Bacillus thuringiensis 분리균주들의 내독소 단백질 결정체의 정제 및 SDS-PAGE 분석에 관한 연구 Studies on Purification and SDS-PAGE Analysis of δ-endotoxin Protein Crystals Produced by Bacillus thuringiensis Isolates원문보기
1. 본 실험은 토양에서 분리한 B. thuringiensis 분리균주들 (HL28 ~ HL56)의 내독소 결정체를 단계적으로 분리 정제하고 SDS-PAGE를 이용하여 내독소 결정체의 단백질 패턴을 서로 비교하는 것이 목적이다. 2. 정제된 결정체 단백질을 모아 SDS-PAGE를 실시한 결과 대조균주로 사용한 B. thuringiensis var. kurstaki의 결정체 단백질 분자량은 2개의 주요 subunit를 갖는 130 kd 과 67kd 이었고, Lee 등(1986)의 분석과 대체로 일치하였다. 3. 각 분리균주들의 정제된 내독소 결정체의 모양을 ...
1. 본 실험은 토양에서 분리한 B. thuringiensis 분리균주들 (HL28 ~ HL56)의 내독소 결정체를 단계적으로 분리 정제하고 SDS-PAGE를 이용하여 내독소 결정체의 단백질 패턴을 서로 비교하는 것이 목적이다. 2. 정제된 결정체 단백질을 모아 SDS-PAGE를 실시한 결과 대조균주로 사용한 B. thuringiensis var. kurstaki의 결정체 단백질 분자량은 2개의 주요 subunit를 갖는 130 kd 과 67kd 이었고, Lee 등(1986)의 분석과 대체로 일치하였다. 3. 각 분리균주들의 정제된 내독소 결정체의 모양을 위상차 현미경으로 1000배 확대하여 관찰 및 염색, 촬영한 결과 BTK처럼 이중피라미드 꼴을 한 내독소 결정체를 갖는 분리균주는 HL-35, -37, -41, -44, -46, -47, -48, -51, -55, -56 등 모두 10균주이었다. 4. NaBr(30%-70%) 밀도구배원심분리를 행한 결과 B. thuringiensis 분리균주들의 (HL 28~HL56)내독소 결정체층이 생기는 밀도분포는 1.201g/㎤~1.403g/㎤에 걸쳐 넓은 범위로 형성되었다. 5. Culex pipiens과 Bombyx mori의 3rd instar 유충에 독성이 있는 균주들의(HL-33, -34, -35, -38, -39, -45, -47, -51, -55, -56)내독소 결정체 밀도분포는 1.201g/㎤~1.306 g/㎤인 반면 무독성을 나타내는 분리균주들의 내독소결정체 밀도분포는 1.201 g/㎤~1.403 g/㎤이었다. 6. 표준 분자량 단백질로 사용된 BSA, HMW, LMW 등과 BTK의 내독소 단백질 결정체를 대조시료로 하여 각 분리균주들의 내독소 단백질 결정체의 분자량을 계산 비교한 결과 특히 HL-32, -33, -34, -36, -40, -41, -43, -47, -51, -56등 모두 10균주가 BTK의 내독소 결정체 단백질 분자량과 유사한 67kd의 subunit 분자량을 가졌다. 7. 이상의 결과를 종합하여 볼 때 28 분리 균주(HL-28~HL-56)중에서 HL-47, HL-51, HL-56 등 3 균주가 Bacillus thuringiensis var. kurstaki와 증식성상 및 생화학적 특성 등에 있어 가장 유사하다고 추정된다.
1. 본 실험은 토양에서 분리한 B. thuringiensis 분리균주들 (HL28 ~ HL56)의 내독소 결정체를 단계적으로 분리 정제하고 SDS-PAGE를 이용하여 내독소 결정체의 단백질 패턴을 서로 비교하는 것이 목적이다. 2. 정제된 결정체 단백질을 모아 SDS-PAGE를 실시한 결과 대조균주로 사용한 B. thuringiensis var. kurstaki의 결정체 단백질 분자량은 2개의 주요 subunit를 갖는 130 kd 과 67kd 이었고, Lee 등(1986)의 분석과 대체로 일치하였다. 3. 각 분리균주들의 정제된 내독소 결정체의 모양을 위상차 현미경으로 1000배 확대하여 관찰 및 염색, 촬영한 결과 BTK처럼 이중피라미드 꼴을 한 내독소 결정체를 갖는 분리균주는 HL-35, -37, -41, -44, -46, -47, -48, -51, -55, -56 등 모두 10균주이었다. 4. NaBr(30%-70%) 밀도구배원심분리를 행한 결과 B. thuringiensis 분리균주들의 (HL 28~HL56)내독소 결정체층이 생기는 밀도분포는 1.201g/㎤~1.403g/㎤에 걸쳐 넓은 범위로 형성되었다. 5. Culex pipiens과 Bombyx mori의 3rd instar 유충에 독성이 있는 균주들의(HL-33, -34, -35, -38, -39, -45, -47, -51, -55, -56)내독소 결정체 밀도분포는 1.201g/㎤~1.306 g/㎤인 반면 무독성을 나타내는 분리균주들의 내독소결정체 밀도분포는 1.201 g/㎤~1.403 g/㎤이었다. 6. 표준 분자량 단백질로 사용된 BSA, HMW, LMW 등과 BTK의 내독소 단백질 결정체를 대조시료로 하여 각 분리균주들의 내독소 단백질 결정체의 분자량을 계산 비교한 결과 특히 HL-32, -33, -34, -36, -40, -41, -43, -47, -51, -56등 모두 10균주가 BTK의 내독소 결정체 단백질 분자량과 유사한 67kd의 subunit 분자량을 가졌다. 7. 이상의 결과를 종합하여 볼 때 28 분리 균주(HL-28~HL-56)중에서 HL-47, HL-51, HL-56 등 3 균주가 Bacillus thuringiensis var. kurstaki와 증식성상 및 생화학적 특성 등에 있어 가장 유사하다고 추정된다.
The patterns of density, shape and molecular weight of endotoxin protein crystals produced by Bacillus thuringiensis var. kurstaki and Bacillus thuringien-sis isolates(HL 28-HL 56) were investigated by stages. Delta endotoxin crystals of twenty nine strains were purified by NaBr(30%~70%) density gra...
The patterns of density, shape and molecular weight of endotoxin protein crystals produced by Bacillus thuringiensis var. kurstaki and Bacillus thuringien-sis isolates(HL 28-HL 56) were investigated by stages. Delta endotoxin crystals of twenty nine strains were purified by NaBr(30%~70%) density gradient centrifugation and observed under phase contrast microscope and then analyzed by 10% SDS-PAGE finally Crystal bands of the strains were widely formed at the density of 1.201 g/㎤-1.403 g/㎤ range. The crystal shapes of 15 isolates from 28 isolates(HL 28~HL 56) were elliptical, 10 isolates were almost bipyramidal, 2 isolates were irregular, 1 isolate was tetragonal. Result of 10% SDS-PAGE for the crystals showed that molecular weights of subunit endotoxin of 10 isolates(HL-32, -33, -34, -36, -40, -41, -43, -47, -51, -56) out of 28 B thuringiensisolates were almost similar to 67 Kd, molecular weight of main toxicity of B. thuringiensis var. kurstaki.
The patterns of density, shape and molecular weight of endotoxin protein crystals produced by Bacillus thuringiensis var. kurstaki and Bacillus thuringien-sis isolates(HL 28-HL 56) were investigated by stages. Delta endotoxin crystals of twenty nine strains were purified by NaBr(30%~70%) density gradient centrifugation and observed under phase contrast microscope and then analyzed by 10% SDS-PAGE finally Crystal bands of the strains were widely formed at the density of 1.201 g/㎤-1.403 g/㎤ range. The crystal shapes of 15 isolates from 28 isolates(HL 28~HL 56) were elliptical, 10 isolates were almost bipyramidal, 2 isolates were irregular, 1 isolate was tetragonal. Result of 10% SDS-PAGE for the crystals showed that molecular weights of subunit endotoxin of 10 isolates(HL-32, -33, -34, -36, -40, -41, -43, -47, -51, -56) out of 28 B thuringiensisolates were almost similar to 67 Kd, molecular weight of main toxicity of B. thuringiensis var. kurstaki.
주제어
#Bacillus thuringiensis 분리균주 내독소 단백질 결정체 정제 SDS-PAGE 바실루스 투링기엔시스
학위논문 정보
저자
강이석
학위수여기관
建國大學校 大學院
학위구분
국내석사
학과
생물학과
발행연도
1991
총페이지
vii, 38p.
키워드
Bacillus thuringiensis 분리균주 내독소 단백질 결정체 정제 SDS-PAGE 바실루스 투링기엔시스
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