[보고서]세포내/외 미세환경 조절 기반 차세대 줄기세포 치료시스템 개발

박윤정

세포내/외 미세환경 조절 기반 차세대 줄기세포 치료시스템 개발
Development of next generation stem cell therapeutic system by the innovative technology for intra/extracellular microenvironment control 원문보기

보고서 정보
주관연구기관	서울대학교 Seoul National University
연구책임자	박윤정
보고서유형	최종보고서
발행국가	대한민국
언어	한국어
발행년월	2022-06
주관부처	과학기술정보통신부 Ministry of Science and ICT
등록번호	TRKO202300013356
DB 구축일자	2023-10-31
키워드	환자유래 역분화줄기세포.줄기세포 분화효율.치료용 약물스크리닝 기술.줄기세포 품질관리.미세환경모사 바이오소재 지지체.근골격계 질환 동물모델.Patient derived iPSCs.Efficiency of stem cell differentiation.Therapeutic drug screening technology.Stem cell quality control.micro-environment mimicking biomaterial scaffold.Musculoskeletal disease animal model.

초록 ▼

□ 연구개발 목표
본 연구는 환자유래 역분화줄기세포기반 치료용 약물 스크리닝 기술 개발 및 줄기세포 분화 효율 최적화를 통한 줄기세포의 목적조직으로의 고효율 분화유도 시스템을 확립함과 동시에, 실시간 세포추적 및 체내거동 제어기술 기반 신개념 줄기세포 품질관리 시스템을 구축 및 질환 동물모델에서 유효성을 검증하여 줄기세포 치료의 효능을 극대화하고 비임상 안전성을 확보하고자 함. 또한 줄기세포 치료제 안전성을 확보할 수 있는 펩타이드 및 펩타이드 유도체 함유 스마트 바이오소재 지지체를 제공하여 이식 적응력 및 부작용을 억제하는 줄기세포 치료기술을 제공하고, 대량생산 및 실용화 연구를 통해 국제경쟁력을 갖춘 차세대 줄기세포 기반 조직재생 치료의 원천기술확보를 목표로 함. 이를 통해 궁극적으로는 줄기세포 활용을 통한 삶의 질 및 국민 건강 증진에 이바지하고자 함.

□ 연구개발 내용
< 1세부 > 줄기세포 치료제 효율 최적화를 위한 기능성생리활성물질 및 스마트바이오소재 개발
○ 비바이러스성 세포 리프로그래밍 조절 펩타이드 및 펩타이드 유도체 등을 이용하여 환자유래 feeder-free iPSCs 확립 및 이를 기반으로 치료용 약물 스크리닝 기술 개발
○ 줄기세포 분화 및 목적 조직 재생, 이식적응력 향상 및 부작용 억제 관련 펩타이드 및 펩타이드 유도체 발굴
○ 목적 질환의 미세환경구조 모사기반 다양한 형태의 바이오소재 지지체 개발 및 적용 최적화, 유효성 확인하여 신개념 줄기세포 치료 시스템 확보
○ 신개념 줄기세포 치료 시스템 및 스마트바이오소재 지지체의 대량생산 및 상용화 연구

< 2세부 > 편도유래 줄기세포에서 근골격계 재생을 위한 세포 분화기술 확립 및 유효성 분석
○ 펩타이드 등의 고효율 분화유도 물질 발굴 및 적용으로 편도유래줄기세포의 목적 조직(골/근육 세포 및 부갑상선호르몬분비세포)으로의 고효율 분화 유도 시스템 확립
○ 분화된 편도줄기세포-세포운반체 및 타세부에서 도출한 줄기세포 치료 시스템의 질환 동물모델(예: 골결손, 근육손상)에서의 안전성 및 유효성 평가
○ 부갑상선호르몬 분비세포의 질환 동물모델(예: 골다공증)에서의 작용기전 연구 및 안전성과 유효성 분석하여 임상적용 가능성을 평가

< 3세부 > 조직재생 치료제로서 줄기세포의 실용화를 위한 비임상 안전성 확보 및 정도관리 시스템 개발
○ 실시간 세포추적 시스템 및 줄기세포 체내 거동 제어기술 기반 신개념 줄기세포 품질관리 플랫폼을 개발하고, 메커니즘 규명과 효능검증을 통한 최적화된 프로토콜 수립 및 안전성 확보
○ 타세부에서 도출한 줄기세포 치료 시스템의 생물학적 안전성 평가

< 4세부 > 근골격계 질환 동물 모델 이용하여 줄기세포치료제 후보군 유효성 검증
○ 근골격계 희귀질환 환자 검체 및 임상 정보 확보 및 제공
○ 타세부에서 도출한 줄기세포 치료 시스템의 질환 동물모델(예: 골결손, 근육질환)에서 유효성 평가
○ 희귀질환 동물모델(예: 골형성부전증)에서 신약후보물질의 유효성 평가

□ 활용계획 및 기대효과(응용분야 및 활용범위 포함)
○ 산업적 측면
- 환자맞춤형 치료용 약물스크리닝 기술을 제공함으로써 향후 신약개발에 들어가는 천문학적 비용을 낮추면서도 임상적용이 가능성이 더 높은 신약을 고효율로 스크리닝할 수 있음.
- 기능성 펩타이드 및 펩타이드 유도체는 다양한 조직재생치료는 물론 기존의 바이오소재, 의료기기 등의 표면에도 적용 가능하므로 향후 신약 뿐 아니라 신개발 의료기기 개발로 이어질 수 있음.
- 줄기세포 품질관리 시스템 활용, 표준화 프로토콜을 제공하여 줄기세포 치료제 실용화에 기여.
○ 응용분야 및 활용범위
- 전 세계 근골격계 질환자, 장기 및 조직손상환자, 만성병 및 호르몬관련 질환자, 난치희귀질환 환자에 줄기세포치료기술을 적용 및 기존 줄기세포 치료제의 한계를 극복하여 미래의료기술 기반 확립
- 줄기세포 품질관리 시스템을 활용하여 향후 줄기세포 치료제의 과학적인 심사지표 마련 및 허가진입을 지원하기 위해 활용 가능

(출처 : 요약문 2p)

목차 Contents

표지 ... 1
요 약 문 ... 2
목차 ... 4
1. 연구개발 목표 및 평가항목별 성과 ... 5
1-1. 연구개발 목표 ... 5
1-2 평가항목별 성과 ... 7
2. 추진내용 및 연구개발결과 ... 22
2-1. 추진내용 및 연구개발결과 ... 22
2-2. 추진 일정 실적 ... 192
2-3. 연구개발성과의 관련 분야에 대한 기여정도 ... 201
2-4. 연구개발성과의 관리 및 활용 계획 ... 204
3. 연구 개발 결과의 활용 방안 ... 207
4. 당초 연구계획 대비 주요 변경사항 ... 209
끝페이지 ... 210

표/그림 (300)

표 펩타이드 (PEP-CARE 혹은 PEP-OSS) 발굴 및 유도체 구축 모식도
표 day별 MET 진행 모습과 생성된 iPSCs colony 모습
표 FACS를 이용한 population assay
표 ALP 염색을 통한 iPSCs colony 개수 확인
표 면역염색을 통한 pluripotency 마커 확인
표 PEP-CARE1, PEP-CARE2의 HDAC 억제능 확인
표 PCR을 통한 oct4와 twist1 발현 비교
표 ALP 염색을 진행한 Induced pluripotent stem cell (iPSC)
표 역분화 줄기세포의 체내/외 분화능 검증
표 확립된 단백질 대량 생산 시스템
표 다양한 조건의 전기천공 방법을 이용한 세포 내 DNA 전달
표 환자 혈액 유래 유도만능줄기세포의 확립 및 유전자 발현 특성 확인
표 환자유래 유도만능줄기세포의 마커 발현 및 체외 분화능 검증
표 COL1A1 CDS 및 sequencing 정보
표 COL1A2 CDS 및 sequencing 정보
표 SP7 CDS 및 sequencing 정보
표 골형성 부전증 연관 유전자 발현 비교
표 환자유래 유도만능줄기세포유래 중간엽줄기세포의 확립
표 환자유래 유도만능줄기세포유래 중간엽줄기세포의 특성 확인
표 환자유래 유도만능줄기세포유래 중간엽줄기세포의 골분화능 비교
표 환자유래 유도만능줄기세포 유래 중간엽줄기세포의 신약후보물질 처리 후 조골분화 양상
표 유도만능줄기세포의 분화 조건
표 유도만능줄기세포의 분화시 세포 관찰 및 골세포 분화 마커 발현
표 유도만능줄기세포의 골세포 분화 후 칼슘 염색 및 osteocalcin 발현 관찰
표 유도만능줄기세포의 골세포 분화 후 ALP 활성 관찰
표 환자유래 iPSCs 분화 조건 및 FACS 분석, qPCR을 통한 유전자 발현 분석
표 환자유래 iPSCs 분화조건 및 FACS 분석, qPCR을 통한 유전자 발현 분석
표 Alizarin red S 염색
표 군 별 DEXA 이미지 및 BMD 값
표 환자유래 유도만능줄기세포의 COL1A1, COL1A2 sequencing 정보
표 환자 혈액의 COL1A1, COL1A2 sequencing 정보
표 Transfection후 PCR 산물 확인
표 Oligo 서열을 이용한 sgRNA insert 합성 조성
표 gDNA 로부터 sgRNA와 Cas9 의 DSB 작용이 이루어진 부분을 확인하기 위한 PCR chemical 조성
표 Fusion Cas9을 이용하였을 시 cleavage efficiency 결과
표 High fidelity Cas9과 sgRNA를 개별적으로 이용하였을 시 cleavage efficiency 결과
표 High fidelity fusion Cas9을 이용하였을 시 cleavage efficiency 결과
표 환자 혈액 유래 유도만능줄기세포(OI-iPSC#2)의 특성 분석
표 추가 확보된 환자유래 유도만능줄기세포의 마커 발현 및 체외 분화능 검증
표 환자 혈액 유래 유도만능줄기세포(OI-iPSC#3)의 특성 분석
표 OI-iPSC#2 유래 중간엽줄기세포의 특성 분석
표 OI-iPSC#3 유래 중간엽줄기세포의 특성 분석
표 OI-iPSC유래 중간엽줄기세포의 조골분화 양상
표 O.I 환자 유래 iPSCs를 이용한 O.I 치료 후보물질의 효능 평가
표 발굴한 O.I 치료 후보물질의 메커니즘
표 골형성부전증 치료 후보약물 동물모델 실험 일정
표 골형성부전증 동물모델 16주 골 형성 Micro-CT 3D 및 2D 이미지: (a)-(d) 펩타이드 1 피하 부위 주입, (e) & (f) saline 피하 부위 주입, (g) & (i) 펩타이드 2 피하 주입
표 골형성부전증 동물모델 DXA 측정 결과 및 5~16주차 BMD 측정 그래프
표 형광이 탑재된 약물을 이용하여 체내 주입(iv, sc) 혈중 약물 농도 측정
표 피하주사를 통한 약물의 농도별 혈중 잔존량
표 도출된 펩타이드들의 세포투과결과 (좌) 펩타이드 처리를 통한 phospho array chip 및 분석한 scatter plot을 통해 세포투과 후 펩타이드에 의해 HDAC의 발현이 현저히 제어됨을 확인함
표 NF-κB p65 phosphorylation 확인을 위한 western blot 결과
표 PEP-CARE 및 그 유도체 처리 후 p65(NF-κB) western blot 결과
표 펩타이드 농도 별 염증성 사이토카인(IL-6)의 생성 비교
표 flow cytometry 결과를 통한 M1/M2 분극화 확인
표 ELISA 결과를 통한 pro-inflammatory cytokine 단백질 정량 확인
표 peptide 처리를 통한 HDAC5와 pSTAT1의 감소
표 in vitro IP assay(왼), in vivo 동물실험
표 PEP-CARE1 처리 후 연골세포 분화정도를 alcian blue과 PCR 염색을 통해 관찰
표 TMSC를 3차원 배양한 후 연골세포 분화정도를 Alcian blue 염색을 통해 관찰
표 ASC 및 BMMSC의 연골분화 및 펩타이드 처리 후 alcian blue 염색 비교
표 ASC 및 BMMSC의 연골분화 동안 펩타이드에 의한 연골세포 관련 유전자 발현
표 3차원 배양 후 연골분화 시 PEP-CARE3 및 PEP-CARE6 처리에 의한 연골세포 분화 정도를 alcian blue 및 면역 염색 정도 비교(좌: ASC, 우: TMSC)
표 3차원 배양 후 연골분화 시 PEP-CARE3 및 PEP-CARE6 처리에 의한 연골세포 관련 마커 발현 정도 비교(위: ASC, 아래: TMSC)
표 C2C12 분화 조건에 펩타이드를 처리한 결과
표 염증 조건 하에서 세포질 및 핵 내 HDAC 인산화 정도 관찰
표 PEP-CARE 및 유도체를 처리하였을 때 HDAC 인산화 정도 관찰
표 PEP-CARE를 기간별 처리 후 근육세포 분화정도를 PCR 및 western blot을 통해 관찰
표 PEP-CARE를 기간별 처리하였을 때 근육세포 분화정도를 면역염색을 통해 관찰
표 근육분화 후 실험군별 myotube 발현 관찰
표 근육분화 유도 후 MYH 단백질의 IF stain
표 실험군별 MRF4 및 myogenin mRNA 발현량을 Real Time-PCR을 통하여 확인
표 ASC의 근육분화 조건에서 펩타이드 간 마커 발현 비교
표 western blot 기법으로 확인한 근육분화 주요 마커의 발현 양상 (GM : growth medium, DM : differentiation medium)
표 Myoblast에서 myotube로 분화된 세포의 contraction
표 Myotube로 분화 후 KCl 용액을 처리했을 시 세포 수축 확인
표 myogenin 단백질에 대한 immunofluorescence 염색 결과 (NT :　not treatment, DM : differentiation medium, 파란색 : 핵, 빨간색 : myogenin)
표 발굴한 줄기세포 적응력 향상능 및 조직재생능 펩타이드 기전
표 펩타이드 처리 후 근육 분화 주요 마커 발현량 확인
표 펩타이드 처리 후 세포질과 세포 핵에서의 HDAC5 단백질량 확인
표 무릎연골세포의 염증반응 후 연골세포 마커 및 석회화, 염증 유전자 발현 관찰
표 무릎연골세포의 신호전달 단백질 관찰
표 무릎연골세포의 3차원 배양 시 염증반응 후 펩타이드 및 Enbrel 유전자 발현 관찰
표 펩타이드를 처리한 TMSC의 carbachol에 의한 수용체 신호(칼슘) 확인
표 펩타이드를 처리한 TMSC의 NECA에 의한 수용체 신호(칼슘) 확인
표 펩타이드를 처리한 TMSC의 prostaglandin E2에 의한 수용체 신호(칼슘) 확인
표 펩타이드를 처리한 TMSC의 vasopressin에 의한 수용체 신호(칼슘) 확인
표 시간별 펩타이드의 생체내 주요 장기 분포
표 RA 유발 무릎에 펩타이드 주입 후 연골조직 변화 관찰
표 RA 유발 무릎에 펩타이드 주입 후 연골조직 내 TNFα 발현
표 염증 반응을 유도한 Raw264.7 세포에 펩타이드 처리 후 염증관련 인자 단백질 확인
표 Safranin O 염색 및 IL-6 면역염색
표 골재생용 천연고분자-미네랄 복합　지지체
표 천연고분자-미네랄 복합　지지체 단면의 SEM 이미지 및 FT-IR 결과
표 수화 전(a)후의 성상(b) 및 힘을 가하였을 때의 조작성(c)
표 펩타이드-미네랄 복합 지지체의 용출결과 및 세포 배양 후 SEM 이미지
표 방향성 섬유구조 쉬트의 미세구조 (a) x250, b)x1,000, c)10,000 배율)
표 동물 수준에서 스마트 바이오소재 골재생능 평가. 아무것도 이식하지 않은 실험군(a), 시판중인 이식재(b), 그리고 제작한 스마트 바이오소재(c)를 defect에 이식 후 4주 뒤 defect 부위의 골재생 정도를 H&E stain을 통하여 확인함.(OB: old bone, NB: new bone, CT: connective tissue)
표 가토의 두개골 defect의 스마트바이오소재, 시판중인 이식재(positive control), 그리고 아무것도 이식하지 않은 그룹(negative control)간 재생된 신생골 및 결합조직 면적
표 스마트바이오소재 이식 후 체내 생분해성 확인(OB: old bone, NB: new bone, CT: connective tissue, M: matrix 스마트바이오소재)
표 800, 1600 nm 나노패턴 몰드
표 Nanopattern 몰드를 사용하여 PDMS로 모사한 표면 관찰
표 AFM으로 분석한 PDMS 나노구조 모사체
표 펩타이드를 재료 표면에 도입하기 위한 화학적 수식 모식도
표 펩타이드에 maleimide를 결합 후 순도 및 분자량 분석
표 펩타이드에 maleimide를 결합 후 FT-IR 분석
표 Maleimide가 결합된 펩타이드를 glass에 고정 후 정량
표 다양한 비율의 peptide 및 TA 비율로 제작한 nanocomplex 크기 비교
표 펩타이드 nanocomplex를 콜라겐 코팅 평면 및 탈세포 지지체에 부착시켰을 때 SEM 관찰
표 나노구조가 도입된 표면에 배양한 C2C12 세포 모양 변화 관찰
표 나노구조가 도입된 표면에 TMSC 배양 후 세포 모양 변화 관찰
표 편도줄기세포를 하이드로젤 내 배양 후 생존률 관찰
표 세포의 골분화 정도를 확인하기 위해 Osteocalcin 항체를 이용한 IF 염색 결과
표 기간별 스마트 바이오소재-줄기세포의 칼슘 침착 정도
표 단계별 encapsulation 모습. alginate를 CaCl2에 떨어뜨린 후 gel을 형성(a). 이후 PLL 용액에서 코팅(b)을 한 후 heparin 용액에서 코팅(c)을 진행한 다음 liquidification을 진행한 capsule(d)을 확인함.
표 Encapsulation 된 세포를 7일간 배양 후 trypan blue로 염색한 뒤 세포 상태를 확인함.
표 PTH 분비 세포 탑재 capsule을 체내 주입하여 효능확인
표 펩타이드가 포함된 콜라겐 나노시트의 세포독성 결과
표 펩타이드가 포함된 콜라겐 나노시트의 감작성 시험 결과
표 마우스의 무게변화 양상
표 펩타이드가 포함된 콜라겐 나노시트의 자극성 시험 결과
표 펩타이드가 포함된 콜라겐 나노시트의 Ames test 결과
표 펩타이드가 포함된 콜라겐 나노시트의 근육이식 시험 결과
표 수화젤 내에서 세포 모습과 GRP78 단백질의 변화량 확인
표 micro-CT를 이용한 두개골 결손모델에서의 TMSC 탑재 콜라겐 수화젤의 조직재생 및 독성 확인
표 TMSC 탑재 콜라겐 수화젤 이식 동물모델의 조직 절편의 H&E 염색 및 MT 염색사진
표 콜라겐 젤에 탑재된 펩타이드의 방출 시험 결과
표 성견에서 치주염 유도 시 확인되는 임상 사진 및 방사선 사진
표 성견 치주염 모델에서 항염능 펩타이드 탑재 콜라겐 젤의 효능 평가를 위한 micro-CT 촬영 및 H&E 조직 염색
표 편도에서 분리 및 확보된 세포의 MSC로써의 특성을 조사. A. MSC의 positive (CD73,CD90, CD105)와 negative (CD14, CD34, CD45) 발현 확인. B. TMSC의 골, 연골, 그리고 지방 분화로의 특징 확인.
표 편도줄기세포의 근육세포로의 분화과정.
표 분화된 근육세포의 conditioned medium (CM)을 모아 Cytokine Array로 분석 결과.T-MSC, tonsil-derived mesenchymal stem cell; GM, growth medium; MYOCYTE, T-MSC-derived myocyte; DM, differentiation medium; 1W, 1 weeks after myogenic differentiation; 2W, 2 weeks after myogenic differentiation.
표 편도줄기세포 유래 근육세포에서 분비가 증가된 cytokine의 세포내 유전자 발현. 그림의 caption은 그림 8과 같음.
표 TMSC를 각각 100 ng/mL의 Activin A와 Shh로 PTH 분비세포로 7일 동안 분화시킨 후 (A) Immunofluorescence (GFP: PTH, Dappi: Nucleus) (B) 분화 후 High (1.5 mM), Normal (0.9 mM), or Low (0.5 mM)의 외부 칼슘농도를 가진 미분화 배양액에서 7일 그리고 14일 동안 연 이어 배양한 후 Western blotting을 통한 PTH 단백질 발현양 측정 결과.
표 TMSC를 Activin A와 Shh의 농도를 달리하여, PTH 분비세포로 7일간 분화시킨 뒤 PTH 단백질 발현양 확인 결과.
표 PTH를 100 ng/mL (1), 50 ng/mL (1/2), 10 ng/mL (1/10), or 2 ng/mL (1/50)의 Activin A와 100 ng/mL의 Shh를 배양액에 첨가하 여 PTH 분비세포로 7일간 분화한 뒤 단백질 발현양 조사 결과. (A) PTH, (B) CHGA
표 (A) 펩타이드 4를 TMSC에 농도별 (10 uM~1 pM)처리하여, 골분화를 촉진시킨 후, 칼슘 침착도를 대조군과 비교한 결과. (B) 100 pM의 펩타이드 4로 TMSC의 골분화를 14일 동안 촉 진시킨 후 칼슘 침착도와 ALP activity를 대조군 비교한 결과.
표 TMSC를 사용하여, 펩타이드 4의 골분화에 대한 유도/촉진 효과 조사.
표 배양접시에서 분화된 TMSC-myocyte의 펩타이드 첨가 효과
표 분화기간 연장에 따른 T-MSC-myocyte의 세포융합비율의 증가
표 TMSC-myocyte의 기능성 골격근세포로의 분화능의 확인 (A) Real-time PCR을 이용한 AchR유전자의 발현 증가를 확인 (B) Western blotting을 이용한 AchR와 GLUT4단백질의 발 현 증가를 확인(C) 면역형광염색을 통한 AchR단백질의 세포 내 발현 학인
표 분화기간 연장에 따른 TMSC-myocyte의 AchR와 GLUT4의 발현 증가. A. 웨스턴블랏팅 을 통한 AchR와 GLUT4발현의 변화 확인: (1) TMSC, (2) TMSC-myoblast, (3) TMSC-myocyte 2w, (4) TMSC-myocyte 3w, (5) TMSC-myocyte 4w. B. 면역형광염색을 통한 AchR발현의 확인: Green (acetylcholine receptor, AchR); Blue (DAPI)
표 Insulin첨가에 따른 TMSC-myocyte에서의 GLUT4의 발현 증가. A-D. 웨스턴블랏팅을 통 한 GLUT4와 관련 신호전달물질의 단백질 발현: None (무처리군); Insulin (인슐린 첨가군). E. 면역형광 염색을 통한 GLUT4 발현의 확인: Green (Glucose Transporter Type 4, GLUT4); Blue (DAPI); x200. F. Insulin signaling pathway leading to GLUT4 translocation in muscle.
표 PAX7의 발현을 통한 줄기세포의 근육세포로의 잠재성 확인 (A) TMSC: 미분화 세포에서 발현하다가 분화 후 발현이 소멸 됨 (B) AdMSC: 분화 전/후 세포에서 모두 발현율이 매우 낮거나 비특이적 발현을 나타냄.
표 편도유래줄기세포와 지방줄기세포의 골격근세포로의 분화능 비교. Dystrophin, MHC, α-SMA: 근육세포 마커. α-Actinin, Myogenin: 골격근세포 특이적 마커. 편도유래줄기세포유 래 골격근세포, TMSC-myocyte; 지방줄기세포유래 골격근세포, AdMSC-myocyte; : Pax7, paired box protein 7; MHC, myosin heavy chain; α-smooth muscle actin, α-SMA
표 골지지체에 혼입하기전 편도 줄기세포의 배양조건에 따른 골형성 유전자 발현 분석결과
표 1×106의 TMSC를 HA:DMEM의 비율을 1:1 (total 200uL) 그리고 1:2 (total 300 uL)로 혼합하 여 (A) 세포와 HA의 혼합력을 현미경으로 관찰한 결과. (B) 섞은 혼합물을 쥐의 피하에 주사한 뒤, 다음날 쥐의 피하에 주사된 혼합물을 빼내어 형태와 보존도를 관찰한 결과.
표 A. 1×106의 PTH분화 그리고 미분화 TMSC를 Alginate-based scaffold에 enscapsulation 한뒤, 16G 니들로 주입한 후 확 인결과 B. 분화/미분화 TMSC의 alginate-based scaffold와 미분화/분화 scaffold-free spheroid 로 제작한 뒤, 7일동안 DMEM에 culture하여, live (calcein) & death (ethidium homodimer) 를 사용하여 확인한 결과. C. scaffold와 spheroid를 주사한 위치와 D. 각각의 지지체를 사용한 PTH분비 TMSC를 마우스에 이식한 뒤 12주 뒤 지지체의 남아있는 여부를 확인한 결 과.
표 마이크로어레이 분석 전, 엑소좀 추출에 사용된 세포들. 화살표: myotube형태, 다핵세포를 가리킴.
표 근육으로의 분화가 진행됨에 따라 발현이 증가하는 miRNA의 근육관련 카테고리 별 선별
표 대퇴부의 Micro-CT 촬영 결과.
표 분화된 편도줄기세포 유래 부갑상선분비세포 A. 유전자 및 B. 단백질 발현 분석결과. C7 D7 & D14, 7 and C14 days after differentiation with differentiation medium
표 편도줄기세포 유래 부갑상선분비세포의 유효성 평가. C7과 D7실험군의 세포를 저농도 (L)와 고농도(H)의 칼슘(Ca2+)에 노출시켜 부갑상선분비 조절이 가능한지 확인.
표 이식용 TMSC-myocyte의 RFP 발현 확인. A. RFP가 tagging된 TMSC (TMSC-RFP) B. TMSC-RFP로부터 근육세포로 2주 분화 (TMSC-RFP-myocyte 2w) C-D. TMSC-RFPmyocyte 4w
표 이식용 TMSC-RFP-myocyte의 근육세포로의 분화 확인. A. TMSC-RFP-myocyte의 근 육관련 유전자 발현: a, TMSC-RFP; b, TMSC-RFP-myocyte; c, hSKM B. 웨스턴블랏팅 기 법을 통해 근육세포로의 4주 분화 동안의 α-SMA의 발현을 RFP의 tagging 전 후 확인 C. B의 그림을 수치화함.
표 이식용 TMSC-RFP-myocyte의 근육세포로의 분화 확인: Blue (DAPI); Green (myosin heavy chain 8, MYH8); Red (RFP) x200.
표 TMSC-RFP-myocyte의 이식을 위한 준비. A. mdx 마우스의 확인 B. 이식 방법과 일정
표 TMSC-RFP-myocyte이식 받은 mdx마우스의 치료효과 확인 A. rotarod test B. foot printing test: wild type (W/T), sham (PBS만을 이식한 그룹), TMSC-RFP-myocyte (PBS와 세포를 이식한 그룹)
표 TMSC-RFP-myocyte이식 받은 mdx마우스 근육조직의 골격근 관련 단백질의 발현 Blue (DAPI); Red (Dystrophin, Titin, MHC) x200.
표 TMSC-RFP-myocyte를 이식한 mdx마우스 근육조직의 H Left, 왼쪽 비복근
표 분화 그리고 미분화된 TMSC 주사를 경 골 근위부로 직접 투여 받은 쥐군들의 첫 투여 12주 후 혈청 OCN과 ALP농도. (n=10 for normal, no treatment, rhPTH groups; n=5 for TMSC groups.)
표 분화 그리고 미분화된 TMSC injection를 경골 근위부로 직접 투여받은 쥐군들의 첫 투 여 12주 후 혈청 칼슘과 인의 농도. (n=10 for normal, no treatment, rhPTH groups; n=5 for TMSC groups.)
표 양성대조군 그리고 T-MSC의 주사를 받은 실험군들의 대퇴골 Micro-CT결과 그리고 대퇴골의 BMD와 BV/TV의 결과.
표 분화 그리고 미분화된 TMSC 주사를 경골 근위부로 직접 투여 받은 쥐군들의 첫 투여 12주 후 혈 청 OCN과 ALP농도. (n=10 for normal, no treatment, rhPTH groups; n=5 for TMSC groups.)
표 여러 Donor에서 온 TMSC를 Activin A 100ng/mL+Shh100ng/mL를 7일간 처리하여 분화시킨 뒤, Western blotting으로 PTH의 단백질 정량 결과. A. 기존에 사용하던 TMSC와 최근에 획득한 TMSC의 부갑상선호르몬 분비세포로 분화시켜 비교한 결과. B. 최근에 구한 2개의 TMSC를 부갑상성호르몬 분 비세포로 분화시켜 비교한 결과. C. B에서 한 같은 조건으로, Donor#1의 부갑상선 호르몬 분비세포로 의 분화시 PTH의 단백질을 다시 한번 확인해본 결과.
표 Donor#1의 TMSC를 1.2x10^6/concave plate (384wells)에 심어서 7일동안 분화 시켜, 3D spheroid를 제작한 결과. A. 7일간 미분화/분화 배지에 배양한 세포들의 형태. B. Western blotting을 사용한 PTH의 단백질 정량결과.
표 난소절제술 (ovariectomy; OVX)을 하여, 골다공증모델 제작의 유효성에 대해 검증함 (OVX = ovariectomized mice, Sham = 대조군). A. Weekly weight gain, B. plasma concentration of osteocalcin (OCN), C. MicroCT analyses of femur head; bone mineral density (BMD)　and bone volume (BV) /total volume (TV) percentage ratio
표 TMSC유래 미분화 그리고 PTH분비세포를 Alginate-based scaffold와 shperiod로 지지체를 제작하여 마우스의 등에 이식한 뒤 12주 후에 이식된 부위를 관찰한 결과.
표 난소절제술(ovariectomy; OVX)을 통하여 제작된 골다공증 마우스 모델에 미분화/분화 TMSC를 제 작된 세포운반체(alginate vs scaffold-free spheroid)를 통하여 피하에 이식하고 12주 뒤에, A. average daily gain (ADG), B. serum PTH, C. serum OCN, D. serum inorganic phosphate를 확인한 결과. Sham (non-OVX), Estrodiol (100 ng/mL of E2/daily), rhPTH (recombinant PTH/daily), cTMSC (미분화TMSC only), dTMSC (PTH분비 TMSC only), Alginate Only, Alg-cTMSC (cTMSC encapsulated in alginate scaffold), Alg-dTMSC (dTMSC encapsulated in alginate scaffold), sp-cTMSC (cTMSC spheroids), sp-dTMSC (dTMSC spheroid). n=3~5 for each group.
표 난소절제술(ovariectomy; OVX)을 통하여 제 작된 골다공증 마우스 모델에 미분화/분화 TMSC 를 제작된 세포운반체(alginate vs scaffold-free spheroid)를 통하여 피하에 이식하고 12주 뒤에, microCT를 사용하여 A. bone mineral density (BMD)와 B. bone/total volume ratio를 확인한 결 과. Sham (non-OVX), Estrodiol (100 ng/mL of E2/daily), rhPTH (recombinant PTH/daily), cTMSC (미분화TMSC only), dTMSC (PTH분비 TMSC only), Alginate Only, Alg-cTMSC (cTMSC encapsulated in alginate scaffold), Alg-dTMSC (dTMSC encapsulated in alginate scaffold), sp-cTMSC (cTMSC spheroids), sp-dTMSC (dTMSC spheroid). n=3~5 for each group.
표 전류의 크기에 따른 hMSC의 이동 패턴 tracking 데이터
표 전류의 크기에 따른 hMSC의 migration 속도(A), 방향성(B)
표 전기자극 종료 후 hMSC의 이동 패턴 tracking 데이터
표 전기자극 종료 후 hMSC의 migration 속도(A), 방향성(B)
표 이동유도 전기자극 후 hMSC, ADSC, TMSC의 1, 3일 증식에 대한 MTT 분석
표 이동유도 전기자극에 따른 (A) hMSC, (B) ADSC, (C) TMSC
표 이동유도 전기자극에 따른 NHE3의 polarization에 대한 형광사진. (A)전기자극 없을 때, (B)1000 μA로 오른쪽으로 이동유도, (C)오른쪽으로 2시간 이동유도 후 골지체를 억제시키고 (BFA 2μM) 다시 왼쪽으로 이동 유도 (Blue: 세포핵, Green: 세포골격, Red: NHE3 마커)
표 Gene ontology database를 통한 분석
표 KEGG pathway analysis 결과(상위 20개 pathway, P<0.001)
표 줄기세포 품질관리를 위한 (A)전기자극 chamber 구성, (B)현미경에 장착된 chamber의 단면도
표 세포이동 분석 원리
표 전기자극에 의한 세포이동 분석 결과
표 추적시간 간격에 따른 hMSC의 migration speed와 directedness (mean ± SD)
표 줄기세포와 분화 14일 후 세포의 평균 속도와 x축 이동 속도
표 시딩 위치에 따른 줄기세포와 분화세포 구분 cut-off시간 예측
표 노화세포 정도 평가를 위한 전기자극-줄기세포 품질관리 효율성 검증
표 줄기세포의 passage별 (A) 세포증식, (B)β-galactosidase 염색, (C)β-galactosidase 활성, (D)노화 관련 단백질 발현 (# p<0.05 vs passage5, * p<0.05 vs passage10)
표 줄기세포 passage별 전기 자극을 주지 않은 경우와 전기 자극을 준 경우 anode(+)으로 움직인 세포와 cathode(-)으로 움직인 비율
표 전기 자극에 의한 줄기세포의 젊은 세포와 노화세포의 구분 원리
표 전극의 특징 및 전극의 종류에 따른 전압의 차이
표 electrode 종류(왼쪽부터 구리, 은, 백금(A), 전기자극 전 후 은판(B))
표 전극의 종류에 따른 ADSC의 migration 속도(A), 방향성(B)
표 전기자극의 의한 세포 이동 tracking 0h(A), 3h(B)
표 세포의 종류에 따른 세포길이 측정
표 세포이동의 직진성 유도를 위한 PDMS micro-chip design 모식도
표 Micro-chip 3D 도면. 전체적인 모양(A), track line(B), 세포 seeding 공간(C)
표 electrotaxis setting (A),(B)과 변경된 chamber 모식도(C)
표 chamber design에 따른 ADSC의 migration 속도(A), 방향성(B)
표 micro-chip 실물사진 micro-mold (A), PDMS micro-chip (B, C)
표 현미경으로 관찰한 실제 micro-chip seeding 공간(A),(B) track line (C),(D)
표 골분화 된 h-MSC. ALP assay(A)와 Alizarin Red Staining(B), 골 분화 된 ADSC. ALP assay(C)와 Alizarin Red Staining(D)
표 전기자극에 의한 골분화 된 ADSC의 migration 속도(A), 방향성(B), X-방향성 비율(C)과 비율 표(D)
표 전기자극에 의한 골분화 된 h-MSC migration 속도(A), 방향성(B), X-방향성 비율(C)과 비율 표(D)
표 전기자극에 의한 편도줄기세포 migration 속도(A), 방향성(B)
표 micro-chip에서의 편도줄기세포의 electrotaxis migration tracking 결과 control (A), electrotaxis(B), 세포이동 추적(C)
표 TMSC로부터 근육세포로 분화시키는 방법
표 분화방법을 이용한 분화세포의 myoblast marker 단백질의 발현
표 전기자극에 의한 TMSC와 myoblast분화된 세포의 migration 속도(A), 방향성(B)
표 전기자극에 의한 TMSC와 myoblast 분화된 세포의 전기주성에 의한 세포이동경로(A), 전기주성에 의한 방향성 비율(B)
표 전기자극시간에 의한 ADSC의 세포생존율 (A) MTT assay, (B) cell morphology,(C)Live/dead assay
표 3시간동안 전기자극이 노출된 후 전기자극 제거이후 ADSC의 세포이동 분석 (A) 세포이동경로 (B) 세포이동속도 (C) 세포이동 방향성
표 6시간 휴지기 이후 전기자극이 노출된 ADSC의 세포이동 분석 (A) 세포이동경로 (B) 세포이동속도 (C) 세포이동 방향성
표 전기자극 노출에 따른 ADSC의 golgi polarization (A) Immunoflurosence (Blue: 세포핵, Green: 세포골격, Red: golgi), (B) golgi polarization 비율
표 micro-channel chip(A)에서 전기자극에 의한 ADSC의 세포이동 방향성 측정(B)
표 groove microchannel에 전기자극이 가하는 표면의3D CAD 모델링.
표 plane 표면과 groove microchannel표면의 electrical potential simulation.
표 plane 표면과 groove microchannel표면의 flow velocity simulation.
표 fibronectin micropattern 제작 (A) PDMS stamp 제작 방법 (B) fibronectin stamping 방법
표 PDMS stamp로 제작된 fibronectin micropattern
표 PDMS stamp로 제작된 fibronectin micropattern위의 배양된 ADSC
표 다양한 높이의 microchannel에서 전기자극에 의한 세포이동 분석 (A) 세포이동 속도 (B) 세포이동 방향성 (C) 세포이동 방향성 비율 (D) 전기주성에 의한 세포이동
표 면역형광염색법을 이용한 TMSC의 myogenic 분화양상
표 Random electrotaxis에 의한 TMSC와 근분화 유도세포 간의 세포이동 속도 및 방향성 비교
표 micropattern electrotaxis에 의한 TMSC와 근분화 유도세포 간의 세포이동 속도 및 방향성 비교
표 random과 micropattern chip에서 전기자극에 의한 TMSC와 근분화에 따른 이동방향 및 경로 비교
표 줄기세포 순도관리 시스템의 개선 모형
표 RFP 형질주입 후 ADSC의 형광발현 확인 (scale bar = 1.0 mm)
표 RFP 표지한 ADSC의 형광신호 분석을 통한 세포 농도별 양상 확인
표 악성종양세포 양에 따른 종양형성 평가. (A)이식시간동안 이식부위 관찰사진 (B) 이식기간동안 면역저하동물모델의 무게변화측정 (C)이식기간동안 형성된 종양 크기변화 측정
표 이식부위의 관찰 및 종양형성정도 관찰 (A)이식부위 관찰사진 (B) 각 장기에서의 종양형성 관찰사진
표 폐, 간 장기의 조직 H&E염색
표 지지체와 함께 악성종양세포를 이식하여 종양형성 평가. (A)이식시간동안 이식부위 관찰사진 (B) 이식기간동안 면역저하동물모델의 무게변화측정 (C)이식기간동안 형성된 종양 크기변화 측정
표 RFP 표지한 TMSC의 세포 농도 및 지지체 유무에 의한 형광신호 양상 확인
표 RFP 표지한 골분화 유도세포의 형광신호 분석을 통한 세포분포 양상 확인
표 편도줄기세포와 분화 유도된 세포에 대한 핵형분석 검사 의견서((주)젠딕스)
표 ADSC로부터 골분화된 세포의 종양원성 부검 결과
표 펩타이드가 포함된 콜라겐 나노시트의 세포독성 결과
표 펩타이드가 포함된 콜라겐 나노시트의 감작성 시험 결과
표 마우스의 무게변화 양상
표 펩타이드가 포함된 콜라겐 나노시트의 자극성 시험 결과
표 펩타이드가 포함된 콜라겐 나노시트의 Ames test 결과
표 펩타이드가 포함된 콜라겐 나노시트의 근육이식 시험 결과
표 RFP 표지한 TMSC-collagen nano sheet 복합체의 체내 이식 후 형광발현 양상 확인
표 TMSC-collagen nano sheet 복합체의 피하이식 과정
표 TMSC-collagen nano sheet 복합체 피하 이식에 따른 무게변화 및 부검 결과
표 이식 피함, 폐, 간 장기의 조직 H&E염색
표 PCL 지지체, 발포릭산 탑재 나노입자 + PCL 지지체 (0.1 : 1) 및 발포릭산 탑재 나노입자 + PCL 지지체 (0.5 : 1) 주사전자현미경 이미지
표 나노입자 및 발포릭산 나노입자 제타전위
표 발포릭산 방출거동
표 PCL 지지체, 발포릭산 탑재 나노입자 + PCL 지지체 (0.1 : 1 = 1:10) 및 발포릭산 탑재 나노입자 + PCL 지지체 (0.5 : 1 = 1:2)에서 7 및 14일 골 분화 마커 확인을 실시간 연쇄중합반응기기 확인 결과
표 PCL 지지체, 발포릭산 탑재 나노입자 + PCL 지지체 (0.1 : 1 = 1:10) 및 발포릭산 탑재 나노입자 + PCL 지지체 (0.5 : 1 = 1:2)에서 7일 및 14일 알칼리성 포스파타제 활성도 결과
표 PCL 지지체, 발포릭산 탑재 나노입자 + PCL 지지체 (0.1 : 1 = 1:10) 및 발포릭산 탑재 나노입자 + PCL 지지체 (0.5 : 1 = 1:2)에서 14일 칼슘 침착도 결과
표 나노 입자 및 골 유도인자 탑재 나노입자 투과전자현미경 결과 및 나노입자 및 골 유도인자 탑재 나노입자 나노입자 사이즈 결과
표 나노 입자 함유 세포집합체 공초점 레이저 현미경 결과
표 알렌드로네이트 바출거동
표 (a)알칼리성 포스파타아제 활성도 (b) 칼슘 침착 결과
표 초기 골 분화 마커(RUNX-2 and ALP) 및 후기 골 분화 마커(osteocalcin and osteopontin)를 실시간 연쇄중합반응기를 이용하여 7일 및 21일 측정 결과
표 다공성 마이크로스피어 및 다양한 5-아자시티딘 농도 탑재 다공성 마이크로스피어 주사전자현미경 이미지
표 다공성 마이크로스피어 및 다양한 5-아자시티딘 농도 탑재 다공성 마이크로스피어에서 7, 14, 및 21일 근육 마커 확인을 실시간 연쇄중합반응기기 확인 결과
표 쥐 경골 5 mm 결손 모델 제작 후, PCL 지지체 삽입한 이미지
표 쥐 경골 5 mm 결손 모델 제작 후, 골 결손 only, PCL지지체, 미 분화 세포 + PCL 지지체 및 분화 세포 + PCL 지지체 삽입 후 단순 방사선사진 결과
표 골 결손 only, PCL 지지체, 미 분화 세포 + PCL 지지체 및 분화 세포 + PCL 지지체 삽입 8주 후 H&E 염색 결과
표 골 결손 only, PCL 지지체, 미 분화 세포 + PCL 지지체 및 분화 세포 + PCL 지지체 삽입 8주 후 Masson’s trichrome 염색 결과
표 쥐 경골 근육을 생검 펀치를 이용하여 5 x 6 x 5 mm 크기 근육 손실 동물 모델 구축
표 쥐 경골 근육을 생검 펀치를 이용하여 5 x 6 x 5 mm 크기 근육 손실 동물 모델 제작 후, 3차원 지지체 삽입 및 다공성 마이크로스피어 주입
표 쥐 경골 근육을 생검 펀치를 이용하여 5 x 6 x 5 mm 크기 근육 손실 동물 모델 제작 후, 지방유래줄기세포 (1 x 106) 주입함
표 쥐 경골 근육 손실 동물 모델에서 6주 H&E 염색 결과: (a) 정상군, (b) 근육손실 only 군, (c) 다공성 마이크로스피어 삽입군 및 (d) 지방유래줄기세포 삽입군
표 쥐 경골 근육 손실 동물 모델에서 6주 Masson’s trichrome 염색 결과: (a)정상군, (b) 근육 손실 only 군, (c) 다공성 마이크로스피어 삽입군 및 (d) 지방유래줄기세포 삽입군
표 쥐 경골 5 mm 결손 모델 제작 후, Aln/NPs를 함유하는 3 차원 배양줄기세포가 들어간 PCL 지지체를 삽입한 이미지
표 X-선 및 micro-CT 촬영 사진
표 다공성 마이크로스피어 및 다양한 5-Aza/PMSs 주사전자현미경 이미지
표 5-아자시티딘 방출거동
표 5-Aza/PMSs에서 7, 14, 및 21일 근육 마커 확인을 실시간 연쇄중합반응기기 확인 결과
표 쥐 경골 근육을 생검 펀치(biopsy punch)를 이용하여 5 x 6 x 5 mm
표 PCL 지지체, 발포릭산 탑재 나노입자 + PCL 지지체 (0.1 : 1) 및 발포릭산 탑재 나노입자 + PCL 지지체 (0.5 : 1) 주사전자현미경 이미지
표 PCL 지지체, 발포릭산 탑재 나노입자 + PCL 지지체 (0.1 : 1 = 1:10) 및 발포릭산 탑재 나노입자 + PCL 지지체 (0.5 : 1 = 1:2)에서 7 및 14일 iPSCs 마커 확인을 실시간 연쇄중합반응기기 확인 결과
표 유세포분석기(FACS)를 이용하여 PCL 지지체, 발포릭산 탑재 나노입자 + PCL 지지체 (0.1 : 1 = 1:10) 및 발포릭산 탑재 나노입자 + PCL 지지체 (0.5 : 1 = 1:2)에서 7, 14, 및 21일 간 배양하여 유도만능줄기세포 확인마커(TRA-1-60) 이용하여 유도만능줄기세포(iPSCs) 유도 확인
표 골 형성 물질인 이카린을 골형성부전증 동물 모델에 근육주사 하여 주입
표 (a)12주 간 체중 측정, (b) 골밀도 측정 결과
표 세부 Peptide를 골형성부전증 동물모델에 피하주사 하여 주입
표 DXA 측정 결과
표 (A-C) 순서대로 Saline, Peptide 1, Peptide 2 주입한 샘플을 H&E 염색한 사진 (D-F) 순서대로 Saline, Peptide 1, Peptide 2 주입한 샘플을 Masson‘s Trichrome 염색한 사진
표 골형성부전증 동물모델 16주 골 형성 Micro-CT 단면 이미지
표 골형성부전증 동물모델 16주 골 형성 X-ray 이미지: (a)-(d) 펩타이드 1 (200 μl, 40 mg/kg) 매일 피하 부위 주입, (e) & (f) saline 200μl 매일 피하 부위 주입, (g) & (i) 펩타이드 2 (200 μl, 20 μl/kg) 매일 피하 주입
표 DXA 측정 결과
표 골형성부전증 동물모델 5~16주차 BMD 측정 그래프
표 1 세부 Peptide를 골형성부전증 동물 모델에 피하주사 하여 주입
표 DXA측정 결과
표 나노입자, IBU (1 mg)/나노입자 및 IBU (5 mg)/나노입자의 투과전자현미경 이미지
표 나노입자, IBU (1 mg)/나노입자 및 IBU (5 mg)/나노입자의 사이즈 및 표면전위차 결과
표 세포집합체, 나노입자 함유 세포집합체, IBU (1 mg)/나노입자 함유 세포집합체 및 IBU (5 mg)/나노입자 함유 세포집합체 주사전자현미경 이미지
표 지질다당류 자극된 세포집합체에서 (a) MMP-3, (b) MMP-13, (c) COX-2, (d) ADAMTS-5, (e) IL-6 및 (f) TNF-α를 포함하는 염증성 사이토카인의 mRNA 발현 수준
표 토끼 아킬레스건에 콜라게네이즈 주입하여 아킬레스 건염 모델 제작방법
표 토끼 아킬레스건에 콜라게네이즈 주입하여 아킬레스 건염 유발 7일 후, 세포집합체, 나노입자 함유 세포집합체, IBU (1 mg)/나노입자 함유 세포집합체, IBU (5 mg)/나노입자 함유 세포집합체 및 IBU (5 mg) 함유 일반배지 배양된 세포집합체 주입 4주 후 H&E 염색 결과
표 토끼 아킬레스건에 콜라게네이즈 주입하여 아킬레스 건염 유발 7일 후, 세포집합체, 나노입자 함유 세포집합체, IBU (1 mg)/나노입자 함유 세포집합체, IBU (5 mg)/나노입자 함유 세포집합체 및 IBU (5 mg) 함유 일반배지 배양된 세포집합체 주입 4주 후 Masson’s trichrome 염색 결과
표 아킬레스건염 동물모델에서 콜라게네이즈 주입 1주부터 5주 및 실험군[세포집합체, 나노입자 함유 세포집합체, IBU (1 mg)/나노입자 함유 세포집합체, IBU (5 mg)/나노입자 함유 세포집합체 및 IBU (5 mg) 함유 일반배지 배양된 세포집합체] 주입 1주부터 4주에 매주 혈액을 분리하여 염증성 사이토카인(MMP-3, MMP-13, COX-2, ADAMTS-5, IL-6 및 TNF-α)의 mRNA 발현 수준
표 아킬레스건염 동물모델에서 콜라게네이즈 주입 1주부터 5주 및 실험군[세포집합체, 나노입자 함유 세포집합체, IBU (1 mg)/나노입자 함유 세포집합체, IBU (5 mg)/나노입자 함유 세포집합체 및 IBU (5 mg) 함유 일반배지 배양된 세포집합체] 주입 1주부터 4주에 매주 혈액을 분리하여 항 염증성 사이토카인(IL-4, IL-10 및 IL-13)의 mRNA 발현 수준
표 아킬레스건염 동물모델에서 콜라게네이즈 주입 5주 및 실험군[세포집합체, 나노입자 함유 세포집합체, IBU (1 mg)/나노입자 함유 세포집합체, IBU (5 mg)/나노입자 함유 세포집합체 및 IBU (5 mg) 함유 일반배지 배양된 세포집합체] 주입 4주에 아킬레스건 조직 분리하여 기계적 강도 측정
표 다공성 마이크로스피어 및 다양한 5-Aza/PMSs 주사전자현미경 이미지
표 PMSs 및 다양한 5-Aza/PMSs에서 7 및 14일 iPSCs 마커 확인을 실시간 연쇄중합반응기기 확인 결과

과제명(ProjectTitle) :	-
연구책임자(Manager) :	-
과제기간(DetailSeriesProject) :	-
총연구비 (DetailSeriesProject) :	-
키워드(keyword) :	-
과제수행기간(LeadAgency) :	-
연구목표(Goal) :	-
연구내용(Abstract) :	-
기대효과(Effect) :	-

내보내기 구분	파일저장 인쇄 메일전송
구성항목	기본정보 상세정보 관리번호, 제목(한글), 저자명(한글), 발행일자, 전자원문, 초록(한글), 초록(영문) 관리번호, 제목(한글), 제목(영문), 저자명(한글), 저자명(영문), 주관연구기관(한글), 주관연구기관(영문), 발행일자, 총페이지수, 주관부처명, 과제시작일, 보고서번호, 과제종료일, 주제분류, 키워드(한글), 전자원문, 키워드(영문), 입수제어번호, 초록(한글), 초록(영문), 목차
저장형식	Text(ASCII format) Excel format
메일정보	받는사람 (필수) @ 보내는사람 (선택) @ 제목 내용 KISTI 검색결과 이메일 서비스
안내	총 건의 자료가 검색되었습니다. 다운받으실 자료의 인덱스를 입력하세요. (1-10,000) 검색결과의 순서대로 최대 10,000건 까지 다운로드가 가능합니다. 데이타가 많을 경우 속도가 느려질 수 있습니다.(최대 2~3분 소요) 다운로드 파일은 UTF-8 형태로 저장됩니다. 파일의 내용이 제대로 보이지 않을실 때는 웹브라우저 상단의 보기 -> 인코딩 -> 자동선택 여부를 확인하십시오. ~ Text(ASCII format) Excel format

연합인증

세포내/외 미세환경 조절 기반 차세대 줄기세포 치료시스템 개발
Development of next generation stem cell therapeutic system by the innovative technology for intra/extracellular microenvironment control 원문보기

초록 ▼

목차 Contents

표/그림 (300)

표/그림 (300)

참고문헌 (25)

연구과제 타임라인

관련 콘텐츠

원문 보기

이 보고서와 함께 이용한 콘텐츠

AI-Helper ※ AI-Helper는 오픈소스 모델을 사용합니다.

선택된 텍스트

연합인증

세포내/외 미세환경 조절 기반 차세대 줄기세포 치료시스템 개발 Development of next generation stem cell therapeutic system by the innovative technology for intra/extracellular microenvironment control 원문보기

초록 ▼

목차 Contents

표/그림 (300) 모든 표/그림 보기

표/그림 (300) 슬라이드로 보기

참고문헌 (25)

연구과제 타임라인

전체(0) 논문(0) 특허(0) 보고서(0)

전체(0) 논문(0) 특허(0) 보고서(0)

관련 콘텐츠

원문 보기

이 보고서와 함께 이용한 콘텐츠

AI-Helper ※ AI-Helper는 오픈소스 모델을 사용합니다.

선택된 텍스트

세포내/외 미세환경 조절 기반 차세대 줄기세포 치료시스템 개발
Development of next generation stem cell therapeutic system by the innovative technology for intra/extracellular microenvironment control 원문보기

표/그림 (300)

표/그림 (300)