초록 ▼

□ 연구개발 목표 및 내용
○ 최종 목표
Ferritin 단백질을 발현하고 있는 Sf9 곤충세포를 Cryo-ET 촬영하여 Ferritin 의 세포내 구조 규명

○ 전체 내용
이번 연구에서는 정제하기 까다로운 세포질 단백질 구조 분석 방법을 제시하고자 한다. 타깃 세포질 단백질을 발현하는 세포를 cryo-ET 촬영을 통해 구조 분석할 계획이다. 이를 위해서는 적절한 세포주를 선정해야 한다. 대장균과 같은 원핵생물의 경우 핵산이 세포 전반에 퍼져 있어 타깃 세포질 단백질에 대한 cryo-ET 데이터 상의si

□ 연구개발 목표 및 내용
○ 최종 목표
Ferritin 단백질을 발현하고 있는 Sf9 곤충세포를 Cryo-ET 촬영하여 Ferritin 의 세포내 구조 규명

○ 전체 내용
이번 연구에서는 정제하기 까다로운 세포질 단백질 구조 분석 방법을 제시하고자 한다. 타깃 세포질 단백질을 발현하는 세포를 cryo-ET 촬영을 통해 구조 분석할 계획이다. 이를 위해서는 적절한 세포주를 선정해야 한다. 대장균과 같은 원핵생물의 경우 핵산이 세포 전반에 퍼져 있어 타깃 세포질 단백질에 대한 cryo-ET 데이터 상의signal이 떨어지고 noise가 너무 높아 구조 분석이 매우 힘들어 진다. Yeast의 경우 진핵 세포로 세포질 공간이 따로 있긴 하지만 세포가 작기 때문에 cryo-FIB에 이어 cryo-ET 를 촬영할 공간이 충분하지 않다. HEK 293, HeLa cell 과 같은mammalian cell의 경우 앞선 여러 연구 결과와 같이 세포질 공간이 매우 넓으며 clearance 가 활발하게 일어나 타깃 단백질을 찾기 매우 까다롭다.
이러한 문제를 해결하기 위해 이번 연구에서는 insect cell 발현 시스템을 사용하고자 한다. Insect cell의 경우 다른 동물세포 배양에 비해 조건이 까다롭지 않고, native 에 가까운 단백질 PTM이 일어나며 특정 promoter 를 사용 하는 경우 단백질 발현 양이 매우 높아 90시간 이상 단백질 발현한 경우 세포 안에서 단결정이 생기는 사례가 있다. 이러한 특징을 이용하여 단백질이 accumulation 되기 직전의 조건을 탐색한 뒤 이 부분에 대한 cryo-ET 이미징을 한다면 타깃 단백질에 대한 구조 분석을 단백질 정제 없이 진행 할 수 있다.

□ 연구개발성과
타깃 단백질의 구조를 분석 하는데에 실패함.

□ 연구개발성과 활용계획 및 기대 효과
Vesicle 내부에 단백질 결정이 생성된 것을 관찰할 수 있었는데, 이 관찰을 기반으로 세포내 단백질 결정 생성에 대한 추가 연구가 가능할 것으로 생각됨.

(출처 : 요약문 2p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 요 약 문 ... 2
• 목차 ... 4
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 5
• 2. 연구개발과제의 수행 과정 및 수행 내용 ... 5
• 3. 연구개발과제의 수행 결과 및 목표 달성 정도 ... 7
• 1) 연구수행 결과 ... 7
• 2) 목표 달성 수준 ... 13
• 4. 목표 미달 시 원인분석 ... 14
• 1) 목표 미달 원인(사유) 자체분석 내용 ... 14
• 2) 자체 보완활동 ... 14
• 3) 연구개발 과정의 성실성 ... 14
• 5. 연구개발성과의 관련 분야에 대한 기여 정도 ... 14
• 6. 연구개발성과의 관리 및 활용 계획 ... 14
• 끝페이지 ... 16