초록 ▼

5. 최종 연구결과 요약
〇 제1세부과제명: 개과 주요 바이러스성 질병 진단킷트
- 확립된 (RT)-PCR의 검출효율을 야외시료 적용을 통해 실험한 결과, 기존 진단법에 비해 민감도는 증가되었으며，특이도는 동일한 수준으로 확인됨
- 개 주요 바이러스성질병 4종(CPV, CDV, CHV, CCV) 대한 표준바이러스 배양 및 역가측정 완료
* Canine parvovirus(CPV), Canine distemper virus(CDV), Canine herpesvirus(CHV), Canine coronavirus

5. 최종 연구결과 요약
〇 제1세부과제명: 개과 주요 바이러스성 질병 진단킷트
- 확립된 (RT)-PCR의 검출효율을 야외시료 적용을 통해 실험한 결과, 기존 진단법에 비해 민감도는 증가되었으며，특이도는 동일한 수준으로 확인됨
- 개 주요 바이러스성질병 4종(CPV, CDV, CHV, CCV) 대한 표준바이러스 배양 및 역가측정 완료
* Canine parvovirus(CPV), Canine distemper virus(CDV), Canine herpesvirus(CHV), Canine coronavirus (CCV)
- 개 2두에 CCV, CDV, CPV, CHV의 시판백신 및 자체생산 불활화 항원을 반복 접종 후 항혈청을 생산 완료하였고，개 표준 바이러스와 자체제작 항혈청을 이용한 개 바이러스성 질병에 대한 혈청중화시험법 확립.
- 상용 개 바이러스성질병 항체 검출용 ELISA 킷트 반응성 비교
: 시판중인 외국산 2종(D사，DD사 킷트 구입)의 ELISA 킷트를 이용한 자체 제작 항혈청 (CCV， CDV, CPV, CHV)에 대한 반응성은 모두 양성을 보였으나，D사의 ELISA 킷트가 DD사의 킷트보다 자체 제작 항혈청에 대한 반응성이 우수함.
： 확립된 혈청중화시험 비교한 결과, 중화항체가 64-128이상이 ELISA 양성으로 나타나 ELISA의 민감도가 매우 낮으며 두 진단법간의 일치도가 매우 낮게 나타남.

〇 제2세부과제명: 고양이과 주요 바이러스성 질병 진단킷트 표준화
- 확립된 (RT)-PCR의 검출효율을 야외시료 적용을 통해 실험한 결과，기존 진단법에 비해 민감도는 증가되었으며，특이도는 동일한 수준으로 확인됨
- 고양이 주요 바이러스성질병 4종(FPV, FHV, FCV, FCoV)에 대한 표준바이러스 배양 및 역가측정 완료하였음.
* Feline parvovirus(FPV), Feline herpesvirus(FHV), Feline coronavirus(FCoV), Feline calicivirus(FCV)
- 고양이 2두에 FPV，FHV, FCoV，FCV의 시판백신 및 자체생산 불활화항원을 반복 접종 후 4종에 대한 고역가 항혈청 생산 완료하였고，고양이 표준바이러스(FHV，FCoV, FCV)와 자체제작 항혈청을 이용한 고양이 바이러스성질병 혈청중화시험법 확립.
- 상용 고양이 바이러스성질병 항체 검출용 ELISA 킷트 반응성 비교
： 시판중인 외국산 2종(D사，X사의 킷트 구입)의 ELISA 킷트를 이용한 자체 제작 항혈청(FPV, FCV, FHV)에 대한 반응성을 확인한 결과，X사의 킷트가 D사의 킷트보다 반응성 및 양성판정 기준이 명확함.
： 확립된 혈청중화시험 비교한 결과, 중화항체가 64이상이 ELISA 양성으로 나타나 ELISA 민감도가 낮고, 두 진단법간의 일치도가 매우 낮음을 확인함.

〇 제3세부과제명: 국내질병 모니터링 및 주요바이러스에 대한 유전자 분석
- 현재까지 확립된 유전자 진단 킷트를 이용하여 과거 4년간 검역본부로 의뢰된 병성감정 시료를 검사한 결과，개에서는 CPV가，고양이에서는 FPV가 가장 높은 검출율을 보였음
- FCV양성시료 중 총 3주(12Q87-1 및 12Q87-5, 16D213)에 대한 전체 유전자 분석 결과, 12Q87-1 및 12Q87-5는 각각 7,713 bp 7,716 bp 유전자를 가지고 있었으며，계통유연관계 분석에서는 12Q87-1 주 및 12Q87-5는 중국 분리주 1주(Guangdong, GU214989)와 함께 하나의 클러스터를 형성하였고, 16D213과는 유전적으로 거리가 있는 것으로 보임.
： 외국주와의 전체 유전자 상동성을 비교한 결과 76.4~78.2%로 나타남.
- CPV의 VP2 유전자타입은 CPV2a, 2b가 높은 검출율을 보였고，계통유연관계분석에서는 한국주 cluster를 형성하였으며，백신주와는 유전적 거리가 있는 것으로 나타남.

(출처 : 5. 최종 연구결과 요약 1p)

Abstract ▼

Standard diagnostic methods for Canine vial disease

This study was aimed to develop the standard diagnostic methods for canine vial diseases. Multiplex (RT)-PCR was recruited to detect 6 respiratory vial diseases (CIV, CHV, CRCoV, CADV 1/2, CPIV) and 4 gastrointestinal vial diseases (CPV, CCV

Standard diagnostic methods for Canine vial disease

This study was aimed to develop the standard diagnostic methods for canine vial diseases. Multiplex (RT)-PCR was recruited to detect 6 respiratory vial diseases (CIV, CHV, CRCoV, CADV 1/2, CPIV) and 4 gastrointestinal vial diseases (CPV, CCV, CDV, CRV), and highly improved the sensitivity and specificity (100%, respectively) compared to a conventional method. Vial neutralization test was newly determined with the high titer of antisera raised against CPV, CDV, CHV, CCV and ATCC reference strains (CPV 10^5.5TCID₅₀/ml, CDV10^4.5TCID₅₀/ml, CHV 10^5.5TCID₅₀/ml，CCV 10^4.5TCID₅₀/ml). Two different commercial ELISA (DR and DD) kits were tested to compare the efficiency and DD kit was shown better reactivity.

(출처 : Abstract 39p)

Standard diagnostic methods for Feline vial disease

To development the standard diagnostic methods for feline vial disease, two of multiplex (RT)-PCR were designed to detect 6 vial diseases (FPV, FCV，FCoV, FHV，FIV, FeLV) and shown similar efficiency in comparison to a conventional method. Vial neutralization test was newly established with the high titer of antisera raised against FPV, FCoV, FHV, FCV and ATCC reference strains (FPV 10^5.0TCID₅₀/ml，FCoV 10^6.0TCID₅₀/ml, FHV 10^4.5TCID₅₀/ml，FCV 10^5.54TCID₅₀/ml). Two different commercial EUSA (DD and X) kits were tested to compare the efficiency and X kit was shown better reactivity.

(출처 : Abstract 39p)

Monitering of vial diseases in domestic companion animals (canine and feline

Standard diagnostic methods determined in this study were used to investigate the prevalence of domestic canine and feline vial diseases. From 2013 to 2016，samples were collected from a total of 479 canine (329 organ tissues and 150 serum) and 277 feline (102 organ tissues and 175 serum). (RT)-PCR mostly detected CPV and FPV，respectively and complex infections were broadly shown in feline. The antibody titers of wild serum in canine and feline were determined with vial neutralization assay (VNT) and commercial ELISA kits.
Canine serum showed low antibody titer against CPV in both VNT and ELISA kit. The positive sera to CPV, CHV and CDV in ELISA kit were 83.6%，1.3%，and 25.3%，respectively.
In feline, the antibody to FCV mostly showed high titer(> 256, 83.1%)，while those of FCoV(47.1%) and FHV(50.6%) showed low titer (<2)，respectively. ELISA kit determined that FCV antibody was detected in 6.3% of tested feline sera, FCoV in 14.7%，FHV in 0.0%, and FPV in 35.7%. Therefore, the titers of VNT to FCV was barely associated with results of ELISA kit, while the titers of FCoV and FHV were correlated with those of ELISA kit.

Three FCV isolates (12Q87-1, 12Q87-5, and 16D213) were analyzed to sequence identity and phylogenetic characteristics. 12Q87-1 (7,713bp), 12Q87-5 (7,176bp) and 16D213 showed 76.4-92.2% of the nucleotide identity on ORF1-3 compared to published strains of other countries. 12Q87-1 and 12Q87-5 were clustered with a china isolate，while 16D213 was grouped with UTCVM-H2 (USA, 2006) and DD/2006/GE (2006). They showed distinct genetic characteristics from vaccine strains F9 and 2024.

A total of 28 CPV-positive samples from 2012 to 2016，were analyzed to determine the VP2 gene type and the phylogentic property. They were assigned to CPV2a(15), CPV2b(12) and CPV2c(1) and of them, the 17 whole VP2 gene (1755bp) were grouped with 2007 Korea strains (n=7) and the 2008 China strain (n=1). Distinct amino acid substitutions were frequently observed compared to other countries CPV, including Thr440Ala(14/17), Phe267Ala(13/17)，and Tyr324Ile(14/17).

(출처 : Abstract 40p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• I. 연구배경 및 목표 ... 3
• 1. 연구배경 ... 3
• 2. 연구최종목표 ... 4
• 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 4
• II. 연구방법 및 수행전략 ... 6
• 1. 재 료 ... 6
• 2. 연구전략 및 방법 ... 6
• III. 연구결과 ... 8
• IV. 연구결과요약 ... 34
• V. 고 찰 ... 36
• VI. 연구결과 활용실적 및 계획 ... 37
• VII. 연구사업 추진상 문제점 및 건의사항 ... 38
• VIII. 주요연구과제 변경사항 ... 38
• IX. 참고문헌 ... 38
• X. 영문초록 ... 39
• 끝페이지 ... 40