic acid extraction and portable real-time PCR (fluorogenic probe-based assay). For combining the two-steps, assmbled assay cartridge were applied for detection of AI genes. The specific primer & probe kit, for M/H5/H7 gene detection, based on genetic information of recently isolated HPAI viruses in Eurasia region were developed and evaluated with reference virus panels. The comparison between the new set and the old set was showed equivalent results in LOD(Limit of Detection). Besides, it has a good advantage which the real-time RT-PCR lyophilized reagents shows the stable efficacy of gene detection under the room temperature and could be applied in the fields. However, the developed device with cartridge did not give consistent results and needed more supplementation. Through the futher study, the improvement of performance about device ability should be accomplished and would give more accurate on-site diagnosis.

(출처 : Abstract 16p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• I. 연구배경 및 목표 ... 3
• 1. 연구배경 ... 3
• 2. 연구최종목표 ... 4
• 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 4
• II. 연구방법 및 수행전략 ... 5
• 1. 재 료 ... 5
• 2. 연구전략 및 방법 ... 5
• III. 연구결과 ... 6
• IV. 연구결과요약 ... 14
• V. 참고자료 ... 15
• VI. 영문초록 ... 16
• 끝페이지 ... 16