보고서 정보
주관연구기관 |
농림축산검역본부 Animal and Plant Quarantine Agency |
연구책임자 |
박성원
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참여연구자 |
김수희
,
김효비
,
김광남
,
강환구
,
송재영
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보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2015-12 |
과제시작연도 |
2015 |
주관부처 |
농림축산식품부 Ministry of Agriculture, Food and Rural Affairs(MAFRA) |
과제관리전문기관 |
농림축산검역본부 Animal and Plant Quarantine Agency |
등록번호 |
TRKO202000030991 |
과제고유번호 |
1545009790 |
사업명 |
농림축산검역검사기술개발 |
DB 구축일자 |
2020-11-28
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키워드 |
곰팡이 독소.생체 시료.장기 조직.LC/MS.
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초록
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5. 최종 연구결과 요약
◦ 제 1 세부과제: 사료 중의 곰팡이 독소 스크리닝법 확립
- 사료 중의 곰팡이 독소 스크리닝법 확립(1년차/2014)
1) 가축(소, 돼지, 닭)의 사료 중 곰팡이 독소에 대한 HPTLC 동시 스크리닝법 확립
∘ Toluene-ethyl acetate-formic acid 전개용액을 이용하여 AFB1, OTA, DON, ZEN를 366 nm 파장에서 동시에 분석하여 LOD 값이 각각 0.96, 8.45, 8.30, 6.28 ppm으로 확인됨
∘ FMB1의 경우 메탄올을
5. 최종 연구결과 요약
◦ 제 1 세부과제: 사료 중의 곰팡이 독소 스크리닝법 확립
- 사료 중의 곰팡이 독소 스크리닝법 확립(1년차/2014)
1) 가축(소, 돼지, 닭)의 사료 중 곰팡이 독소에 대한 HPTLC 동시 스크리닝법 확립
∘ Toluene-ethyl acetate-formic acid 전개용액을 이용하여 AFB1, OTA, DON, ZEN를 366 nm 파장에서 동시에 분석하여 LOD 값이 각각 0.96, 8.45, 8.30, 6.28 ppm으로 확인됨
∘ FMB1의 경우 메탄올을 이용해 전개 후 fluorescamine을 처리하여 형광분석
2) 가축의 사료 중 DON에 대한 확인 검사법 확립
∘ DON 분석을 위해 CDI-linker 방법을 이용하여 BSA와 결합된 항원을 제조 하였으며, 합성된 conjugate의 binding affinity를 ELISA를 통해 확인
∘ 상관계수가 0.992, LOD, LOQ가 각각 2.23 ng/g, 11.44 ng/g으로써, 사료 내 허용기준인 5 ㎍/g 보다 낮아 DON 스크리닝 방법으로 적합
∘ XTerra MS C18 컬럼, 5% ACN 이동상 및 immunoaffinity column을 이용한 HPLC 및 LC/MS/MS 분석법 확립
∘ Immunoaffinity column을 사용한다는 경제적 부담과 실험방법의 효율성을 고려하였을때 DON의 스크리닝 방법으로는 ELISA가 더 적절함
3) 가축의 사료 중 OTA에 대한 확인 검사법 확립
∘ 메탄올을 이용하여 사료에 포함된 독소를 추출하고 immunoaffinity column을 통해 정제한 뒤 DON분석과 동일한 컬럼을 이용하여 HPLC 분리 후 형광검출기로 분석
4) 가축의 사료 중 FMB1에 대한 확인 검사법 확립
∘ FMB1은 GEMINI 5㎛ C18 컬럼 및 HPLC 형광검출기를 이용하여 사료 내 허용기준 이하로 확인 가능한 분석법 확립
- 위 내용물, 혈액, 뇨 등에서 곰팡이 독소 정밀검사법 개발(2년차/2015)
1) 닭과 소 위내용물에서 곰팡이 독소 5종 정밀검사법 개발
∘ 병성감정 가검물 분석을 위해 경제적이고 효율적인 QUECHERS 방법을 사용
∘ LC-MS/MS를 이용한 동시 분석법 확립
∘ 닭 위내용물에서의 AFB1, DON, FMB1, OTA, ZEN의 회수율은 각각 75.1%, 91.1%, 77.3%, 84.5%, 82.8%임
∘ 소 위내용물에서 AFB1, DON, FMB1, OTA, ZEN의 회수율은 각각 73.2%, 88.7%, 80.1%, 84.7%, 90.0%임
∘ 개발된 분석법은 동물 사료의 국제 기준에 부합하는 수준이며 2016년부터 병성감정 가검물(위내용물) 검사대상물질에 추가 할 예정임
2) 소 혈액에서 곰팡이 독소 5종 정밀검사법 개발
∘ Immunoaffinity column을 사용하여 LC/MS/MS 동시분석법 확립
∘ 분석 결과 곰팡이 독소 AFB1, DON, FMB1, ZEN, OTA의 LOD는 각각 36.15, 29.31, 65.58, 27.74 , 18.45 ng/g 이며 회수율은 93.0, 81.6, 114.1, 85.6, 13.4%, CV(%)는 6.5∼18.3 수준으로 확인됨
3) 소 뇨에서 곰팡이 독소 5종 정밀검사법 개발
∘ Immunoaffinity column을 사용하여 LC/MS/MS 동시분석법 확립
∘ 분석 결과 곰팡이 독소 AFB1, DON, FMB1, ZEN, OTA의 LOD는 각각 18.38, 34.94, 11.88, 18.84, 4.26 ng/g이며 회수율은 각각 72.0, 82.7, 91.6, 94.0, 94.7%, CV(%)는 0.3∼9.1 수준으로 확인됨
∘ AFB1의 경우 동시 분석 시 회수율이 저조하여 단일 전처리법을 추가 확립하였으며 회수율 100.3% CV(%) 8.9으로 확인됨
◦ 제 2 세부과제: 간장, 신장 조직 중의 곰팡이 독소 정밀검사 방법 개발
- 간장, 신장 조직 중의 곰팡이 독소 정밀검사 방법 개발(1년차/2014)
1) triple quadrupole LC/MS/MS 및 Waters XTerra C18 5㎛, 2.1×150㎜ 컬럼을 이용하여 동시 분석 조건을 확립
2) 이동상 용매는 A용매와 B용매를 각각 10 mM Ammonium acetate가 포함된 초순수와 2% Acetic acid가 포함된 메탄올을 사용, 유속은 0.4 ㎖/min, 컬럼온도는 40℃으로 분석
3) 간장, 신장 조직 시료에 ACN(5% formic acid)를 취하여 곰팡이 독소를 추출 후 분산 고체상 추출(d-SPE)법에 의한 QUECHERS 방법을 적용하여 전처리 방법 확립
4) 경제적이고 효율적인 전처리 방법으로 차후 병성감정 가검물 분석 시 활용 가능
- 개발된 곰팡이 독소 정밀검사 방법의 검증(2년차/2015)
1) 닭 간조직에서의 곰팡이 독소 4종 AFB1, AFM1, DON, OTA, ZEN, FMB1의 LOD는 각각 10.02, 7.60, 105.50, 10.45, 12.88, 145.79 ng/g이며 회수율은 88.01, 75.82, 80.94, 82.36, 87.51, 64.21%, CV(%)는 4.54∼13.78 수준으로 확인됨
2) 닭 신장조직에서의 곰팡이 독소 4종 AFB1, AFM1, DON, OTA, ZEN, FMB1의 LOD는 각각 24.98, 6.07, 41.00, 5.90, 4.78, 197.20 ng/g이며 회수율은 83.75, 55.15, 95.61, 83.18, 98.10, 86.52%, CV(%)는 0.73∼7.02 수준으로 확인됨
3) 닭 간조직에서의 FMB1과 신장조직에서 AFM1의 대하여는 회수율 향상을 위해 추가 실험 중임
(출처 : 요약 1p)
목차 Contents
- 표지 ... 1
- Ⅰ. 연구배경 및 목표 ... 4
- 1. 연구배경 ... 4
- 2. 연구최종목표 ... 5
- 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 6
- Ⅱ. 연구방법 및 수행전략 ... 7
- 1. 재 료 ... 7
- 2. 연구전략 및 방법 ... 7
- Ⅲ. 연구결과 ... 7
- 1. 제1세부과제 : 출하 전 가축의 곰팡이 독소 오염 정밀검사법 개발 ... 7
- 2. 제2세부과제 : 간장, 신장 조직 중의 곰팡이 독소 정밀검사 벙법 개발 ... 35
- Ⅳ. 연구결과요약 ... 37
- 1. 제1세부과제 : 사료 중의 곰팡이 독소 스크리닝법 확립 ... 37
- 2. 제2세부과제 : 간장, 신장 조직 중의 곰팡이 독소 정밀검사 방법 개발 ... 39
- Ⅴ. 고 찰 ... 39
- Ⅵ. 연구결과 활용실적 및 계획 ... 40
- Ⅶ. 참고자료 ... 42
- 끝페이지 ... 42
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