초록 ▼

□ 연구개요
본 연구과제는 Th1/Th17 세포의 항원 특이적 또는 비특이적 작용이 구강상피세포 내 세균 감염 제어 및 상피 장벽기능에 미치는 영향 평가를 통해 구강상피 감염을 유발하는 세균에 대한 helper T 세포 아형의 세포매개 면역반응을 규명하는데 있다.

□ 연구 목표대비 연구결과
▪ 구강상피세포에 Ec를 감염시켰을 때 또한 Ec의 세포 내 생존이 증가하는 철 이온 결핍 조건에서 항세균 작용물질과 CD4 T 림프구와 상호작용에 필요한 세포부착 인자 발현을 전사체 비교분석 및 이를 통한 단백질 발현 비

□ 연구개요
본 연구과제는 Th1/Th17 세포의 항원 특이적 또는 비특이적 작용이 구강상피세포 내 세균 감염 제어 및 상피 장벽기능에 미치는 영향 평가를 통해 구강상피 감염을 유발하는 세균에 대한 helper T 세포 아형의 세포매개 면역반응을 규명하는데 있다.

□ 연구 목표대비 연구결과
▪ 구강상피세포에 Ec를 감염시켰을 때 또한 Ec의 세포 내 생존이 증가하는 철 이온 결핍 조건에서 항세균 작용물질과 CD4 T 림프구와 상호작용에 필요한 세포부착 인자 발현을 전사체 비교분석 및 이를 통한 단백질 발현 비교분석을 진행하였다.
▪ 녹색형광단백질와 OT II 항원-발현 Ec 균주를 제작하였으나 항원 특이적인 면역반응이 일어나지 않아 막 외부로 OT II 항원-발현 Ec 균주를 제작하였다.
▪ 면역 시냅시스 형성을 위한 내재 면역반응 (Innate immune response)으로서 IMOK의 역할 규명하기 위해 Class-Ⅱ MHC,class II MHC, CD40, ICAM-1 발현을 확인하였다.
▪ 배양접시에서 OT-II_GFP_Ec 항원-특이적 또는 비특이적인 Th1/Th17세포가 OT-II_GFP_ Ec에 감염된 구강상피세포 (IMOK)에 대해 보이는 면역반응 비교 분석을 위해 OTII 생쥐에서 분리한 Th1/Th17 세포로 분화시켰다. 구강상피세포는 OT-II Ec 유래 항원을 제시하여 OT-II 특이적인 Th1 및 Th17 세포를 모두 활성화시켜 전염증성 사이토카인의 분비를 유도하였다. 또한, 이러한 결과는 IMOK가 APC와 같은 기능을 유사하게 할 수 있음을 증명한 것이다.
▪ OT-II Ec와 항원 특이적 Th1 세포의 공동배양은 IMOK 세포의 사멸을 증가시키는 경향이 있었지만, 세포 내 대장균을 효율적으로 제거하는 데 도움이 되었다. 대조적으로, OT-II Ec와 Th17 세포와의 공동배양은 IMOK 세포의 사멸을 증가 시키지만 Th1과 비교하여 대장균을 효과적으로 제거하지 못하였다. 이러한 결과는 감염된 구강상피세포에 대한 Th 아형에 따른 세포매개 면역반응을 처음으로 제시한 것으로 추가적인 검증들이 남아 있다.
▪ 전반적으로, 이 연구는 OT-II Ec에 감염된 구강상피세포가 항원 특이적 Th1/Th17세포의 면역반응을 유도할 수 있으며, 그 감염제어 면역반응 차이점의 가능성을 처음으로 규명하였다. 또한, 이러한 결과는 OLP 뿐만 아니라 감염성 면역질환을 이해하고 치료 방법을 찾는데 기여 할 것으로 기대된다.

□ 연구개발성과의 활용 계획 및 기대효과(연구개발결과의 중요성)
▪ 연구개발 결과의 중요성
- GFP_Ec와 OT II_GFP_Ec는 생체(동물모델) 내 감염전파를 추적하고 항원-특이적 T 세포 반응을 연구하는데 많은 편의를 제공할 것이다.
- Ec와 구강상피세포를 모델로 이용해 얻게 될 상피 세균감염에 대응하는 T 세포 매개 면역반응에 대한 지식은 구강 뿐 아니라 피부, 호흡기, 장점막에서 감염/염증성 질환을 이해하는데 매우 유용할 것이다.
- 본 연구결과는 구강편평태선, 치주염, 염증성 장질환, 건선과 같이 세균의 상피감염 및 침투를 동반하는 다양한 염증성 질환에 새로운 치료전략을 제공할 수 있을 것이다.

(출처 : 연구결과 요약문 2p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 연구결과 요약문 ... 2
• 목차 ... 3
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 4
• 1) 최종 및 연차별 연구목표 ... 4
• 2) 연구내용, 연구범위 및 평가착안점 ... 4
• 3) 연구의 필요성 ... 5
• 4) 연구가설 및 도출근거 ... 5
• 2. 연구개발과제의 수행 과정 및 수행 내용 ... 6
• 가) IMOK가 Ec 7.2에 감염시 철분 결핍이 IMOK의 전사체에 미치는 영향 비교 분석 ... 6
• 나) 녹색형광단백질(GFP)과 OT-II 펩티드를 발현하는 재조합 대장균(Ec) 균주 제작 ... 8
• 다) OVA_immunized OTⅡ 마우스에 GFP_OTⅡ_Ec7.2 구강접종으로 Ec7.2 특이적 면역반응의 유도 ... 10
• 라) 염증성 Cytokine 노출 및 Ec7.2 감염이 IMOK의 calss-II MHC, CD40, ICAM-1 발현에 미치는 영향 ... 11
• 마) 림프절은 비장과 비교하여 OT-II TCR CD4+ T 세포가 많이 분포 ... 12
• 바) Th 세포와 구강상피세포의 혼합배양을 위한 배양조건 확립: Th 세포의 분화 수준 평가 ... 12
• 사) 구강상피세포는 항원제시세포(APC)처럼 OT-II(323-339)를 Th1 세포에 제시 확인 및 이로 인한 T 세포 매개 면역반응 유도 비교 분석: 균주 막 외부에 발현되는 OT-II(323-339) 검증 ... 13
• 아) 효과적인 T 세포 매개 면역반응 유도를 위한 OT-II 펩티드를 균주 막 외부에 발현하는 재조합 Ec 균주 신규 제작 ... 14
• 자) Th1 및 Th17 세포가 구강상피세포 내 Ec 생존에 미치는 영향 ... 15
• 3. 연구개발과제의 수행 결과 및 목표 달성 수준 ... 16
• 1) 정성적 연구개발성과(연구개발결과) ... 16
• 2) 세부 정량적 연구개발성과 ... 17
• 3) 목표 달성 수준 ... 17
• 4) 목표 미달 시 원인 분석 ... 17
• 4. 연구개발성과의 관련 분야에 대한 기여 정도(연구개발결과의 중요성) ... 18
• 5. 연구개발성과의 관리 및 활용 계획 ... 18
• 6. 자체점검표 ... 18
• 7. 참고문헌 ... 19
• 끝페이지 ... 33