초록 ▼

4. 당해년도 연구결과 요약

○ 국내 발생 CWD 시료 선발 및 cervidized Tg 마우스 bioassay
- CWD의 생물학적 및 생화학적 특성을 기초로 품종별로 선발하고자 하였으며 검역본부 보유 형질전환 마우스를 이용하여 접종한 결과 lesion profile의 차이를 확인하지 못하였으나, ELISA나 WB 검사법 및 접종 마우스의 생존기간과의 차이를 감안하여 엘크 3종, 꽃사슴 3종, 교잡종 1종 및 레드디어 2종씩을 대표시료로 선발하였다.
- CWD 특성조사를 위해 2018년 5월 2종의 프리온

4. 당해년도 연구결과 요약

○ 국내 발생 CWD 시료 선발 및 cervidized Tg 마우스 bioassay
- CWD의 생물학적 및 생화학적 특성을 기초로 품종별로 선발하고자 하였으며 검역본부 보유 형질전환 마우스를 이용하여 접종한 결과 lesion profile의 차이를 확인하지 못하였으나, ELISA나 WB 검사법 및 접종 마우스의 생존기간과의 차이를 감안하여 엘크 3종, 꽃사슴 3종, 교잡종 1종 및 레드디어 2종씩을 대표시료로 선발하였다.
- CWD 특성조사를 위해 2018년 5월 2종의 프리온 과발현 형질전환 마우스 및 1종의 프리온 넉아웃마우스 5쌍씩 총 30마리를 미국에서 도입하여 한국생명공학 연구원에서 마우스 청정화를 의뢰하여 2018년 8월 완료하였으며 현재 접종을 완료하여 70~150일 지났으며 현재까지는 아무런 증상이 없는 것을 확인 되었다.
- 유전자 적중 마우스에 대해서는 품종별로 20마리가 2019년 5월에 도입되어 현재 생명공학연구원에서 청정화 진행 중이다
- 미국 형질전환 마우스 및 유전자 적중 마우스 뇌조직을 이용한 PMCAb 기법을 확립하고자 뇌 유제액의 농도 PK농도를 설정하고자 하였다. 10% 뇌유제액을 기질로 PMCAb를 수행하고, 2 mg/ml의 PK를 처리하였을 때 비특이적으로 증폭된 prion이 검출되지 않음을 확인 하였다.
- 확립된 PMCAb법을 적용하여 선발된 접종원으로 PMCAb를 적용한 바 Tg Q226이 가장 높은 희석배수까지 검출이 됨을 확인 하였다. 실제 in vivo 접종 시에도 동일하게 짧은 생존기간이 관찰되는지는 확인이 필요하다. 프리온이 과발현된 마우스에서 보다 낮은 농도까지 검출되었다.
○ Tg, Gt 마우스 제공 및 한국, 북미, 노르웨이 발생 CWD strain 비교 분석
- 한국 발생 CWD 특성조사를 위하여 사용할 형질전환마우스 2종 (TgE226, TgQ226)와 유전자적중 마우스(Gt deer, Gt elk), 프리온 넉아웃마우스의 브리딩 페어를 한국에 제공하였다.
- 예상치 못했던 마우스 청정화 단계가 추가됨에 따라서, in vitro 증폭 기법을 먼저 확립하고자 PMCAb에 사용할 마우스 뇌를 제공하였다.
- 노르웨이 무스와 순록 유래 CWD 프리온 2개 시료씩 총 4개 시료를 2종의 형질 전환 마우스 (Tg Q226 및 Tg E226) 및 유전자적중 마우스(Gt deer 및 Gt elk)에 10마리씩 총 80마리를 접종하였다. 접종결과 노르웨이 무스 및 순록은 기존의 미국 사슴류와는 다른 생존율이 관찰되었으며, 웨스턴 블로팅 이동밴드 패턴도 다르게 확인 되었다. conformational stability도 다른 것으로 확인되어 노르웨이 무스의 CWD는 북미 무스의 CWD와 다른 것으로 추정 되었다.

(출처 : 요약 1p)

목차 Contents

• 표지 ... 1I. 연구배경 및 목표 ... 3 1. 연구배경 ... 3 2. 연구최종목표 ... 4 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 4II. 연구방법 및 수행전략 ... 5 1. 재 료 ... 5 2. 연구전략 및 방법 ... 5III. 연구결과 ... 6 1. 국내 발생 CWD 시료선발 및 bioassay ... 6 2. 북미 및 노르웨이 발생 CWD bioassay ... 14IV. 연구결과요약 ... 19V. 금후 추진계획 ... 20VI. 참고자료 ... 21끝페이지 ... 21