표적세포와 반응하면 항원-항체 반응으로 인해 그 구조가 불안정해짐으로써 포집된 약물이 방출되는 특성을 가진 표적 민감성 리포좀을 제조하여 in vitro상에서 약물 방출 효율을 조사해보았다. Calcein을 이용한 실험에서 보여주듯이, anti-H-dK^(b)type의 Ab에 특이적인 반응을 하는 EL4 cell line과 RMA cell line에서 항원-항체 결합으로 인한 방출 현상이 나타났으며 비표적세포들에서는 약간의 방출만을 보여주었는데, 이는 시간에따른 Calcein의 비특이적인 방출로 추정된다. 약물이 포집된 표적 민감성 리포좀의 제조시 전형적인 방법으로는 ...
표적세포와 반응하면 항원-항체 반응으로 인해 그 구조가 불안정해짐으로써 포집된 약물이 방출되는 특성을 가진 표적 민감성 리포좀을 제조하여 in vitro상에서 약물 방출 효율을 조사해보았다. Calcein을 이용한 실험에서 보여주듯이, anti-H-dK^(b)type의 Ab에 특이적인 반응을 하는 EL4 cell line과 RMA cell line에서 항원-항체 결합으로 인한 방출 현상이 나타났으며 비표적세포들에서는 약간의 방출만을 보여주었는데, 이는 시간에따른 Calcein의 비특이적인 방출로 추정된다. 약물이 포집된 표적 민감성 리포좀의 제조시 전형적인 방법으로는 포집율이 낮았으나 DOPA의 첨가로 인해 상당시 증가됨을 볼 수 있었는데 이는 DOPA가 PE-liposome을 안정화 시키는 역할을 하고 있음을 확인시켜 주었다. in vitro에서 표적세포에 대한 약물 전달 실험 결과 에서는 표적세포와 비표적세포간에 약물 방출에 있어서 IC_(50)값에 있어서 선별적인 차이가 보였으며, 이는 표적세포와의 반응이 특이적임을 보여 주고 있다. 한편 온도 민감성 리포좀을 이용했을 때의 표적세포에 대한 약물 전달 비교 실험에서는 표적 민감성 리포좀 보다 약간 낮은 IC_(50)값을 보여 주었다. 한편, NBD-Ab를 이용한 표적세포들과의 결합력과 Calcein방출성 그리고 약물전달 효율의 상관관계에 있어서는 NBD반응성이 좋은 세포주들이 거의비례적으로 Calcein방출성과 약물전달 효율이 좋았으며 반응성이 낮은 세포주들에 있어서는 상당히 낮은 분산된 값을 보여주었다. 앞의 실험 결과들을 토대로, 표적 민감성 리포좀이 in vivo상에서 획기적인 효과를 거두기 위해서는 리포좀이 RES(reticuloendothelial system)에 의해 포획 되지 않고 암이 있는 조직까지 안정한 상태로 도달해야 하는 문제점이 해결되어야 하며, 이는 PEG-PE와 같은 성분을 표적민감성 리포좀에 삽입시켜 (stealth liposome) RES에 의한 손실을 최대한 줄임으로써 가능해지리라 생각한다. 또한 암세포의 특이적 항원에 대해 반응성이 우수한 단일 클론 항체의 개발과 생산,그리고 리포좀의 약물포집대 방출비를 최대로하는 안정한 리포좀 제조 기법의 개발등 여러 가지 복합적인 문제점들이 입체적으로 해결되야만이 성공적인 암치료 효과를 기대할 수 있을 것이다.
표적세포와 반응하면 항원-항체 반응으로 인해 그 구조가 불안정해짐으로써 포집된 약물이 방출되는 특성을 가진 표적 민감성 리포좀을 제조하여 in vitro상에서 약물 방출 효율을 조사해보았다. Calcein을 이용한 실험에서 보여주듯이, anti-H-dK^(b)type의 Ab에 특이적인 반응을 하는 EL4 cell line과 RMA cell line에서 항원-항체 결합으로 인한 방출 현상이 나타났으며 비표적세포들에서는 약간의 방출만을 보여주었는데, 이는 시간에따른 Calcein의 비특이적인 방출로 추정된다. 약물이 포집된 표적 민감성 리포좀의 제조시 전형적인 방법으로는 포집율이 낮았으나 DOPA의 첨가로 인해 상당시 증가됨을 볼 수 있었는데 이는 DOPA가 PE-liposome을 안정화 시키는 역할을 하고 있음을 확인시켜 주었다. in vitro에서 표적세포에 대한 약물 전달 실험 결과 에서는 표적세포와 비표적세포간에 약물 방출에 있어서 IC_(50)값에 있어서 선별적인 차이가 보였으며, 이는 표적세포와의 반응이 특이적임을 보여 주고 있다. 한편 온도 민감성 리포좀을 이용했을 때의 표적세포에 대한 약물 전달 비교 실험에서는 표적 민감성 리포좀 보다 약간 낮은 IC_(50)값을 보여 주었다. 한편, NBD-Ab를 이용한 표적세포들과의 결합력과 Calcein방출성 그리고 약물전달 효율의 상관관계에 있어서는 NBD반응성이 좋은 세포주들이 거의비례적으로 Calcein방출성과 약물전달 효율이 좋았으며 반응성이 낮은 세포주들에 있어서는 상당히 낮은 분산된 값을 보여주었다. 앞의 실험 결과들을 토대로, 표적 민감성 리포좀이 in vivo상에서 획기적인 효과를 거두기 위해서는 리포좀이 RES(reticuloendothelial system)에 의해 포획 되지 않고 암이 있는 조직까지 안정한 상태로 도달해야 하는 문제점이 해결되어야 하며, 이는 PEG-PE와 같은 성분을 표적민감성 리포좀에 삽입시켜 (stealth liposome) RES에 의한 손실을 최대한 줄임으로써 가능해지리라 생각한다. 또한 암세포의 특이적 항원에 대해 반응성이 우수한 단일 클론 항체의 개발과 생산,그리고 리포좀의 약물포집대 방출비를 최대로하는 안정한 리포좀 제조 기법의 개발등 여러 가지 복합적인 문제점들이 입체적으로 해결되야만이 성공적인 암치료 효과를 기대할 수 있을 것이다.
Target-sensitive liposomes ,as their name implies, are designed to destabilize upon binding to the target cell, and to release their contents in high concentrations at the cell surface. In this study, we made a target-sensitive liposome including monoclonal antibody and characterize their destabiliz...
Target-sensitive liposomes ,as their name implies, are designed to destabilize upon binding to the target cell, and to release their contents in high concentrations at the cell surface. In this study, we made a target-sensitive liposome including monoclonal antibody and characterize their destabilization effects. Our newly developed technique for the coupling of monoclonal antibodies to liposome was used to study the specific delivery of Doxorubicin (DOX) and Methotrexate (MTX) to cellular targets in vitro . PE-liposomes containing Calcein, DOX and MTX were prepared by palmitoyl-antibody against determinants of molecules encoded by the major histocompatibility complex of the murine H-2K^b haplotype. DOPA(dioleoyl phosphatidic acid) was also added to stabilize PE-liposome and to increase drug encapsulation rate. These were incubated with various types of target cells, only H-2K^btypes of target cells(EL-4, RMA)showed evidence of Calcein releasing and drug effect, demonstrating that interaction of the liposomes with target cells was specific. However the therapeutic potential of this system will be realized after concerns about RES avoidance, stability in circulation, until target binding, and cellular uptake of released drug before diffusion away from the cells in vivo are addressed.
Target-sensitive liposomes ,as their name implies, are designed to destabilize upon binding to the target cell, and to release their contents in high concentrations at the cell surface. In this study, we made a target-sensitive liposome including monoclonal antibody and characterize their destabilization effects. Our newly developed technique for the coupling of monoclonal antibodies to liposome was used to study the specific delivery of Doxorubicin (DOX) and Methotrexate (MTX) to cellular targets in vitro . PE-liposomes containing Calcein, DOX and MTX were prepared by palmitoyl-antibody against determinants of molecules encoded by the major histocompatibility complex of the murine H-2K^b haplotype. DOPA(dioleoyl phosphatidic acid) was also added to stabilize PE-liposome and to increase drug encapsulation rate. These were incubated with various types of target cells, only H-2K^btypes of target cells(EL-4, RMA)showed evidence of Calcein releasing and drug effect, demonstrating that interaction of the liposomes with target cells was specific. However the therapeutic potential of this system will be realized after concerns about RES avoidance, stability in circulation, until target binding, and cellular uptake of released drug before diffusion away from the cells in vivo are addressed.
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