보고서 정보
주관연구기관 |
농림축산검역본부 Animal and Plant Quarantine Agency |
연구책임자 |
정옥미
|
참여연구자 |
강민수
,
최병국
,
임춘태
,
전병우
,
배유찬
,
김혜령
,
권혁만
,
정석찬
|
보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
|
발행년월 | 2015-12 |
과제시작연도 |
2015 |
주관부처 |
농림축산식품부 Ministry of Agriculture, Food and Rural Affairs(MAFRA) |
등록번호 |
TRKO202000031044 |
과제고유번호 |
1545009822 |
사업명 |
농림축산검역검사기술개발 |
DB 구축일자 |
2020-11-28
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키워드 |
전염성 코라이자.닭.진단.항생제.Infectious coryza.chicken.diagnosis.antimicrobials.vaccine.
|
초록
▼
5. 최종 연구결과 요약
□ 세부과제명 : 닭 전염성 코라이자 감염실태 조사 및 백신주 선발
○ 닭 전염성 코라이자의 국내 발생 실태 조사
- 원인체 분리 동정
* 2011년 이후 병성감정시료 및 도계장으로 출하되는 닭에서 전염성 코라이자 20주 확보
-혈구응집억제반응(HI test)을 이용한 항체조사
* 농장 및 도축장에서 채취한 농가 혈액시료(총56개소, 1573시료)에 대해 A형으로는 221주, B형으로 2671주, C형으로 Modesto주를 항원으로 사용하여 항체검사(HI) 수행결과, 종계,
5. 최종 연구결과 요약
□ 세부과제명 : 닭 전염성 코라이자 감염실태 조사 및 백신주 선발
○ 닭 전염성 코라이자의 국내 발생 실태 조사
- 원인체 분리 동정
* 2011년 이후 병성감정시료 및 도계장으로 출하되는 닭에서 전염성 코라이자 20주 확보
-혈구응집억제반응(HI test)을 이용한 항체조사
* 농장 및 도축장에서 채취한 농가 혈액시료(총56개소, 1573시료)에 대해 A형으로는 221주, B형으로 2671주, C형으로 Modesto주를 항원으로 사용하여 항체검사(HI) 수행결과, 종계, 산란계 및 토종닭 농가에서 A형에 대한 감염 또는 백신접종 항체 양성을 확인 함.
○ 진단법 구축 및 분리주 특성조사
- 전염성코라이자 표준균주(A, B, C type, 10주) 도입완료 및 국내분리주의 진단에 전염성코라이자 특이 PCR 진단법 (HPG-2 PCR) 및 Page serotyping 동정기법 적용.
- 분리주에 대한 특성 조사
* 분리주는 모두 Gram(-), Catalase(-)으로, 성장배양조건(NAD 의존성등)에서 다른 유형으로 분류되었으며, 균주의 85%(17주/20주)가 NAD 의존형 코라이자로 확인됨
* 혈청형 동정: multiplex PCR방법에 따른 혈청형 검사 결과 16주에서 A형으로 확인하고 4주는 미동정 됨. 전통적인 방법에 의한 혈청형 동정이 필요함을 확인
* A, B, C 혈청형에 대한 각각의 표준항원으로 고역가의 항혈청을 제작하여, 혈구응집억제(HI) 반응을 이용한 Page serotyping 실시한 결과 16주가 A형으로 확인되었으며, 4주는 동정되지 않음.
○ 국내 분리주에 대한 항생제 감수성 조사
: 16종의 항생제에 대한 디스크 확산법으로 항생제 감수성 검사 실시(n=20)
* Amoxicillin-clavulanic acid, Ceftiofur, Gentamicin, Spectinomycin에 높은 감수성(100%) 보이나, Erythromycin과 Cloxacillin에는 50%미만의 감수성을 보였고, Lincomycin의 경우 100% 저항성을 보임.
○ 국내 전염성 코라이자 분리주의 유전적 특성 분석
- 국내 분리주에 대한 16S rRNA와 Hemaglutinin antigen (HagA) gene의 phylogenetic analysis 실시(n=20)한 결과, 전형적인 코라이자균주는 하나의 cluster를 형성한 반면, 비전형적인 4종의 균주는 다른 cluster를 형성하였으며, 혈청형동정법에 따른 혈청형분류에 따르지 않았고, 16S rRNA와 HagA genes에서 최소 각각 97%와 96%이상의 상동성을 보임
- 유전형 분석을 위한 ERIC-PCR, PFGE, DiversiLab rep-PCR 적용
* 표준주와 국내분리주 사이의 유전자적 상관성 평가를 위해 2014년 분리된 13주대상으로 ERIC-PCR, DiversiLab rep_PCR, PFGE 분석을 시도함.
* 그 결과, ERIC-PCR, DiversiLab rep_PCR, PFGE 모두 분석혈청형 특이적인 양상은 보이지 않았으나 국내분리주가 외국의 표준주와 뚜렷이 차이를 보였으며, 질병발생시 역학적 분석을 위한 기법으로 적용이 가능할 것으로 여겨짐.
○ 국내분리주의 증식능 및 병원성 평가
* 전염성코라이자 백신 후보주 선발을 위해 11개의 NAD 의존형 분리주에 대한 증식능을 비교한 결과, 2개의 분리주에서 백신주로의 가능성을 확인하였으며, SPF 닭에서의 병원성을 확인함.
(출처 : 5. 최종 연구결과 요약 1p)
Abstract
▼
Avibacterum paragallinarum (Av. paragallinarum, previously called Haemophilus paragallinarum) is the causative agent of infectious coryza, an acute respiratory disease of chickens. It is characterized by facial swelling, nasal discharges, anorexia, lacrimation, and sometimes diarrhea. The disease oc
Avibacterum paragallinarum (Av. paragallinarum, previously called Haemophilus paragallinarum) is the causative agent of infectious coryza, an acute respiratory disease of chickens. It is characterized by facial swelling, nasal discharges, anorexia, lacrimation, and sometimes diarrhea. The disease occurs worldwide and the major economic effect of the disease is attributed to retarded growth in growing birds and a marked reduction in egg production (10 to 40%) of laying and breeding hens, particularly on multiage farms. Recently the disease has been reported basing on the clinical features in Korea. However systematic investigations of the disease have not been done since the mid-1980s and the epidemiological features of the disease are still unknown.
A survey of infectious coryza of chickens was performed by the bacterial detection and hemagglutination-inhibition (HI) antibody against Av. paragallinarum using 221, 2671 and Modesto strains for serotype A, B, and C respecively in chicken farms (56 farms, 1573 chickens). HI antibodies against only serotype A were detected not only in the native chickens but also in the laying chickens. Twenty field isolates were obtained from swab samples of clinically suspected cases and slaughter houses in South Korea during the period from 2011 to 2015 and confirmed as Av. paragallinarum by specific HPG-2 PCR known to be specific for Av. paragallinarum and biochemical tests. All the strains were Gram-nagative bacteria and catalase negative. Growth was not observed on MacConkey agar. In the carbohydrate fermentation test, they fermented glucose, sucrose, mannitol, mannose and sorbitol. But, they do not ferment galactose, lactose and trehalose. For further characterization, serotyping using mPCR (multiplex polymerase chain reaction) and Page scheme by a hemagglutination-inhibition (HI) test with specific antisera was performed as described previously. The results of serotyping showed that all isolates were recognized to be serovar A except four non-typeable isolates. Three of them shows NAD independent-growth. In the phylogenetic analysis of bacterial 16S ribosomal RNA(rRNA) and hemagglutinin antigen (hagA) genes showed that twenty Korean isolates were divided into at least three distinct groups. The similarity of Korean isolates was at least 97% and 96% in the 16S rRNA and hagA genes, respectively. The isolates did not cluster according to Page and Kume serotyping schemes. We also investigated antimicrobial resistance of isolates using the disk diffusion test using 16 antimicrobial drugs. The isolates were highly susceptible to most antimicrobials used. Especially, all isolates were susceptible to amoxicillin-clavulanic acid, ceftiofur, gentamicin and spectinomycin. However, all isolates were resistant to lincomycin. For selection of vaccine candidates, growth between 11 NAD-dependent field isolates in 2014 was compared and two isolates were selected and confirmed for their virulence in SPF chickens.
(출처 : X. 영문초록 14p)
목차 Contents
- 표지 ... 1
- Ⅰ. 연구배경 및 목표 ... 3
- 1. 연구배경 ... 3
- 2. 연구최종목표 ... 4
- 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 4
- Ⅱ. 연구방법 및 수행전략 ... 4
- 1. 재 료 ... 4
- 2. 연구전략 및 방법 ... 5
- Ⅲ. 연구결과 ... 5
- Ⅳ. 연구결과요약 ... 10
- Ⅴ. 고찰 ... 11
- Ⅵ. 연구결과 활용실적 및 계획 ... 11
- Ⅶ. 연구사업 추진상 문제점 및 건의사항 ... 12
- Ⅷ. 주요연구 변경사항 ... 12
- IX. 참고자료 ... 13
- X. 영문초록 ... 14
- 끝페이지 ... 14
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