보고서 정보
주관연구기관 |
농림축산검역본부 Animal and Plant Quarantine Agency |
연구책임자 |
강민수
|
참여연구자 |
정옥미
,
최병국
,
임춘태
,
윤소윤
,
문진산
,
정석찬
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보고서유형 | 연차보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2015-12 |
과제시작연도 |
2015 |
주관부처 |
농림축산식품부 Ministry of Agriculture, Food and Rural Affairs(MAFRA) |
등록번호 |
TRKO202000031045 |
과제고유번호 |
1545009789 |
사업명 |
농림축산검역검사기술개발 |
DB 구축일자 |
2020-11-28
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키워드 |
살모넬라.계육.도축.관리.
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초록
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4. 당해년도 연구결과 요약
○ 세부과제명 : 계육 생산과정에서의 살모넬라 검색 및 저감화 방안 연구
- 계육에서의 살모넬라 검사효율 개선을 위한 신속검사법 확립 및 유효성 검증
∘ 등온유전자증폭법(LAMP법)의 민감도, 특이도 및 검출한계 조사
- 개발된 invA-LAMP법과 일반 PCR, real-time PCR 등 세가지 방법으로 다양한 혈청형의 살모넬라균 140주와 기타 세균 27주를 대상으로한 민감도와 특이도 조사에서 각각 100%로 나타났음
- LAMP법의 검출한계를 조사하기 위해 S. Ente
4. 당해년도 연구결과 요약
○ 세부과제명 : 계육 생산과정에서의 살모넬라 검색 및 저감화 방안 연구
- 계육에서의 살모넬라 검사효율 개선을 위한 신속검사법 확립 및 유효성 검증
∘ 등온유전자증폭법(LAMP법)의 민감도, 특이도 및 검출한계 조사
- 개발된 invA-LAMP법과 일반 PCR, real-time PCR 등 세가지 방법으로 다양한 혈청형의 살모넬라균 140주와 기타 세균 27주를 대상으로한 민감도와 특이도 조사에서 각각 100%로 나타났음
- LAMP법의 검출한계를 조사하기 위해 S. Enteritidis, S. Typhimurium, S. Pullorum S. Gallinarum, 등 4가지 혈청형 각각의 10배 단계희석액에 대한 검사에서 4종 모두 106 CFU/ml (103 CFU/ul)까지 검출하였음
∘ 신속 정밀한 real-time PCR 법 primer와 probe 디자인 및 반응조건 확립
- 계육에서의 주요 혈정형(S. Enteritidis, S. Typhimurium, S. Pullorum, S. Gallinarum)의 신속정밀한 동정을 수행하기 위하여 real-time multiplex PCR을 위한 primer와 probe를 개발하였음
- 살모넬라균 140주 및 기타 세균 27주를 대상으로 real time-PCR(Tm=65℃)을 적용한 결과, S. Enteritidis, S. Typhimurium, S. Gallinarum/Pullorum 등 3가지 표적 혈청형에 대해 민감도와 특이도 각각 100%로 나타났음
∘ 살모넬라 생균감별 검출방법 확립 및 유효성 검증
- LED photolysis 장치와 propidium monoazide(PMA, 100uM) 전처리 방식을 이용하여 생균만을 감별하여 신속정확히 검출할 수 있는 LAMP 및 real time-PCR 조건을 확립하였음
- 확립된 LAMP 및 real-time PCR로 S. Enteritidis, S. Typhimurium, S. Pullorum, S. Gallinarum 등에 대한 PMA 유효성을 확인하였음
∘ 신속검사법의 검출한계 조사와 가금도체에서의 민감도 및 특이도 조사
- 사균과 생균 혼합 시료를 PMA 전처리한 후, LAMP 및 real time-PCR을 이용한 생균검출법의 한계치를 조사하였으며, LAMP의 경우 106 CFU/ml(103 CFU/ul), real time-PCR의 경우 혈청형 특이 유전자 및 공통인 invA 유전자 모두 104 CFU/ml(101 CFU/ul)까지 검출가능하였음
- 실제 도체 린스액에 S. Enteritidis, S. Typhimurium, S. Pullorum, S. Gallinarum 균주를 실제로 접종하여 LAMP 및 real-time multiplex PCR로 생균을 검출하였으며, 검출한계는 마찬가지로 LAMP는 106 CFU/ml (103 CFU/ul)였고 real-time multiplex PCR은 104 CFU/ml (101 CFU/ul)이었음
- 계육 생산 단계에서의 살모넬라 위해요소 분석과 관리기준점 조사
∘ 농장, 닭도축장 분리 살모넬라균의 특성 조사 및 분석
- 총 8개소의 닭도축장(경기1, 충북1, 충남1, 전북1, 경북1, 강원2, 대구1)을 대상으로 조사한 결과 경기 소재 1개소를 제외한 7개소에서 살모넬라균이 확인되었음
- 냉각방식의 차이에 따른 살모넬라 오염도를 비교해 보았으며, 현재까지의 검사결과에서는 침지와 공기냉각을 병행하는 작업장에서 최종도체의 살모넬라 오염이 보다 효과적으로 방지되고 있는 것으로 조사되었음
- 2014-2015년도 닭도축장 유래 살모넬라균 분리주 총 82주를 대상으로 총 15종의 약제에 대하여 내성양상을 조사한 결과, nalidixic acid에 대한 내성률(69.5%)이 50% 이상으로 높게 나타났으며, 14가지의 내성형으로 구분되었고, 30주(36.6%)가 5가지 이상의 약제에서 내성을 나타내었음
∘ 닭도축장에서의 위생관리 시스템 분석 및 살모넬라 저감제 효과 비교
- 닭도축장 5개소에서 냉각과정을 거친 후의 도체가 내장적출 및 세척 후 도체(냉각과정 전 도체)보다 살모넬라균 검출 확률이 낮아지는 것으로 조사되었으며, 살모넬라 오염도가 높은 1개소의 침지수에 대한 염소농도 측정결과, 총염소량과 유리염소량 모두 미량 검출되어 냉각과정에서 침지수의 소독관리가 중요함을 확인하였음
- 국내외적으로 도체에 적용가능한 9가지의 소독제를 선발하여 Salmonella에 대한 저해효과를 측정한 결과, sodium hypochlorite(50ppm-30min, 60ppm-1min), calcium hypochlorite(20ppm-1min), cetylpyridinium chloride(0.1%-1min), citric acid(10%-30min), malic acid(0.05%-5min), lactic acid(0.5%-5min, 1%-1min). trisodium phosphate(0.5%-1min), H2O2(2%-5min, 6%-1min), 시판 organic acid mixture(5%-1min)에서 저해율이 100%인 것으로 나타났음
- 또한, 상기의 9가지 소독제의 권장농도에서 닭도축장에서 유래된 82가지의 살모넬라균을 대상으로 biofilm 형성 저해효과를 측정한 결과, cetylpyridinium chloride, citric acid, malic acid, lactic acid, hydrogen peroxide 등 5가지 소독수에 의해 유의하게 biofilm 형성이 저해되는 것을 확인하였음
- 이러한 실험결과를 토대로 유기물이 포함된 냉각수 조건에서의 저해효과에 대한 시험이 추가적으로 진행되고 있음
(출처 : 4. 당해년도 연구결과 요약 1p)
목차 Contents
- 표지 ... 1
- Ⅰ. 연구배경 및 목표 ... 3
- 1. 연구배경 ... 3
- 2. 연구최종목표 ... 4
- 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 4
- Ⅱ. 연구방법 및 수행전략 ... 5
- 1. 재 료 ... 5
- 2. 연구전략 및 방법 ... 5
- Ⅲ. 연구결과 ... 6
- 1. 제1세부과제명: 계육 생산과정에서의 살모넬라 검색 및 저감화 방안 연구 ... 6
- Ⅳ. 연구결과요약 ... 24
- 1. 제1세부과제명: 계육 생산과정에서의 살모넬라 검색 및 저감화 방안 연구 ... 24
- Ⅴ. 금후 추진계획 ... 26
- Ⅵ. 연구결과 활용실적 및 계획 ... 27
- Ⅶ. 연구사업 추진상 문제점 및 건의사항 ... 28
- Ⅷ. 주요연구 변경사항 ... 28
- Ⅸ. 참고문헌 ... 28
- 끝페이지 ... 29
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