초록 ▼

5. 최종 연구결과 요약
1. 제1세부과제명 : 돼지유행성설사병 무침피내용 불활화백신 개발 및 경구용 생백신 적용 (검역본부)
가. 목표(1년차) : 돼지유행성설사병 백신 항원 제조 및 효능평가
1) 최적 돼지유행성설사병 불활화 및 경구용 생백신 후보주 선발 및 항원생산량 확인
○ PED 불활화백신 후보주 선발 : 국내 최신 유행주, G2b type, SGP-M1주 분리 및 80 계대 후 10^8.0TCID₅₀/mL까지 고역가 배양 완료
○ PED 생백신 후보주 선발

5. 최종 연구결과 요약
1. 제1세부과제명 : 돼지유행성설사병 무침피내용 불활화백신 개발 및 경구용 생백신 적용 (검역본부)
가. 목표(1년차) : 돼지유행성설사병 백신 항원 제조 및 효능평가
1) 최적 돼지유행성설사병 불활화 및 경구용 생백신 후보주 선발 및 항원생산량 확인
○ PED 불활화백신 후보주 선발 : 국내 최신 유행주, G2b type, SGP-M1주 분리 및 80 계대 후 10^8.0TCID₅₀/mL까지 고역가 배양 완료
○ PED 생백신 후보주 선발 : Spike gene의 변이를 유도한 약독화 바이러스(G2b type) HSGP주 분리 및 150계대 후 10^7.5TCID₅₀/ml까지 고역가 배양 완료
2) PED 불활화백신 후보주(SGP-M1)의 안전성, 면역원성 및 면역증강제(adjuvant) 성능 비교 평가
○ PED 불활화백신 후보주(SGP-M1) 안전성 확인: 목적동물에 대한 안전성 평가 결과, 설사 등 병원성 또는 접종부위의 발적, 부종 등의 이상 임상증상은 나타나지 않음
○ PED 불활화백신 후보주(SGP-M1) 면역증강제별 면역원성 확인: Adjuvant와 관계없이 모든 실험군이 대조군보다 높은 중화항체가 확인. 3종의 adjuvants에 따른 항체가 상승 큰 차이 없음
3) PED 경구용 생백신 후보주(HSGP)의 안전성 및 면역원성 평가
○ PED 경구용 생백신 후보주(HSGP) 안전성 확인
- 임상증상: 5일령 포유자돈에 대한 안전성 평가 결과, 경구투여한 모든 개체에서 설사 등의 임상증상이 나타나지 않음.
- 바이러스 배출 조사: 10^6.0TCID₅₀/dose접종 그룹 개체에서 3DPI 분변에서 일부 바이러스 검출
- 조직검사 및 면역염색: 소장(십이지장, 공장, 회장)의 조직검사 및 면역염색 수행 결과, 바이러스 항원은 검출되지 않았음. 음성대조군과 비교 시 소장의 전 영역에 걸쳐 villus height와 crypt depth가 차이가 없거나, 오히려 증가함을 확인
○ PED 경구용 생백신 후보주(HSGP) 면역원성 확인
- 임상증상: 100일령 돼지에 경구투여(10^6.0-7.0TCID₅₀/dose)한 실험군에서 설사 등의 임상증상 없음
- 면역원성 확인: 실험군의 혈청 내 중화항체가는 음성대조군과 비교 때 상승
나. 목표(2년차) : 돼지유행성설사병 무침피내용 불활화백신 및 경구용 생백신 자돈에 대한 면역 효과평가
1) 시험백신들의 근육접종과 피내접종 및 경구 투여 후, 항체가 변화와 지속능 비교 분석
1-1) PED 불활화백신 후보주(SGP-M1) 접종 방법에 따른 항체가 변화와 지속능 분석
○ PED 불활화백신 후보주(SGP-M1) 접종 방법에 따른 안전성 확인
- 돼지(50일령)에 근육(IM)접종과 무침피내접종(ID) 수행
- 임상증상: 설사 등의 병원성과 접종부위의 발적, 부종 등의 이상 임상증상은 나타나지 않음
○ PED 불활화백신 후보주(SGP-M1) 접종 방법에 따른 면역원성 및 지속능 확인
- 면역원성 확인: 접종방법과 상관없이 실험군이 음성대조군보다 혈청 내 중화항체 상승 확인
- Adjuvant 선정: 무침피내접종 실험군의 경우, 20% carbopol을 사용한 실험군이 기타 실험군(20% IMS1313, 20% Montanide gel)에 비해 더 우수한 면역원성 및 안전성을 보여줌
- 접종방법에 따른 면역원성 비교: 근육주사(IM)한 실험군의 혈청 내 중화항체가 무침피 내접종(ID)한 개체들의 중화항체보다 상대적으로 높았음
1-2) PED 경구용 생백신 후보주(HSGP) 항체가 변화와 지속능 분석
○ PED 경구용 생백신 후보주(HSGP) 안전성 확인
- 돼지(50일령)에 경구 접종(1회 또는 2회 접종)
- 임상증상: 설사 또는 기타 임상증상 등의 병원성이 나타나지 않음
○ PED 경구용 생백신 후보주(HSGP) 면역원성 및 지속능 확인
- 접종횟수와 상관없이 실험군이 음성대조군에 비해 상승한 혈청 내 중화항체가 확인
- 2회 접종 실험군의 면역원성 및 지속능이 1회 접종 실험군보다 다소 우수함
2. 제2세부과제명 : 돼지유행성설사병 무침피내용 불활화백신 및 경구용 생백신의 임신모돈에 대한 안전성 및 효능·효과평가 (베트남)
가. 목표(1년차) : 임신모돈에 대한 돼지유행성설사병 무침피내용 불활화백신 안전성 조사
1) 분만전 모돈에 무침피내용 돼지유행성설사병 백신 2회 접종 및 안전성 조사
○ PED 무침피내접종용 불활화백신 후보주(SGP-M1) 임신모돈 접종 후 안전성 확인
- 무침피내접종(10^7.0TCID₅₀/dose)한 임신모돈에서 설사 등의 임상증상 없음, 접종부위의 발적, 부종 등의 증상 없음
○ 무침피내접종(10^7.0TCID₅₀/dose)한 임신모돈에서 유·사산 나타나지 않음
2) 임신모돈의 자돈 분만 성적 및 자돈 체중 비교 분석
○ PED 무침피내접종용 불활화백신 후보주(SGP-M1) 접종 모돈의 출산성적 조사
- 실험군 및 대조군 임신모돈 정상자돈 출산(생존률: 실험군 47/48(97.9), 대조군 34/35(97.1%))
○ 출산자돈 체중을 비교 결과, 실험군과 대조군 사이의 유의한 차이는 없음(자돈평균체중 1.3kg 이상)
나. 목표(2년차) : 임신모돈에 대한 돼지유행성설사병 무침피내용 불활화백신 및 경구용 생백신 방어능 조사·평가
1) 무침피내용 불활화백신 접종된 임신모돈들의 초유 항체가 및 출산자돈의 항체가 비교 분석
○ PED 무침피내접종용 불활화백신 후보주(SGP-M1) 접종 임신모돈 면역원성 조사
- 실험군 임신모돈은 음성 대조군보다 혈청 및 초유 내 높은 중화항체 보유
- 초유 내 IgA 수치도 실험군이 대조군보다 높음
○ PED 무침피내접종용 불활화백신 후보주(SGP-M1) 모돈의 출산자돈 면역원성 조사
- 태어난 포유자돈의 혈청 내 중화항체를 검사한 결과, 음성대조군에 비해 백신 접종한 모돈의 출산자돈에서 높은 중화항체를 보임
2) 무침피내용 불활화백신 접종된 임신모돈으로부터 출산된 자돈에 대한 공격접종 및 방어능 조사
○ PED 무침피내접종용 불활화백신 후보주(SGP-M1) 접종 임신모돈 출산자돈 방어능 조사
- 생존물: 백신접종 모돈 출산자돈 생존율 66.67%(8/12), 대조군 출산자돈 생존율 0% (9/9)
- 임상증상: 백신접종 모돈 출산자돈의 일부(4두 설사로 인한 폐사) 제외한 8두에서 약 한 설사 관찰됨 공격접종 후 5일째 정상분변 배출, 대조군 출산자돈 모두 수양성설사 (score +3) 설사
- 체중: 백신접종 모돈 출산자돈을 대조군과 비교 시 체중감소 없음
- 바이러스 배출 조사: 백신접종 모돈 출산자돈과 대조군 출산자돈에서 분변내 바이러스 배출량의 차이 확인
- 조직검사 및 면역염색: 소장 샘플에 대한 조직검사 결과, 대조군 출산자돈은 백신접종 모돈 출산자돈에 비해 소장 전반에 걸쳐 중등도 이상의 융모 상피층의 세포 변성 및 탈락이 관찰
- 방어효능: PED 무침피내접종용 불활화백신 후보주(SGP-M1) 접종 모돈의 출산자돈에서 충분한 면역원성을 형성할 수 있으며, 야외 PEDV의 감염에 대한 방어능이 확인
3) 경구용 생백신 접종된 임신모돈들의 초유 항체가 및 출산자돈의 항체가 비교 분석
○ PED 경구용 생백신 후보주(HSGP) 임신모돈 접종 후 안전성 확인
- 2회 경구 접종(10^5.0TCID₅₀/dose)한 임신모돈에서 설사 등의 임상증상이 나타나지 않음
- 모든 실험군 및 대조군 개체들에서 임신기간 중 유산 발생 없었음
○ PED 경구용 생백신 후보주(HSGP) 접종 모돈의 출산성적 조사
- 실험군 및 대조군 정상자돈 출산(생존률: 실험군 56/56;(100%), 대조군 32/34(94.1%))
- 출산자돈 체중을 비교 결과, 실험군과 대조군 사이의 유의한 차이는 없음(평균체중:1.5kg 이상)
○ PED 경구용 생백신 후보주(HSGP) 접종 임신모돈 면역원성 조사
- 실험군 임신모돈은 음성 대조군보다 혈청 및 초유 내 높은 중화항체 보유
- 초유 내 IgA 수치도 실험군이 대조군보다 높음
○ PED 경구용 생백신 후보주(HSGP) 모돈의 출산자돈 면역원성 조사
- 태어난 포유자돈의 혈청 내 중화항체를 검사한 결과, 음성대조군에 비해 백신 접종한 모돈의 출산자돈에서 높은 중화항체를 보임
4) 경구용 생백신 접종된 임신모돈으로 부터 출산된 자돈에 대한 공격접종 및 방어능 조사
○ PED 경구용 생백신 후보주(HSGP) 접종 임신모돈 출산자돈 방어능 조사
- 생존율: 백신접종 모돈 출산자돈 생존율 74.3%(11/15), 대조군 출산자돈 생존율 22.2%(2/9)
- 임상증상: 백신접종 모돈 출산자돈의 일부(4두 설사로 인한 폐사) 제외한 11두에서 약한 설사 관찰 후 정상분변 배출, 대조군 출산자돈 모두 수양성설사(score +3) 설사
- 체중: 백신접종 모돈 출산자돈을 대조군과 비교 시 체중감소 없음
- 바이러스 배출 조사: 백신접종 모돈 출산자돈과 대조군 출산자돈에서 분변내 바이러스 배출량의 차이 확인
- 조직검사 및 면역염색: 소장 샘플에 대한 조직검사 결과, 대조군 출산자돈은 백신접종 모돈 출산자돈에 비해 소장 전반에 걸쳐 중등도 이상의 융모 상피층의 세포 변성 및 탈락이 관찰
- 방어효능: PED 경구용 생백신(HSGP) 접종 모돈의 출산자돈에서 충분한 면역원성을 형성할 수 있으며, 야외 PEDV의 감염에 대한 방어능이 확인

(출처 : 요약 2p)

Abstract ▼

In order to prevent diarrhea of sucking piglets causing porcine epidemical diarrhea virus (PEDV), various PED vaccines have been mainly administrated through intramuscule and oral routes. Here, we investigated that comparing of inactivated PEDV vaccine intradermal and intramuscular inoculation in gr

In order to prevent diarrhea of sucking piglets causing porcine epidemical diarrhea virus (PEDV), various PED vaccines have been mainly administrated through intramuscule and oral routes. Here, we investigated that comparing of inactivated PEDV vaccine intradermal and intramuscular inoculation in growing pigs and whether five-day old piglets with lactogenic immunity through pregnant sows with intradermal injection can be protected against virulent PEDV. In the growing pigs vaccinated to intradermal and intramuscular routes with inactivated PEDV vaccine, IFN-r was higher at intradermal vaccination group, but the serum neutralizing antibodies titer and IL-4, IL10 were higher in intramuscular inoculation. Partial defensive effects by intradermal inoculation of an inactivated PED vaccine were also confirmed from virulent PEDV challenge against 5-day old piglets fed the lactogenic immunity through colostrum and milk. Fecal PEDV RNA copy number and diarrhea scoring of the piglet fed the lactogenic immunity showed moderate clinical signs than those of mock group nothing vaccination. The weight of piglets fed the lactogenic immunity decreased after virulent PEDV inoculation but it was recovered from 6 days of post virulent PEDV inoculation. Survival rates for suckling piglets were 70% for intradermal vaccine inoculation and 0% for mock at 6 dpi, respectively. Duodenum and ileum at autopsy for suckling piglets with lactogenic immunity of the intradermal vaccinated and no-vaccinated sows showed significant (p <0.05) villi length gap, respectively, whereas height of villi vs depth of crypt ratio was no significant in duodenum, ileum, and jejunum. Administration through intradermal route showed possible partial protection against virulent PEDV.

(source : Abstract 36p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• I. 연구배경 및 목표 ... 5
• 1. 연구배경 ... 5
• 2. 연구최종목표 ... 7
• 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 8
• II. 연구방법 및 수행전략 ... 9
• 1. 재료 ... 9
• 2. 연구전략 및 방법 ... 9
• III. 연구결과 ... 10
• 1. 제1세부과제명: 돼지유행성설사병 무침피내용 불활화백신 개발 및 경구용 생백신 개발 (검역본부) ... 10
• 2. 제2세부과제명: 돼지유행성설사병 무침피내용 불활화백신 및 경구용 생백신의 임신모돈에 대한 안전성 및 효능 효과평가 (베트남) ... 19
• IV. 연구결과요약 ... 30
• 1. 제1세부과제명 : 돼지유행성설사병 무침피내용 불활화백신 개발 및 경구용 생백신 적용 (검역본부) ... 30
• 2. 제2세부과제명 : 돼지유행성설사병 무침피내용 불활화백신 및 경구용 생백신의 임신모돈 대한 안전성 및 효능 효과평가 (베트남) ... 32
• V. 고 찰 ... 33
• VI. 참고문헌 ... 34
• VII. 영문초록 ... 36
• 끝페이지 ... 36