표 Monoclonal antibodies for H5N3 HA2 denature specific antigen 표 limit dilution 한 clone에 대한 다른 바이러스 반응성 표 생바이러스에 대한 후보 항체의 반응 표 생바이러스에 대한 HA2 항원의 후보 항체의 반응성 표 CDR 예측 프로그램을 활용한 CDR 후보 서열 확보 표 P1 과 H5-P2 펩타이드와 각 바이러스의 항원에 대한 결합 위치 분석 표 P1 과 H5-P2 펩타이드의 수소 결합력 예측 결과. 수소결합간 거리와 총합 (A). 수소 결합 위치의 아미노산 (B) 표 펩타이드를 fluorescent probe를 이용하여 96 well plate에 바이러스를 coating한 뒤 바이러스 반응성을 측정한 결과 P1이 기존 펩타이드 H5-P2 보다 유의성 있게 반응성이 증가되었음 표 펩타이드 압타머로 바이러스 검출 한계를 항체와 비교실험한 결과, 항체와 펩타이드 압타머는 같은 검출한계를 보이고 있음 표 Monoclonal antibodies for H5N1 HA2 specific antigen 표 인플루엔자 H5N1 HA-F2 항원으로 면역된 마우스(M)의 혈청 내 항체가. ELISA법으로 측정하였으며(ELISA법에 의한 O.D 값), 음성대조군으로는 PBS(인산완충액, pH 7.4)와 건강한 마우스의 혈청(Normal, 1:200 희석)을 사용하였음 표 Monoclonal antibodies for H5N1 HA-F2 specific antigen 표 Monoclonal antibodies for H5N1 HA-F2 specific of SDS-PAGE gel 표 인플루엔자 H5N1 NA 항원으로 면역된 마우스(M)의 혈청 내 항체가. ELISA법으로 측정하였으며(ELISA법에 의한 O.D 값), 음성대조군으로는 PBS(인산완충액, pH 7.4)와 건강한 마우스의 혈청(Normal, 1:200 희석)을 사용하였음 표 Monoclonal antibodies for H5N1 NA specific antigen 표 Monoclonal antibodies for H5N1 NA specific of SDS-PAGE gel 표 펩타이드를 biotinylation 시키고 streptavidin과 형광체와 축합한 축합체(A)를 항체가 점적된 진단스트립에 바이러스 검출용으로 사용한 결과 H5아형 특이성이 유지되었음 표 본 연구에서 활용한 latex 형광체, 항체의 축합체의 구조 표 분변을 신속 키트에 적용하는 방법 개요 표 분변의 종류에 따른 형광 진단 시스템의 성능 차이. (A) 신선한 닭 분변. (B) 오래된 닭 분변. (C) 야생조류 분변 표 본 연구에서 개발한 저병원성 기반 유전자 H5N6 인플루엔자 바이러스를 활용한 진단 항원 개발하여 마우스 면역한 결과, 대장균에서 발현한 항원보다 바이러스에 의한 항원이 바이러스에 반응성이 높았음 표 바이러스 항원 유래 항체와 대장균 발현 항원 유래의 항체의 세포 감염된 바이러스에 대한 인식을 확인한 결과,양성으로 확인되었음 표 바이러스 항원 유래 항체와 대장균 발현 항원 유래의 항체에 대해 각 바이러스를 western blot으로 확인한 결과 양성으로 확인됨 표 H5N8 인플루엔자 바이러스를 활용한 진단 항원 개발하여 마우스 면역한 결과 2F5, 3C6 두 개의 단세포군 항체 확보 표 각 H5후보 항체에 대한 2세부의 고병원성 H5N6, H6N8 live 바이러스에 대해 반응시킨 결과, 바이러스에 반응하는 것이 확인되었음 (화살표:양성) 표 축합용 #1.1-4/점적용 #23.3의 형광 키트의 H5N8에 대한 검출한계 표 분변에 있는 바이러스를 현장에서 검출하는 방법을 고안하였음 표 축합용 #1.1-4/점적용 #23.3의 형광 키트의 H5N8에 대한 검출한계 (분변과 바이러스를 혼합한 경우) (160 HAU/mL) 표 축합용 #1.1-4/점적용 #23.3의 형광 키트의 H5N6에 대한 검출한계 (분변과 바이러스를 혼합한 경우) 표 축합용 #1.1-4/점적용 #23.3의 형광 키트의 H5N6, H5N8에 대한 검출한게의 RNA copy 를 계산한 결과 분변이 존재하여도 H5N8 1.05 x 103 /rxn 및 H5N6는 4.9 x 105 /rxn 를 나타냄 표 분변 검체에 대한 H5특이 상용화 키트의 임상 시험 결과 (감염 후 2일 후) 표 분변 검체에 대한 본 연구진의 H5 특이 신속형광면역키트 (감염 후 2일 후) 표 B5C1 (점적) 및 E2C1 (축합) 항체를 조합 표 분변에 있는 바이러스를 현장에서 검출하는 방법을 고안하였음 표 B5C1 (점적) 및 E2C1 (축합) 항체를 조합하여 신속형광면역진단키트의 검출한계는 20HAU/mL 이지만 분변이 존재할때는 약 160 HAU/mL의 검출한계를 보임 표 A27-9 (점적)항체와 A45-D5(축합) 혹은 A39-G10 (축합)의 검출한계는 모두 20 HAU/mL 동일함 표 분변에 있는 바이러스를 현장에서 검출하는 방법을 고안하였음. 분변에 있는 바이러스를 현장에서 검출하는 방법을 고안하였음. 분변을 10초간 미니 원심분리기로 돌린뒤 상층액만 반응을 시킴 표 분변 존재하는 바이러스를 검출하는 데 있어서는 A27-9 (점적)항체와 A45-D5(축합)는 80 HAU/mL, A39-G10 (축합)는 160 HAU/mL 로 A27-9 (점적)항체와 A45-D5(축합) 조합이 더 우수하였음 표 신속형광면역 진단 키트의 검출한계는 5 HAU/mL (원광대 보유한 H9N2 바이러스) 표 신속형광면역 진단 키트의 검출한계는 5 HAU/mL (원광대 보유한 H9N2 바이러스) 표 신속형광면역 진단 키트의 검출한계는 40 HAU/mL (원광대 보유한 H9N2 바이러스) 표 신속형광면역 진단 키트의 검출한계는 80 HAU/mL (원광대 보유한 H9N2 바이러스) 표 A27-9(점적)항체와 A45-D5조합의 항체는 최종 pH 8.0 의 축합체와 1.2% SDS의 lysis buffer 를 선택함 표 2세부가 수행한 A27-9(점적)항체와 A45-D5, A39-G10에 대해 진단 스트립 성능평가 8 HAU/mL 유사한 값이지만, 형광 신호가 A45-D5가 더 강함을 알 수 있음 표 H9N2 특이 신속형광면역진단 키트의 H9N2 바이러스에 대한 특이성 검증 표 사용한 바이러스 정보 표 conjugation #G10 / coating #A27-9 조합의 육안 진단키트는 감염후 2일 후 분변에서 모두 음성이었고, 신속형광진단키트는 8개중에서 단 1개만 양성이었음 표 conjugation#A45-D5/coating A27-9 조합의 육안 진단키트는 감염후 2일 후 분변에서 단 1개만 양성이었고, 신속형광진단키트는 8개중에서 단 6개가 양성이었음
표 Monoclonal antibodies for H5N3 HA2 denature specific antigen 표 limit dilution 한 clone에 대한 다른 바이러스 반응성 표 생바이러스에 대한 후보 항체의 반응 표 생바이러스에 대한 HA2 항원의 후보 항체의 반응성 표 CDR 예측 프로그램을 활용한 CDR 후보 서열 확보 표 P1 과 H5-P2 펩타이드와 각 바이러스의 항원에 대한 결합 위치 분석 표 P1 과 H5-P2 펩타이드의 수소 결합력 예측 결과. 수소결합간 거리와 총합 (A). 수소 결합 위치의 아미노산 (B) 표 펩타이드를 fluorescent probe를 이용하여 96 well plate에 바이러스를 coating한 뒤 바이러스 반응성을 측정한 결과 P1이 기존 펩타이드 H5-P2 보다 유의성 있게 반응성이 증가되었음 표 펩타이드 압타머로 바이러스 검출 한계를 항체와 비교실험한 결과, 항체와 펩타이드 압타머는 같은 검출한계를 보이고 있음 표 Monoclonal antibodies for H5N1 HA2 specific antigen 표 인플루엔자 H5N1 HA-F2 항원으로 면역된 마우스(M)의 혈청 내 항체가. ELISA법으로 측정하였으며(ELISA법에 의한 O.D 값), 음성대조군으로는 PBS(인산완충액, pH 7.4)와 건강한 마우스의 혈청(Normal, 1:200 희석)을 사용하였음 표 Monoclonal antibodies for H5N1 HA-F2 specific antigen 표 Monoclonal antibodies for H5N1 HA-F2 specific of SDS-PAGE gel 표 인플루엔자 H5N1 NA 항원으로 면역된 마우스(M)의 혈청 내 항체가. ELISA법으로 측정하였으며(ELISA법에 의한 O.D 값), 음성대조군으로는 PBS(인산완충액, pH 7.4)와 건강한 마우스의 혈청(Normal, 1:200 희석)을 사용하였음 표 Monoclonal antibodies for H5N1 NA specific antigen 표 Monoclonal antibodies for H5N1 NA specific of SDS-PAGE gel 표 펩타이드를 biotinylation 시키고 streptavidin과 형광체와 축합한 축합체(A)를 항체가 점적된 진단스트립에 바이러스 검출용으로 사용한 결과 H5아형 특이성이 유지되었음 표 본 연구에서 활용한 latex 형광체, 항체의 축합체의 구조 표 분변을 신속 키트에 적용하는 방법 개요 표 분변의 종류에 따른 형광 진단 시스템의 성능 차이. (A) 신선한 닭 분변. (B) 오래된 닭 분변. (C) 야생조류 분변 표 본 연구에서 개발한 저병원성 기반 유전자 H5N6 인플루엔자 바이러스를 활용한 진단 항원 개발하여 마우스 면역한 결과, 대장균에서 발현한 항원보다 바이러스에 의한 항원이 바이러스에 반응성이 높았음 표 바이러스 항원 유래 항체와 대장균 발현 항원 유래의 항체의 세포 감염된 바이러스에 대한 인식을 확인한 결과,양성으로 확인되었음 표 바이러스 항원 유래 항체와 대장균 발현 항원 유래의 항체에 대해 각 바이러스를 western blot으로 확인한 결과 양성으로 확인됨 표 H5N8 인플루엔자 바이러스를 활용한 진단 항원 개발하여 마우스 면역한 결과 2F5, 3C6 두 개의 단세포군 항체 확보 표 각 H5후보 항체에 대한 2세부의 고병원성 H5N6, H6N8 live 바이러스에 대해 반응시킨 결과, 바이러스에 반응하는 것이 확인되었음 (화살표:양성) 표 축합용 #1.1-4/점적용 #23.3의 형광 키트의 H5N8에 대한 검출한계 표 분변에 있는 바이러스를 현장에서 검출하는 방법을 고안하였음 표 축합용 #1.1-4/점적용 #23.3의 형광 키트의 H5N8에 대한 검출한계 (분변과 바이러스를 혼합한 경우) (160 HAU/mL) 표 축합용 #1.1-4/점적용 #23.3의 형광 키트의 H5N6에 대한 검출한계 (분변과 바이러스를 혼합한 경우) 표 축합용 #1.1-4/점적용 #23.3의 형광 키트의 H5N6, H5N8에 대한 검출한게의 RNA copy 를 계산한 결과 분변이 존재하여도 H5N8 1.05 x 103 /rxn 및 H5N6는 4.9 x 105 /rxn 를 나타냄 표 분변 검체에 대한 H5특이 상용화 키트의 임상 시험 결과 (감염 후 2일 후) 표 분변 검체에 대한 본 연구진의 H5 특이 신속형광면역키트 (감염 후 2일 후) 표 B5C1 (점적) 및 E2C1 (축합) 항체를 조합 표 분변에 있는 바이러스를 현장에서 검출하는 방법을 고안하였음 표 B5C1 (점적) 및 E2C1 (축합) 항체를 조합하여 신속형광면역진단키트의 검출한계는 20HAU/mL 이지만 분변이 존재할때는 약 160 HAU/mL의 검출한계를 보임 표 A27-9 (점적)항체와 A45-D5(축합) 혹은 A39-G10 (축합)의 검출한계는 모두 20 HAU/mL 동일함 표 분변에 있는 바이러스를 현장에서 검출하는 방법을 고안하였음. 분변에 있는 바이러스를 현장에서 검출하는 방법을 고안하였음. 분변을 10초간 미니 원심분리기로 돌린뒤 상층액만 반응을 시킴 표 분변 존재하는 바이러스를 검출하는 데 있어서는 A27-9 (점적)항체와 A45-D5(축합)는 80 HAU/mL, A39-G10 (축합)는 160 HAU/mL 로 A27-9 (점적)항체와 A45-D5(축합) 조합이 더 우수하였음 표 신속형광면역 진단 키트의 검출한계는 5 HAU/mL (원광대 보유한 H9N2 바이러스) 표 신속형광면역 진단 키트의 검출한계는 5 HAU/mL (원광대 보유한 H9N2 바이러스) 표 신속형광면역 진단 키트의 검출한계는 40 HAU/mL (원광대 보유한 H9N2 바이러스) 표 신속형광면역 진단 키트의 검출한계는 80 HAU/mL (원광대 보유한 H9N2 바이러스) 표 A27-9(점적)항체와 A45-D5조합의 항체는 최종 pH 8.0 의 축합체와 1.2% SDS의 lysis buffer 를 선택함 표 2세부가 수행한 A27-9(점적)항체와 A45-D5, A39-G10에 대해 진단 스트립 성능평가 8 HAU/mL 유사한 값이지만, 형광 신호가 A45-D5가 더 강함을 알 수 있음 표 H9N2 특이 신속형광면역진단 키트의 H9N2 바이러스에 대한 특이성 검증 표 사용한 바이러스 정보 표 conjugation #G10 / coating #A27-9 조합의 육안 진단키트는 감염후 2일 후 분변에서 모두 음성이었고, 신속형광진단키트는 8개중에서 단 1개만 양성이었음 표 conjugation#A45-D5/coating A27-9 조합의 육안 진단키트는 감염후 2일 후 분변에서 단 1개만 양성이었고, 신속형광진단키트는 8개중에서 단 6개가 양성이었음
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