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정상인 20 명에서 salting-out 방법에 의하여 혈액 그리고 구강세척으로 얻은 구강내 상피세포에서 분리한 DNA를 polymerase chain reaction (이하 PCR로 표기)을 이용한 HLA DR locus DNA typing 을 하여 전통적인 혈청학적 방법의 결과와 비교하였다. 혈액에서 salting-out 방법으로 얻은 DNA의 자외선 260/280nm 흡광도의 비는 1.9±0.04 였으며 그 양은 혈액 1ml 당 11.3±6.4ug 이었고 , 구강내 상피세포에서 얻은 DNA 의 260/280 ...

정상인 20 명에서 salting-out 방법에 의하여 혈액 그리고 구강세척으로 얻은 구강내 상피세포에서 분리한 DNA를 polymerase chain reaction (이하 PCR로 표기)을 이용한 HLA DR locus DNA typing 을 하여 전통적인 혈청학적 방법의 결과와 비교하였다. 혈액에서 salting-out 방법으로 얻은 DNA의 자외선 260/280nm 흡광도의 비는 1.9±0.04 였으며 그 양은 혈액 1ml 당 11.3±6.4ug 이었고 , 구강내 상피세포에서 얻은 DNA 의 260/280 흡광도 비는 1.7±0.06 이었으며 그 양은 구강세척 25ml 당 45.3±26.8ug으로 혈액 5-10ml에서 얻은 DNA의 양과 비슷하였다. 두 경우 모두 PCR에 이용하는데 아무런 문제가 없었다. HLA DNA typing 결과는 혈액과 구강내 상피세포의 결과가 일치하였으며 혈청학적 방법에 의한 결과와도 잘 일치하였다. 본 연구결과 많은 양의 혈액이 요구되고 까다로운 작업이 필요한 혈청학적 방법에 의한 HLA DR typing 대신에 구강상피세포에서 분리한 DNA를 PCR을 이용한 HLA DNA typing에 적용하여 간편하고 정확하게 HLA DR 형을 결정할 수 있었다.

Abstract ▼ AI-Helper

We have undertaken HLA DNA typing (DRB locus) in 20 Korean students by using polymerase chain reaction (PCR) technique with the DNA isolated from the blood and oral mucous membrane cells. Ana the results were compared with those of the serological typing. The genomic DNA from blood and oral mucous m...

We have undertaken HLA DNA typing (DRB locus) in 20 Korean students by using polymerase chain reaction (PCR) technique with the DNA isolated from the blood and oral mucous membrane cells. Ana the results were compared with those of the serological typing. The genomic DNA from blood and oral mucous membrane cells was isolated by the salting-out procedure. The salting-out DNA isolation method is simpler, cheaper and less hazardous than existing methods, and the typical 260/280nm absorbance ratio and yield for the DNA isolated from the blood were 1.9 ±0.04 and 11.3 ±6.4 ug/ml, respectively. And those from the oral mucous membrane cells were 1.7 ±0.06 and 45.28 ±26.8 ug/25ml mouthwash. Both genomic DNA were suitable for PCR. For analysis of HLA DNA sequences, we have used double-PCR. After 35 cycles of primary amplification with DRS common primers, the amplified products were checked by agarose gel electrophoresis and ethidium bromide staining, and the amplified products were diluted and used to the secondary apmlification with allele specific primers. The second amplified products were electrophoresed and identified the DR type. The result of DNA typing with the DNA isolated from the blood and oral mucous membrane cells was the same and well correlated with serological typing.

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