초록 ▼

□ 연구개요
RNA결합단백질인 PUF protein family의 특이점은 target mRNA의 3’UTR 또는 5‘UTR에 sequence-specific하게 결합한다는 것과 mRNA localization과 전사후조절에 작용한다는 점이다. 본 연구팀은 선행연구에서 Puf6가 효모의 Ste12 전사인자의 생성을 repression하며 5’UTR의 Puf6-binding sequence에 의함을 밝혔고, 본 연구에서는 1) STE12 및 TEC1 target mRNA를 대상으로 PUF family의 mRNA 위치조절과 단백질

□ 연구개요
RNA결합단백질인 PUF protein family의 특이점은 target mRNA의 3’UTR 또는 5‘UTR에 sequence-specific하게 결합한다는 것과 mRNA localization과 전사후조절에 작용한다는 점이다. 본 연구팀은 선행연구에서 Puf6가 효모의 Ste12 전사인자의 생성을 repression하며 5’UTR의 Puf6-binding sequence에 의함을 밝혔고, 본 연구에서는 1) STE12 및 TEC1 target mRNA를 대상으로 PUF family의 mRNA 위치조절과 단백질생성에서의 기능 분석 2) target mRNA – PUF 단백질 – cofactor 간의 상호작용을 통한 단백질생성조절에서의 기능 연구를 목표로 수행하였음.

□ 연구 목표대비 연구결과
1. PUF protein의 STE12 target-mRNA에 대한 위치조절과 단백질생성 기작 분석
- PUF4,5,6 유전의 deletion 돌연변이 효모균주를 제조하였고, filamentous growth 연구에 적합한 Σ1278b 균주배경에서 이배체 puf5Δ/Δ와 puf6Δ/Δ 돌연변이주 제조.
- PUF4,5,6 의 Ste12 및 Tec1 단백질생성에서의 기능 확인. Haploid mating 조건과 다른 filamentation조건에서의 기능 확인
- Nuclear periphery로의 STE12 및 TEC1 mRNA의 localization 확인
- Puf6와 Puf5가 STE12 와 TEC1 mRNA의 핵주위로의 위치 결정에 관여한다는 결과
- Filamentarion 유도조건인 SLAD media에서 STE12 및 TEC1 mRNA의 위치를 확인하였고 Puf6와 Puf5의 조절 기능을 분석함
2. Target-mRNA 특이적 RNA-binding complex 분석과 이들의 세포조절에서의 기능 연구
- RNA granules 구성원인 Dhh1과 Puf 단백질의 상호관계 분석. dhh1Δ/Δ 돌연변이주는 PUF 돌연변이주와는 다른 양상을 보임.
- Puf6와 Dhh1 RNA helicase와의 complex 형성에 FUS3와 TPK2 protein kinase가 관여함을 보임
- PUF5와 PUF4의 이중돌연변이 제조를 통한 상호관계 분석

□ 연구개발성과의 활용 계획 및 기대효과(연구개발결과의 중요성)
- Cancer, stem cell, neuronal development 등에서의 PUF 단백질의 작용 기전에 본 연구의 결과를 활용. 특히 단백질 생성과 mRNA decay pathway 조절에 중요 기전을 제시.
- 최근 급격히 대두되고 있는 mRNA의 세포내 organelle-tageting 주제 연구에 중요한 예시를 제공할 수 있음. 주요 전사인자들의 NLS 기반의 핵이동 외에도 mRNA의 위치결정이라는 새로운 연구방향을 제시.
- PUF protein family에 속하는 7개 단백질의 기능연구로 확대 가능
- 단백질 및 RNA 위치결정 기술 선진화
- RNA의 분자유전학적 세포유전학적 분석 기술

(출처 : 연구결과 요약문 2p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 연구결과 요약문 ... 2
• 목차 ... 3
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 4
• 1) 연구의 목적 및 필요성 ... 4
• 2) 연구의 범위 ... 4
• 2. 연구개발과제의 수행 과정 및 수행 내용 ... 5
• 1) PUF4,5,6 유전자 deletion 돌연변이에서의 Ste12 단백질 발현양상 ... 5
• 2) Σ1278b strain background에서 이배체 PUF4,5,6 유전자 deletion 돌연변이를 제조 ... 5
• 3) 이배체 돌연변이주 puf5Δ/Δ와 puf6Δ/Δ에서 Ste12-HA 및 Myc-TEC1 단백질 양상 ... 6
• 4) Nuclear periphery로의 STE12 및 TEC1 mRNA의 localization ... 7
• 5) puf5Δ/Δ와 puf6Δ/Δ에서 STE12 및 TEC1 mRNA의 localization 조사 ... 7
• 6) Filamentous growth 신호전달 조건에서의 PUF6와 PUF5의 기능 분석 ... 8
• 7) PUF와 RNA helicase인 DHH1과의 관계 분석 ... 8
• 8) PUF5와 PUF4의 이중돌연변이 제조를 통한 상호관계 분석 ... 10
• 3. 연구개발과제의 수행 결과 및 목표 달성 수준 ... 10
• 1) 정성적 연구개발성과(연구개발결과) ... 10
• 2) 세부 정량적 연구개발성과 ... 11
• 3) 목표 달성 수준 ... 11
• 4) 목표 미달 시 원인 분석 ... 11
• 4. 연구개발성과의 관련 분야에 대한 기여 정도(연구개발결과의 중요성) ... 11
• 1) 학문적 측면 ... 11
• 2) 기술적 측면 ... 11
• 5. 연구개발성과의 관리 및 활용 계획 ... 12
• 1) 성과 관리 추진체계 ... 12
• 2) 활용 계획 ... 12
• 6. 자체점검표 ... 12
• 7. 참고문헌 ... 12
• [붙임1] 세부 정량적 연구개발성과 ... 14
• [붙임2] 연구책임자 대표적 연구실적 및 증빙(요약문 및 사본) ... 16
• 끝페이지 ... 19