보고서 정보
주관연구기관 |
농림축산검역본부 Animal and Plant Quarantine Agency |
연구책임자 |
이진주
|
참여연구자 |
허문
,
강성일
,
성소라
,
김선화
,
Monaya Ekgatat
,
Reka kanitpun
,
Surapong Wongkasemjit
,
이희수
|
보고서유형 | 연차보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2015-12 |
과제시작연도 |
2015 |
주관부처 |
농림축산식품부 Ministry of Agriculture, Food and Rural Affairs(MAFRA) |
등록번호 |
TRKO202000031003 |
과제고유번호 |
1545009770 |
사업명 |
농림축산검역검사기술개발 |
DB 구축일자 |
2020-11-28
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키워드 |
태국.브루셀라균주.B. canis.genotyping.
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초록
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4. 당해년도 연구결과 요약
◦ 제1세부과제명 : 태국 유래 브루셀라균주 확보 및 B. canis 진단법 효율성 평가 < 태국 측 >
- 1~5차 가검시료로서 태국 내 6개 지역에 육우 10두, 젖소 23두, 염소 49두 및 양 19두로부터 총 624개 조직 및 23개 우유를 채취하여 균분리를 수행하고, 총 806개 혈액을 채취하여 혈청검사를 수행하였음
- 육우 4두, 젖소 2두, 염소 19두 및 양 11두에서 브루셀라 균분리가 되어 생화학검사 및 본부 개발 Multiplex PCR검사 적용 결과, 육우 4주는 B.
4. 당해년도 연구결과 요약
◦ 제1세부과제명 : 태국 유래 브루셀라균주 확보 및 B. canis 진단법 효율성 평가 < 태국 측 >
- 1~5차 가검시료로서 태국 내 6개 지역에 육우 10두, 젖소 23두, 염소 49두 및 양 19두로부터 총 624개 조직 및 23개 우유를 채취하여 균분리를 수행하고, 총 806개 혈액을 채취하여 혈청검사를 수행하였음
- 육우 4두, 젖소 2두, 염소 19두 및 양 11두에서 브루셀라 균분리가 되어 생화학검사 및 본부 개발 Multiplex PCR검사 적용 결과, 육우 4주는 B. abortus S19 (bv. 1, 백신균주), 젖소 2주는 B. abortus (bv. 1), 염소 및 양 분리주 30주는 B. melitensis (bv. 2) 로 확인되었음
- 총 806개 혈액의 1차 스크리닝 검사에서 양성개체(101두) 중 균분리를 시도한 개체(48두)의 혈청학적 검사결과, RBT에서 46두 양성(양성률 95.8%), ELISA 40두 양성(83.3%), CFT에서 39두 양성(81.3%)으로 판정되었음
◦ 제2세부과제명: 태국 유래 브루셀라균주의 분자역학적 분석 및 B. canis 진단법 개발 및 적용 < 본부 측 >
- 태국 1~5차 가검물 및 브루셀라 분리주를 확보하여 유전학적 검사(Multiplex PCR 및 real-time PCR)를 통해 브루셀라 species 감별은 태국과 모두 일치하는 결과를 얻었음
- 브루셀라 biovar 감별용 biotyping 검사 결과, 염소 및 양 분리주 30주는 모두 B. melitensis (bv. 3)로 감별되어 biovar type이 태국결과(bv.2)와는 다른 결과로 확인되었음
- 1~5차(48두) 혈청학적 검사 결과, RBT에서 46두 양성(95.8%), ELISA 및 FPA 40두 양성(83.3%)으로 축종별로 육우 7두(70%), 젖소 1두(50%), 염소 23두(92%), 양 11두(100%) 양성으로 판정되었음
- 태국 내 B. melitensis 분리주 30주의 세포내 침입 및 증식 특성 분석 결과, 감염 후 30분 동안 세포내 침입이 표준균주보다 유의적으로 증가(2배 이상)하는 그룹(Ⅰ)은 LP65 외 8주, 유의적으로 감소하는 그룹(Ⅱ)는 LP98, 차이가 작은 그룹(Ⅲ)은 AT3 외 9주로 확인되었으며, 감염 후 48시간 동안 세포내 증식은 대부분 분리주가 유의적으로 증가하였으나, NG2361, NG4628, NG4636는 세포내에서 증식하지 못하는 것을 확인되었음
- 태국 내 B. melitensis 분리주의 균 고유 표면단백질 특성 분석 결과, 태국 분리주들은 B. melitensis 63/9(bv.2) 표준균주와 거의 상응하는 패턴을 보였으며 B. melitensis 16M(bv.1)과는 60, 45, 37 KDa, B. melitensis Ether(bv.3)와는 45 KDa 크기의 표면단백질 차이를 확인할 수 있었고, 태국 분리주들 간의 패턴차이는 거의 없었음
- MLVA typing assay 분석 결과, 현재까지(1~5차) 분리된 B. melitensis 분리주(30주)는 4 loci에서 1~6 copy수 차이를 보이면서 총 11개의 allelic patterns을 확인하였으며, 지역적으로 다른 패턴으로 나뉘는 경향을 보이면서 MLVA 04와 30번 marker가 태국내 지역별 역학적 연관성에 대한 감별력을 보이는 marker로 확인됨
- B. melitensis 분리주 간에는 90.6%, 88.8%, 84.2% 유사도로 4개의 그룹(A, B, C, D)으로 대부분 동일한 축종 및 지역별로 그룹화되는 경향을 보였으며, 각 그룹내 지역 및 축종간 역학적 상관관계가 높음을 확인하였음
- 다른 국외 B. melitensis 분리주와 비교해 본 결과, 대부분 중국 분리주와 가장 높은 유연관계를 가졌으며, 그 외 터키, 몽골, 인도 등 일부 분리주와 분자역학적 상관관계를 확인하였음
- B. abortus 젖소 분리주(2주)는 동일한 genotype을 나타냈으며, 태국 B. melitensis 분리주와는 9 loci에서 Brucella species 간의 감별력을 확인하였고 국내 분리주와 비교해 73.2% 유사도에서 감별되었음
(출처 : 4. 당해년도 연구결과 요약 1p)
목차 Contents
- 표지 ... 1
- Ⅰ. 연구배경 및 목표 ... 3
- 1. 연구배경 ... 3
- 2. 연구최종목표 ... 4
- 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 5
- Ⅱ. 연구방법 및 수행전략 ... 6
- 1. 재 료 ... 6
- 2. 연구전략 및 방법 ... 6
- Ⅲ. 연구결과 ... 7
- Ⅳ. 연구결과요약 ... 39
- V. 금후 추진계획 ... 40
- VI. 연구결과 활용실적 및 계획 ... 41
- 끝페이지 ... 42
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