Purification and characterization of peroxidase during callus induction and plant regeneration from cotyledon of perilla : 들깨 자엽의 Callus 유기 및 재분화의 유도와 Peroxidase 정제원문보기
들깨의 자엽으로부터 Callus의 유기 및 재분화를 유도하기 위하여 MS 기본배지에 생장조정제 NAA 0.1, 0.5, 1.0, 1.5 및 2.0 ㎎/ℓ과 BA 0.5, 1.0 및 1.5 ㎎/ℓ을 조합하여 자엽과 하배축 조직을 치상하고 2, 3, 4, 5 및 6주로 나누어 재분화 과정과 단백질 및 peroxidase의 변화를 조사한 결과는 다음과 같다. BA 0.5 ㎎/ℓ와 NAA 0.5 ㎎/ℓ를 첨가한 배지에서 자엽과 하배축 모두 callus의 유기 및 재분화 정도가 높았고, BA 0.5 ㎎/ℓ와 NAA 01 ㎎/ℓ을 첨가한 배지에서만 뿌리가 발생하였다. 단백질의 함량은 배양기간의 경과에 따라 증가하는 경향을 나타내었고, 각 부위별 peroxidase activity는 자엽이 가장 낮게 나타났다. 자엽의 peroxidase specific activity는 배양전 0.66 (μ㏖s/min/㎎ ...
들깨의 자엽으로부터 Callus의 유기 및 재분화를 유도하기 위하여 MS 기본배지에 생장조정제 NAA 0.1, 0.5, 1.0, 1.5 및 2.0 ㎎/ℓ과 BA 0.5, 1.0 및 1.5 ㎎/ℓ을 조합하여 자엽과 하배축 조직을 치상하고 2, 3, 4, 5 및 6주로 나누어 재분화 과정과 단백질 및 peroxidase의 변화를 조사한 결과는 다음과 같다. BA 0.5 ㎎/ℓ와 NAA 0.5 ㎎/ℓ를 첨가한 배지에서 자엽과 하배축 모두 callus의 유기 및 재분화 정도가 높았고, BA 0.5 ㎎/ℓ와 NAA 01 ㎎/ℓ을 첨가한 배지에서만 뿌리가 발생하였다. 단백질의 함량은 배양기간의 경과에 따라 증가하는 경향을 나타내었고, 각 부위별 peroxidase activity는 자엽이 가장 낮게 나타났다. 자엽의 peroxidase specific activity는 배양전 0.66 (μ㏖s/min/㎎ protein) 에서 배양 3주후에는 6.90 (μ㏖s/min/㎎ protein)으로, 6주후에는 7.07 (μ㏖s/min/㎎ protein)로 배양기간의 경과에 따라 증가하는 경향이었다. SDS-PAGE의 결과 자엽에서는 다양한 polypeptide가 나타났으나 배양 3주 후에는 30KD의 Polypeptide가 진하게 나타났으며 배양기간의 경과에 따라 증가하였다. Peroxidase isozyme pattern의 변화는 배양 3주경에 2개의 band가 나타났고, 6주경에는 7개로 peroxidase isozyme band가 증가되었으며, 하위 2개의 band가 진하게 나타났고 상위 band들은 약하게 나타났다. 30KD의 polypeptide를 DEAE-cellulose와 Sephacryl S-200을 이용하여 정제한 결과 peroxidase activity가 없는 single band와 peroxidase activity가 있는 30KD-29KD의 double band를 얻었고, peroxidase activity가 있는 30KD 부분을 N-terminal sequence한 결과 tea APX와 다소 높은 homology를 보였다. 30KD의 single-banded polypeptide와 30KD-29KD의 double-banded polypeptide를 이용하여 항체를 제조하여 Westernblot analysis한 결과 single band의 경우 배양전 자엽에서는 34KD과 26KD의 polypeptide band가 나타났으며, 배양 3주후에는 30KD의 polypeptide band가 나타났고 배양기간에 따라 진하게 발현되었다. Double band의 경우 배양전 자엽에서는 발현되지 않았으며 배양 후 3주 및 4주에서는 30KD의 polypeptide band가 나타났고, 5주 후에서는 30KD-29KD의 polypeptide band가 나타났으며 배양기간의 경과에 따라 진하게 발현되었다.
들깨의 자엽으로부터 Callus의 유기 및 재분화를 유도하기 위하여 MS 기본배지에 생장조정제 NAA 0.1, 0.5, 1.0, 1.5 및 2.0 ㎎/ℓ과 BA 0.5, 1.0 및 1.5 ㎎/ℓ을 조합하여 자엽과 하배축 조직을 치상하고 2, 3, 4, 5 및 6주로 나누어 재분화 과정과 단백질 및 peroxidase의 변화를 조사한 결과는 다음과 같다. BA 0.5 ㎎/ℓ와 NAA 0.5 ㎎/ℓ를 첨가한 배지에서 자엽과 하배축 모두 callus의 유기 및 재분화 정도가 높았고, BA 0.5 ㎎/ℓ와 NAA 01 ㎎/ℓ을 첨가한 배지에서만 뿌리가 발생하였다. 단백질의 함량은 배양기간의 경과에 따라 증가하는 경향을 나타내었고, 각 부위별 peroxidase activity는 자엽이 가장 낮게 나타났다. 자엽의 peroxidase specific activity는 배양전 0.66 (μ㏖s/min/㎎ protein) 에서 배양 3주후에는 6.90 (μ㏖s/min/㎎ protein)으로, 6주후에는 7.07 (μ㏖s/min/㎎ protein)로 배양기간의 경과에 따라 증가하는 경향이었다. SDS-PAGE의 결과 자엽에서는 다양한 polypeptide가 나타났으나 배양 3주 후에는 30KD의 Polypeptide가 진하게 나타났으며 배양기간의 경과에 따라 증가하였다. Peroxidase isozyme pattern의 변화는 배양 3주경에 2개의 band가 나타났고, 6주경에는 7개로 peroxidase isozyme band가 증가되었으며, 하위 2개의 band가 진하게 나타났고 상위 band들은 약하게 나타났다. 30KD의 polypeptide를 DEAE-cellulose와 Sephacryl S-200을 이용하여 정제한 결과 peroxidase activity가 없는 single band와 peroxidase activity가 있는 30KD-29KD의 double band를 얻었고, peroxidase activity가 있는 30KD 부분을 N-terminal sequence한 결과 tea APX와 다소 높은 homology를 보였다. 30KD의 single-banded polypeptide와 30KD-29KD의 double-banded polypeptide를 이용하여 항체를 제조하여 Westernblot analysis한 결과 single band의 경우 배양전 자엽에서는 34KD과 26KD의 polypeptide band가 나타났으며, 배양 3주후에는 30KD의 polypeptide band가 나타났고 배양기간에 따라 진하게 발현되었다. Double band의 경우 배양전 자엽에서는 발현되지 않았으며 배양 후 3주 및 4주에서는 30KD의 polypeptide band가 나타났고, 5주 후에서는 30KD-29KD의 polypeptide band가 나타났으며 배양기간의 경과에 따라 진하게 발현되었다.
Cotyledon and hypocotyl of perilla were cultured on MS medium supplemented with the combined concentration of growth regulators of NAA (0.1, 0.5, 1.0, and 2.0mg/ℓ) and BA (0.5, 1.0, and 1.5mg/ℓ). Change of proteins and peroxidase activity from the callus were cultured in order to illustrate the bioc...
Cotyledon and hypocotyl of perilla were cultured on MS medium supplemented with the combined concentration of growth regulators of NAA (0.1, 0.5, 1.0, and 2.0mg/ℓ) and BA (0.5, 1.0, and 1.5mg/ℓ). Change of proteins and peroxidase activity from the callus were cultured in order to illustrate the biochemical changes during regeneration of the callus at 2^(nd), 3^(rd), 4^(th), 5^(th), and 6^(th) weeks. The best regeneration were observed in a combined concentration of 0.5mg/ℓ of BA and NAA. The protein content was increased as the culture period. Peroxidase specific activity of cotyledon, hypocotyl, and root was showed the least activity in cotyledon. Peroxidase specific activity showed a trend of increase from 6.90 (μmoles/min/mg protein) before the culture start to 7.07 at 6^(th) weeks culture. The banding pattern of protein was analyzed for 3^(rd), 4^(th), 5^(th), and 6^(th) week culture of cotyledon using SDS-PAGE. A polypeptide band of 30KD was getting obvious as culture week increased. Native-PAGE showed the presence of two bands at 3^(rd) week culture and three bands at 4^(th) week culture. Seven bands were detected from the 5^(th) and 6^(th) week culture, and the two bands were dark against the bands at 3^(rd) and 4^(th) week culture. New bands clearly detected at 5^(th) and 6^(th) week culture, although they were faint before. The purification was to apply polypeptide band of 30KD to DEAE-Cellulose and Sephacryl S-200. The purified enzyme gave single-banded 30KD polypeptide which showed no peroxidase activity and the double-banded 30KD-29KD polypeptide which showed peroxidase activity. The purified enzyme and tea APX showed relatively high sequence homology, similarity to pea APX was low. Westernblot analysis showed difference between single-banded 30KD and double-banded 30KD-29KD polypeptides. The westernblot analysis showed reaction for 3^(rd), 4^(th), 5^(th), and 6^(th) week culture of perilla cotyledon with the same amount of protein. The result obtained that was getting obvious as culture period increases of 30KD single band, but expression of cotyledon was revealed 34KD and 26KD polypeptide bands. On the other hand, there were expression of 30KD polypeptide band at 3^(rd) and 4^(th) weeks culture and 30KD-29KD polypeptide bands at 5^(th) and 6^(th) weeks culture.
Cotyledon and hypocotyl of perilla were cultured on MS medium supplemented with the combined concentration of growth regulators of NAA (0.1, 0.5, 1.0, and 2.0mg/ℓ) and BA (0.5, 1.0, and 1.5mg/ℓ). Change of proteins and peroxidase activity from the callus were cultured in order to illustrate the biochemical changes during regeneration of the callus at 2^(nd), 3^(rd), 4^(th), 5^(th), and 6^(th) weeks. The best regeneration were observed in a combined concentration of 0.5mg/ℓ of BA and NAA. The protein content was increased as the culture period. Peroxidase specific activity of cotyledon, hypocotyl, and root was showed the least activity in cotyledon. Peroxidase specific activity showed a trend of increase from 6.90 (μmoles/min/mg protein) before the culture start to 7.07 at 6^(th) weeks culture. The banding pattern of protein was analyzed for 3^(rd), 4^(th), 5^(th), and 6^(th) week culture of cotyledon using SDS-PAGE. A polypeptide band of 30KD was getting obvious as culture week increased. Native-PAGE showed the presence of two bands at 3^(rd) week culture and three bands at 4^(th) week culture. Seven bands were detected from the 5^(th) and 6^(th) week culture, and the two bands were dark against the bands at 3^(rd) and 4^(th) week culture. New bands clearly detected at 5^(th) and 6^(th) week culture, although they were faint before. The purification was to apply polypeptide band of 30KD to DEAE-Cellulose and Sephacryl S-200. The purified enzyme gave single-banded 30KD polypeptide which showed no peroxidase activity and the double-banded 30KD-29KD polypeptide which showed peroxidase activity. The purified enzyme and tea APX showed relatively high sequence homology, similarity to pea APX was low. Westernblot analysis showed difference between single-banded 30KD and double-banded 30KD-29KD polypeptides. The westernblot analysis showed reaction for 3^(rd), 4^(th), 5^(th), and 6^(th) week culture of perilla cotyledon with the same amount of protein. The result obtained that was getting obvious as culture period increases of 30KD single band, but expression of cotyledon was revealed 34KD and 26KD polypeptide bands. On the other hand, there were expression of 30KD polypeptide band at 3^(rd) and 4^(th) weeks culture and 30KD-29KD polypeptide bands at 5^(th) and 6^(th) weeks culture.
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