초록 ▼

Ⅳ. 연구개발결과
1. 동물모델에서의 약물동태연구
후보물질 TEJ-1704의 설치류, 비설치류 모델에서의 경구투여 결과, 혈중 노출되는 parent 약물 (TEJ-1704) 및 활성물질 에다라본의 경시적 농도분석을 실시하였음. 마우스에서는 TEJ-1704 경구투여군에서 혈중 에다라본 농도가 AUC 기준으로 에다라본 경구투여군 대비 상대흡수율이 42.9%로 나타남. 반면에 마우스 brain 조직에서의 에다라본 농도는 TEJ-1704 투여군의 상대흡수도가 131%로 높은 조직분포도를 나타냈음. 한편 비글견 시험에서는 TEJ-

Ⅳ. 연구개발결과
1. 동물모델에서의 약물동태연구
후보물질 TEJ-1704의 설치류, 비설치류 모델에서의 경구투여 결과, 혈중 노출되는 parent 약물 (TEJ-1704) 및 활성물질 에다라본의 경시적 농도분석을 실시하였음. 마우스에서는 TEJ-1704 경구투여군에서 혈중 에다라본 농도가 AUC 기준으로 에다라본 경구투여군 대비 상대흡수율이 42.9%로 나타남. 반면에 마우스 brain 조직에서의 에다라본 농도는 TEJ-1704 투여군의 상대흡수도가 131%로 높은 조직분포도를 나타냈음. 한편 비글견 시험에서는 TEJ-1704 경구투여군에서 혈중에 다라본 농도가 AUC 기준으로 에다라본 경구투여군 대비 상대흡수율이 67.3%로 나타남. 반면에 비글견 CSF 조직에서의 에다라본 농도는 TEJ-1704 투여군의 상대흡수도가 330%로 매우 높은 조직분포도를 나타냈음.

2. in vitro ADME 연구
Human을 포함한 5종의 동물 liver microsome을 이용하여 TEJ-1704의 대사 산물을 분석함. 분석결과 설치류 중 rat가 사람과 가장 유사한 대사체들이 생성되며, 따라서 rat를 비임상용 설치류로 선정함. 한편 in vitro 시험결과에 의하면, TEJ-1704는 아미노산 계열 약물의 active transporter인 PepT1, LAT1에 대한 기질은 아니며 오히려 efflux pump인 PgP의 기질로 확인되었음. 또한 카바메이트 구조의 프로드럭인 TEJ-1704는 carboxyesterase 효소 (CES1c)에 의해 대사되며, human 또는 rat의 hepatocyte 및 liver homogenate에서 분해속도가 매우 느린 것으로 확인되었음. 그리고 human 또는 rat의 brain homogenate에서는 전혀 대사되지 않았음. 이러한 결과는 동물모델에서의 약물동태에 있어서 TEJ-1704의 혈중 반감기 및 이를 통한 에다라본의 서방형 패턴 노출현상을 해석할 수 있는 중요한 자료라 사료됨.

3. 항산화효과 규명
TEJ-1704 물질 자체는 항산화효능이 없으며, 생체내에서 유효성분인 에다라본, 즉 항산화효능을 가진 물질로 변환됨을 확인함.

4. in vivo 유효성 평가
루게릭병 모델로 대표적인 SOD Tg 마우스를 이용하여 TEJ-1704에 대한 유효성을 평가한 결과, 150 mpk 투여군 (HCl염 기준) 경우 에다라본 대조군 대비 동등 이상의 효능을 보여주었음.

5. 원료 제조공정 개발
TEJ-1704 후보물질의 비임상 원료생산을 위한 총 5단계 공정의 제조방법을 실험실 규모에서 셋업 완료하였음. 과제 초기 후보물질은 염산염 형태로 개발되었으나, 물성 연구 과정에서 염산염의 안정성 (가속조건) 및 함습성 문제가 발생되었음. 이에 별도의 염 스크리닝 연구를 거쳐 최종적으로 매우 안정적이고 결정성이 우수한 토실산염을 확보하고 이에 대한 제조공정을 추가 셋업하였음.

6. 후보물질특성 분석법 개발
TEJ-1704의 품질분석을 위한 기준 및 시험방법을 마련하였음. 특히 순도 확인을 위한 최적화된 분석법의 개발 및 분석법 검증 (method validation)을 실시하였음. 이를 기준으로 하여 비임상시험용 생산 원료의 성적서를 발행함.

7. 비임상 독성시험용 원료생산
기 셋업된 제조공정에 따라 TEJ-1704 염산염을 10kg base로 생산 완료함. 생산과정에서 각 중간체는 별도의 조건으로 품질 확인을 거쳤으며 최종 제품은 목표 순도 (>98.5%)를 달성하였음. 한편 물리화학적 특성이 개선된 토실산염의 공급을 위하여 염산염은 다시 재처리되어 고순도의 안정한 비임상시험용 원료를 확보하였음.

8. 초기 제형연구
용해도, 친지질성 등 기초물성과 더불어 결정형, 수화물분석을 거쳐 후보물질의 특성에 관한 preformulation 연구를 진행하였음. 이들 데이터를 근거로 캡슐 형태의 1차 제형을 확보하였으며 양호한 용출 결과도 확인하였음. 이 제형을 이용하여 비글견 약동학 시험을 진행하였음.

9. 일반독성연구
유전독성의 경우 복귀돌연변이시험, 염색체이상시험, 소핵시험에서 각각 음성 또는 이상반응 없음으로 판명되었음. 안전성약리시험의 경우, 중추신경계는 최대투여용량 300 mpk에서 이상반응이 없었으며, 호흡기계는 100 mpk가 NOAEL로 산정됨. 심혈관계의 경우 hERG channel currents 억제율은 IC₅₀ = 17.3 μM이었고, telemetered beagle dog 시험에서는 최대투여용량 80 mpk에서 이상반응이 없었음.

10. 단회독성연구
설치류 (rat)의 경우 암수컷 모두 경구치사량은 2,000 mpk를 상회하며, 비설치류 (beagle dog)의 경우 일부 개체에서 구토 등의 증상이 나타났으나 시험물질의 영향은 아니며 결론적으로 MTD는 80 mpk를 상회하는 것으로 나타남.

11. 2주 DRF
랫드 시험의 경우 100, 300, 1,000 mpk/day 용량으로 2주간 경구투여하였는데, 300 및 1,000 mpk 투여군에서 혈액상 각종 지표 및 조직에서의 이상반응이 관찰된 바, 이는 시험물질의 영향으로 판단됨. 따라서 반복투여시 최고 용량은 300 mpk 미만의 용량으로 설정해야 함. 한편 비글견 시험의 경우, 대조군 및 20/40/80 mpk/day 용량으로 2주간 경구투여를 실시하며, 6월 15일자로 시험이 개시되었음.

12. 특허전략 수립
TEJ-1704 후보물질의 특허권 강화를 위하여 아미노산 2중 구조의 추가 화합물을 합성하고 이들에 대한 rat/dog PK 연구를 진행하였음. 그 결과 TEJ-1704에 버금가는 약동학 프로파일을 나타내는 물질을 확보하였고, 관련된 내용을 정리하여 추가로 특허출원하였음. (KR출원 10-2019-0156021)

(출처 : 요약문 5p)

Abstract ▼

III. Summarized Results
Analysis of pharmacokinetic properties in blood and CNS tissue of test material (TEJ-1704) and its active metabolite (edaravone) was performed. On the other hand metabolites profiling test using an animal liver microsome was performed to obtain metabolite information by in

III. Summarized Results
Analysis of pharmacokinetic properties in blood and CNS tissue of test material (TEJ-1704) and its active metabolite (edaravone) was performed. On the other hand metabolites profiling test using an animal liver microsome was performed to obtain metabolite information by in vitro assay in a rodent model. It was proved that metabolite profile in rat was most similar to that of human, therefore rat was chosen to be a proper model as a rodent model in preclinical studies.
Preclinial candidate TEJ-1704 showed no antioxidant activity in vitro test, which means inactive prodrug TEJ-1704 is converted to active metabolite edaravone in biological system. To evaluate the efficacy of prodrug substance TEJ-1704, we used SOD-Tg mouse model that is generally applied to ALS animal study. When test article is administrated orally into disease-inducedanimal, dose of 150 mpk (HCl salt of TEJ-1704) showed apperantly good activity in behaivor and survival rate, which is comparable to edaravone itself.
Manufacturing process development of API material was carried out in 5 synthetic steps of lab.
scale. In early stage of development HCl salt was developed as a candidate form, but verification of physicochemical properties including chemical stability and hygroscopicity led to new salt preparation, resulted in the tosylate salt as an excellent properties in view of stability and crystallinity. Therefore additional study of manufacturing process, i.e. conversion of HCl to tosylate was successfully finished. In the course of development and manufacturing of API analytical methods for the verification of quality was developed with physicochemical characteristics of candidate. Finally optimized analytical method and specification of product were set up, and certificate of analysis of preclinical raw material was issued and submitted to GLP toxicity institute. Raw material for toxicity test in preclinical study was obtained as a kg base with suitable quality in pre-specified requirement. These analytical method and specification was applied to formulation study, and primary capsule formulation for the beagle dog PK study was prepared.
General toxicity, genotoxicity and safety pharmacology test was carried out. A single dose toxicity showed LD₅₀ > 2,000 mpk in rat model and MTD > 80 mpk in beagle dog model.
Reverse mutation assay, chromosome aberration test and micronucleus assay also showed no adverse effect. In core battery test, NOAEL was 300 mpk in central nervous system (rat), 100 mpk in respiratory system (rat) and 80 mpk in cardiovascular system (dog). Meanwhile two weeks dose-range-finding study is currently performed.
Concerning the patent strategy, backup compounds were synthesized and evaluated to secure the right of additional patent application. KR patent appl. No. 10-2019-0156021 includes the result of these study.

(source: Summary 7p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제 출 문 ... 2
• 보고서 요약서 ... 3
• 요 약 문 ... 4
• SUMMARY ... 7
• CONTENTS ... 9
• 목차 ... 10
• 그림목차 ... 11
• 표목차 ... 12
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 13
• 제1절 타겟 목표 및 환자군 (Target Patient Population) ... 13
• 제2절 미충족 의학적 수요 (Unmet Medical Needs) ... 14
• 제3절 시장규모와 성장세 (Size and Growth) ... 14
• 제2장 국내외 기술개발 현황 ... 15
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 16
• 제1절 동물모델에서의 약물동태 연구 ... 16
• 제2절 in vitro ADME 연구 ... 18
• 제3절 항산화효과 규명 ... 22
• 제4절 in vivo 유효성 평가 ... 23
• 제5절 원료 제조공정 개발 ... 27
• 제6절 후보물질 특성 분석법 개발 ... 29
• 제7절 비임상 독성시험용 원료생산 ... 30
• 제8절 초기 제형연구 ... 31
• 제9절 일반독성 연구 ... 34
• 제10절 단회독성 연구 ... 38
• 제11절 2주 DRF ... 39
• 제12절 특허전략 수립 ... 40
• 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 44
• 제5장 연구개발결과의 활용계획 ... 46
• 제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 47
• 제7장 연구시설·장비 현황 ... 48
• 제8장 참고문헌 ... 49
• 끝페이지 ... 50