초록 ▼

< 연구의 목적 >
본 과제는 진행성 에스트로겐수용체 양성 유방암 환자에서 항호르몬 치료 효과를 추적 관찰할 수 있는 저항성 관련 유전자 ddPCR 진단 키트를 개발하고, 분석적 성능시험 및 임상적 성능시험을 최종 목표로함.

< 연구개발 내용 및 개발성과 >
1. Droplex ESR1 kit (RUO)
- ESR1 유전자 돌연변이 종류와 ddPCR primer, probe의 최적화 연구를 통해 Droplex ESR1 kit (RUO) 시제품 개발을 완료함.
- 분석적 성능 검증을 통하여 ESR1

< 연구의 목적 >
본 과제는 진행성 에스트로겐수용체 양성 유방암 환자에서 항호르몬 치료 효과를 추적 관찰할 수 있는 저항성 관련 유전자 ddPCR 진단 키트를 개발하고, 분석적 성능시험 및 임상적 성능시험을 최종 목표로함.

< 연구개발 내용 및 개발성과 >
1. Droplex ESR1 kit (RUO)
- ESR1 유전자 돌연변이 종류와 ddPCR primer, probe의 최적화 연구를 통해 Droplex ESR1 kit (RUO) 시제품 개발을 완료함.
- 분석적 성능 검증을 통하여 ESR1 유전자 돌연변이 빈도 0.47%의 최소검출한계를 확인하였고, 간섭물질의 유무와 상관없이 위양성, 위음성 검출이 없음을 확인함. 또한 유효기간 테스트를 통하여 적정보관온도에서 6개월까지 제품의 유효성이 확인함.
2. Droplex PIK3CA kit (RUO)
- PIK3CA 유전자 돌연변이 종류와 ddPCR primer, probe의 최적화 연구를 통해 Droplex PIK3CA kit (RUO) 시제품 개발을 완료함.
- 분석적 성능 검증을 통하여 PIK3CA 유전자 돌연변이 빈도 0.35%의 최소검출한계를 확인하였고, 간섭물질의 유무와 상관없이 위양성, 위음성 검출이 없음을 확인함. 또한 유효기간 테스트를 통하여 적정보관온도에서 6개월까지 제품의 유효성이 확인함.
- 'PIK3CA 돌연변이 검출용 조성물 및 이를 포함하는 키트' 특허출원함.
- PIK3CA mutation RUO Kit를 (주)젠큐릭스에 기술이전함.
3. GenoCTC Profiling kit_HER2 (RUO)
- 순환종양세포에서 HER2 과발현을 확인하기 위한 Immunocytochemistry 기법을 확립함.
- 3종류의 DNA 증폭 키트 비교 분석을 통해 최적의 순환종양세포 DNA 증폭 프로토콜 확립하였고,샘플 purity가 5% 이상 확보되면 순환종양세포 DNA에서 돌연변이 검출이 가능함을 확인함.
- GenoCTC Profiling kit_HER2 (RUO) 시제품 개발을 완료함.
- 임상 검체를 이용한 GenoCTC Profiling kit_HER2 (RUO) 성능을 확인함.
4. Droplex PIK3CA, ESR1의 GMP 생산 프로세스 확립
5. 식약처 제조 허가를 위한 분석적, 임상적 확립 프로토콜 확립

< 연구개발성과의 활용계획 (기대효과) >
- 본 과제를 통해 개발된 진행성 에스트로겐수용체 양성 유방암 환자에서 항호르몬 치료 효과를 추적 관찰할 수 있는 저항성 관련 유전자 ddPCR 진단 키트(Droplex PIK3CA, Droplex ESR1)는 추후 진행할 임상시험을 통하여 식약처 허가를 받고, 유방암 진단시장에 투입할 계획임.
- 또한, 이 제품들은 액상생검에서 항호르몬 치료 저항성 관련 유전자 진단 수준까지 개발이 가능하므로 향후 진단 및 추적관찰 연구에 활용 가능성이 매우 큼.

(출처 : 요약문 4p)

Abstract ▼

< Purpose >
The purpose of this research is to develop a ddPCR kit that can detect resistant genes in order to track and observe the effectiveness of hormone therapy in ongoing estrogen receptor positive patients. The final goal is to test this kit for its analytical and clinical performance.

< Purpose >
The purpose of this research is to develop a ddPCR kit that can detect resistant genes in order to track and observe the effectiveness of hormone therapy in ongoing estrogen receptor positive patients. The final goal is to test this kit for its analytical and clinical performance.

< Contents & Results >
1. Droplex ESR1 kit (RUO)
- Completed the development of the Droplex ESR1 kit (RUO) prototype through optimization studies of the ESR1 gene mutation type, ddPCR primer, and probe.
- Through analytical performance verification, authenticated the mutation frequency of 0.47% to be the limit of detection and verified that there is no false positive nor false negative regardless of interfering substances. Also tested for the expiration date and confirmed the validity of the product's performance for 6 months when stored at appropriate temperature.
2.Droplex PIK3CA kit (RUO)
- Completed the development of Droplex PIK3CA kit (RUO) prototypes through optimization studies of the PIK3CA gene mutation types, ddPCR primer, and probes.
- Through analytical performance verification, authenticated the mutation frequency of 0.35% to be the limit of detection and verified that there is no false positive nor false negative regardless of interfering substances. Also tested for the expiration date and confirmed the validity of the product's performance for 6 months when stored at appropriate temperature.
- Applied for patent for 'Components for detecting PIK3CA mutations and kits containing them'
- Technology transfer of PIK3CA mutation RUO kit to Gencurix
3. GenoCTC Profiling kit_HER2 (RUO)
- Established an immunocytochemistry methodology to verify the overexpression of HER2 gene in circulating tumor cells (CTCs).
- Established the optimal DNA amplification protocol for CTC through comparative analysis of 3 different DNA amplification kits; verified that mutations can be detected from CTC DNA when the sample purity is above 5%.
- Developed GenoCTC Profiling kit_HER2 (RUO) prototype
- Confirmed the efficiency of the GenoCTC Profiling kit_HER2 (RUO) using clinical samples.
4. Established the production process of Droplex PIK3CA, ESR1 GMP.
5. Verified the protocol for analytical and clinical performance for FDA approval.

< Expected Contribution >
- The resistance-related gene ddPCR diagnosis kit (Droplex PIK3CA, Droplex ESR1), which can track the effectiveness of hormone therapy in patients with advanced, estrogen receptor (ER)-positive breast cancer, will be approved by the Ministry of Food and Drug Safety after clinical trials, and will be put into the breast cancer diagnosis market.
- In addition, these products can be developed from liquid biopsy for hormone therapy resistance-related genetic diagnosis, making it highly likely to be used in future diagnostic and follow-up studies.

(source: SUMMARY 5p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 보고서 요약 ... 2
• 제출문 ... 14
• 보고서 요약서 ... 16
• 국문 요약문 ... 17
• SUMMARY ... 18
• 목차 ... 19
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 21
• 1-1. 연구개발 목적 ... 21
• 1-2. 연구개발의 개요 ... 22
• 1-3. 연구개발의 중요성 ... 29
• 1-4. 연구개발의 창의성·혁신성 ... 35
• 2. 국내외 기술개발 현황 ... 36
• 2-1. 국내·외 액상생검 시장 현황 ... 36
• 2-2. 국내·외 액상생검 제품 현황 ... 37
• 2-3. 국내·외 정부 정책 현황 ... 38
• 2-4. 에스트로겐수용체 양성 유방암 환자에서의 순환종양세포의 연구 현황 ... 39
• 3. 연구수행 내용 및 결과 ... 40
• 3-1. 연구개발 추진체계 ... 40
• 3-2. 연구개발 결과 ... 40
• 3-3. 사업화 계획 ... 72
• 3-6. 연구개발성과 ... 78
• 4. 목표달성도 및 관련분야 기여도 ... 79
• 4-1. 목표달성도 ... 79
• 4-2. 관련분야 기여도 ... 80
• 5. 연구결과의 활용계획 ... 81
• 5-1. 건강진단 및 치료 등의 응용 ... 81
• 5-2. 연구 종료후 3년 이내 연구성과 계획 ... 82
• 6. 연구과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 83
• 6-1. 해외 ESR1, PIK3CA 돌연변이 검출 제품 현황 ... 83
• 6-2. 순환종양세포·DNA 분리 및 분자진단용 제품 현황 ... 83
• 7. 연구개발성과의 보안등급 ... 84
• 8. 국가과학기술종합정보시스템에 등록한 연구시설·장비 현황 ... 85
• 9. 연구개발과제 수행에 따른 연구실 등의 안전조치 이행실적 ... 85
• 9-1. 실험실 안전점검 ... 85
• 9-2. 실험실 안전교육 ... 85
• 10. 연구개발과제의 대표적 연구실적 ... 85
• 11. 기타사항 ... 85
• 12. 참고문헌 ... 86
• 끝페이지 ... 87